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DOI: 10.3791/51341-v
Donna Cvetković*1, Cameron Glenn-Franklin Goertzen*1, Moshmi Bhattacharya1,2,3
1Department of Physiology and Pharmacology, Schulich School of Medicine and Dentistry,University of Western Ontario, 2Department of Oncology, Schulich School of Medicine and Dentistry,University of Western Ontario, 3Lawson Health Research Institute
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article provides methodologies for three-dimensional (3D) assays to quantify breast cancer cell invasion. The procedures include setting up assays, quantification, and data analysis, along with examining membrane integrity loss during cell invasion.
Este artigo proporciona metodologias detalhadas para a utilização de ensaios tridimensionais (3D), para quantificar a invasão das células do cancro da mama. Especificamente, vamos discutir os procedimentos necessários para a criação de tais ensaios, quantificação e análise de dados, bem como métodos para analisar a perda da integridade da membrana que ocorre quando as células invadem.
O objetivo geral do procedimento a seguir é avaliar a capacidade invasiva das células cancerígenas usando um ensaio de invasão tridimensional. Isso é feito primeiro cultivando células cancerígenas em uma matriz de membrana basal. A invasão celular da matriz é então observada por cinco ou mais dias por meio de microscopia de luz.
Na etapa final, as células são marcadas com anticorpos fluorescentes para localização das proteínas de interesse. Em última análise, a taxa de invasão de células cancerígenas e as alterações resultantes na expressão de proteínas podem ser analisadas por microscopia imunofluorescente. A principal vantagem desta técnica sobre as técnicas existentes, como o ensaio de invasão da câmara de Transwell, é que o ensaio de invasão de gel principal 3D imita melhor o ambiente in vivo que o câncer resolve em crescimento.
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