Eletrofisiológica Gravação De Drosophila Labellar Prove sensilla

O objetivo geral deste procedimento é medir as respostas dos sentidos gustativos individuais no lábio da drosófila. Isso é feito primeiro construindo um equipamento de eletrofisiologia e configurando todo o equipamento necessário. O segundo passo é preparar a mosca para gravação.

Em seguida, um lum individual é estimulado com um composto gustativo enquanto a resposta neuronal é registrada simultaneamente. Em última análise, a gravação de pontas eletrofisiológicas de silla de rótulo individual é usada para mostrar as respostas do sabor illa a diferentes compostos de sabor. A demonstração visual desse método é crítica, pois as etapas de preparação da mosca podem ser tecnicamente desafiadoras e difíceis de aprender.

Neste procedimento, colete as moscas recém-ELOs das culturas de moscas bem conservadas. Em seguida, envelheça-os de cinco a 10 dias em frascos de cultura fresca antes de registrar, antes da preparação da mosca, resfrie a placa do microscópio no gelo por 15 a 30 minutos. Em seguida, preencha o eletrodo de referência de vidro com a solução B e e.

E bata suavemente em todas as bolhas sob o microscópio de dissecação. Use a pinça para quebrar uma pequena seção da ponta. Em seguida, use a ação capilar para retirar quaisquer bolhas restantes com o tecido.

Em seguida, deslize o eletrodo de referência preenchido com B e E sobre o fio do porta-eletrodo e, para ter cuidado para não introduzir bolhas de ar depois disso, aspire uma mosca em uma ponta de pipeta P 200. Coloque-o em um balde de gelo e leve à geladeira por 30 segundos a um minuto. Em seguida, remova a placa do microscópio do gelo e posicione-a sob o microscópio depois de limpar a umidade.

Em seguida, bata suavemente a braguilha da ponta da pipeta na placa do microscópio sob baixa ampliação. Remova as quatro pernas com um par de pinças enquanto mantém o Forex estável com o outro par de pinças. Posicione a mosca em seu lado ventral com o lado dorsal voltado para cima.

Sempre tome cuidado para evitar tocar no rótulo beum com a pinça durante o processo de preparação para minimizar danos mecânicos enquanto segura a mosca no lugar com um par de pinças, insira o eletrodo de referência na linha média do tórax dorsal posterior a aproximadamente 45 graus na direção da cabeça. Em seguida, prenda o porta-eletrodo de referência com massa de modelar de forma que a mosca fique visível sob o microscópio em alta ampliação. Manobre e incline o eletrodo de vidro no pescoço e na cabeça e deslize a braguilha em direção ao suporte do eletrodo de referência usando dois pares de pinças.

Agora, estenda suavemente os probos com um par de pinças e deslize a braguilha mais para baixo no eletrodo de referência de vidro até que a ponta do eletrodo esteja dentro do beum da etiqueta e os probos estejam totalmente estendidos. Nesta etapa, prenda o suporte do eletrodo de referência ao micromanipulador montado na mesa de ar. Posicione um lóbulo do labelo no microscópio view campo de visão sob alta ampliação e alinhado com a corrente de ar umidificada.

Depois disso, ligue o Sistema de Aquisição Digital de Computador Airstream Umidificado ou DAS e Amplificador. Em seguida, use uma seringa e um tubo de plástico para puxar uma pequena quantidade de água ultrapura através do tubo pelo menos 10 vezes. Para enxaguar o eletrodo de registro de vidro, lave posteriormente o eletrodo de registro com TAST pelo menos cinco vezes.

Em seguida, encha o eletrodo de gravação aproximadamente um terço a meio cheio de sabor e remova-o do tubo. Se houver bolhas de ar, toque para liberá-las ou simplesmente reabasteça o eletrodo. Agora deslize o eletrodo no fio prateado do cabeçote stage de forma rápida e suave.

Para evitar a introdução de bolhas de ar para estimular o envio único, primeiro use o micro manipulador para alinhar o eletrodo de gravação com os sensores de interesse. Em seguida, pressione o pedal para acionar o modo de aquisição do amplificador. Em seguida, avance o eletrodo de gravação de sabor e enchimento com o botão de controle fino do micro manipulador cuidadosamente até que ele entre em contato com a ponta do sensor e comece a gravar.

Remova o eletrodo após um a dois segundos. Repita o procedimento novamente com outras illa e aguarde pelo menos um minuto entre as apresentações no mesmo lum. Se gravar com um único sabor e por um período prolongado de tempo, o sabor e a solução podem secar e a solução na ponta pode ficar mais concentrada.

Isso pode ser remediado entrando em contato suavemente com a ponta do eletrodo de vidro com papel liso para remover uma pequena quantidade de líquido por ação capilar para registrar as respostas a outro sabor e enxaguar e carregar o eletrodo de gravação com um novo sabor e repetir o procedimento. Salve arquivos de dados periodicamente com informações de identificação, como data, genótipo e sabor. Esta figura mostra a resposta de um centum a uma sacarose açucarada.

O mesmo centum não responde a um composto amargo berberina, e esta figura mostra que um tipo de olho sens, que contém um neurônio responsivo amargo, exibe picos de amplitude maiores em resposta à berberina e picos de amplitude menores em resposta à sacarose. Mostrado aqui, um representativo resultados eletrofisiológicos subótimos. Este traço representa uma completa falta de sinal.

Este é o ruído de 50 ou 60 hertz de fontes elétricas externas, e este é o ruído estocástico. Este traço representa que o neurônio sensorial Meno estava disparando sozinho, enquanto o neurônio receptor gustativo amargo e o neurônio sensorial Meno estavam disparando. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como registrar as respostas neuronais de Oph Atory Silla no lábio.