Um método modificado para heterotópico Rato coração transplante

O objetivo geral deste procedimento é transplantar um coração de um doador para um camundongo receptor. Isso é realizado primeiramente removendo o coração da caixa torácica do doador e armazenando-o em solução salina fria. Os próximos passos consistem em transplantar o coração para o abdômen do receptor e, em seguida, monitorar as batidas cardíacas do órgão transplantado.

Por fim, a rejeição do transplante é confirmada por inspeção visual e análise de patologia. Em última análise, os resultados mostram que corações transplantados entre cepas não relacionadas de camundongos são rejeitados, enquanto corações transplantados entre a mesma cepa são aceitos. A demonstração em vídeo a longo prazo deste procedimento é crítica, pois os passos microcirúrgicos são difíceis de aprender devido ao tamanho muito pequeno dos animais doadores e receptores.

O procedimento cirúrgico complicado envolvido e a necessidade de aumentar a precisão e a velocidade na realização das operações em receptores sempre exigem que todos os instrumentos sejam cuidadosamente limpos e esterilizados em uma solução de etanol a 80%. O uso de equipamentos descartáveis esterilizados é altamente recomendável. Após anestesiar o camundongo doador em uma câmara com isoflurano, posicione-o em decúbito dorsal sobre a mesa cirúrgica.

Em seguida, conecte rapidamente o cone nasal, administrando o anestésico. Certifique-se de testar a qualidade da anestesia com uma pinça no pé traseiro. Se não houver resposta de contração, inicie a depilação da pele usando uma lâmina cirúrgica.

Em seguida, esterilize a pele com três passadas alternadas de clorexidina 2% em álcool isopropílico 70% durante toda a cirurgia. Monitore visualmente a respiração e a frequência cardíaca do animal. Ajuste a administração de isoflurano conforme necessário.

Inicie realizando uma toracotomia para expor o coração e os vasos, abrindo o tórax por ambos os lados da caixa torácica. Corte da borda da costela até a axila e transversalmente ao nível do esterno xifoide. Isso forma um retalho da parede torácica.

Fixe com alfinetes a aba aberta na placa cirúrgica próxima à cabeça. Em seguida, remova o pericárdio ao redor do coração. Levante a veia cava inferior com pinça e injete um mililitro de solução salina heparinizada fria na veia cava inferior próxima ao coração.

Em seguida, prenda uma pequena pinça arterial à veia cava inferior para evitar que a solução retorne pelo orifício da agulha, utilizando gaze e um aplicador de algodão. Desloque o coração para baixo a fim de expor a aorta e a artéria pulmonar. O seio transverso é o canal localizado posteriormente ao conjunto formado pela aorta e pela artéria pulmonar.

Em seguida, corte a aorta e a artéria pulmonar o mais distalmente possível para maximizar o comprimento dos vasos para a anastomose. Agora, divida a VCI, a VCS direita, a VCS esquerda e as veias pulmonares. Cada uma deve ser ligada separadamente usando fio de seda 6,0.

Primeiro, amarre a VCI e a VCS direita. Em seguida, amarre a VCS esquerda e as veias pulmonares. Agora, remova o coração cortando todos os vasos distais aos amarros.

Armazene o coração em solução salina estéril e fria a quatro graus Celsius até o transplante. Após preparar o animal para a cirurgia conforme descrito para o doador, inicie realizando uma laparotomia. Corte ao longo da linha média, desde a sínfise púbica até o processo xifóide do esterno.

Usando clipes de papel dobrados como retratores. Abra o abdômen, envolva as alças intestinais em gaze umedecida com solução salina aquecida e retraias para o quadrante superior direito do abdômen. Em seguida, exponha a aorta infrarrenal e a veia cava inferior (IVC) entre a bifurcação ilíaca e a artéria e veia renais esquerdas.

Solte o segmento empacotado da aorta e da veia cava inferior (VCI). Em seguida, separe a aorta e a VCI dos vasos lombares com um dispositivo de eletrocautério calibrado. Aplique pequenos grampos não traumáticos nas extremidades proximal e distal do segmento livre de aorta e VCI.

Usando uma agulha de 30 mm, faça um orifício na parede anterior da aorta a partir do corte feito verticalmente, criando uma abertura do tamanho da aorta do doador. Aproveite esta oportunidade para remover quaisquer coágulos sanguíneos da luz da aorta com uma lavagem de solução salina heparinizada. Agora, introduza o coração do doador em solução salina fria.

Posicione o coração doador ao lado da incisão na aorta do receptor. Posicione a artéria pulmonar doadora ao lado da VCI do receptor utilizando suturas de náilon contínuas 10-0. Anastomose as aortas de extremidade para lateral.

Inicie no canto proximal e suture ao longo do lado esquerdo até o canto distal. Em seguida, gire o animal 180 graus. Depois, desloque o coração e continue os pontos pelo lado direito da parede aórtica, do distal para o proximal.

Antes de fechar a anastomose, lave suavemente a luz com solução salina de olhos com heparina para remover coágulos e ar. Em seguida, finalize o sutura. Depois, faça uma incisão vertical na parede anterior da VCI onde a artéria pulmonar será anastomosada.

Em segundo lugar, utilize 10 pontos contínuos para a anastomose. Os vasos começam na extremidade distal da parede esquerda dentro da luz da VCI na extremidade proximal. Continue ao longo da parede frontal direita e suture até a extremidade distal novamente.

Realize uma boa lavagem do lúmen antes de concluir a anastomose. Em seguida, coloque pedaços de espuma de gel ao redor da anastomose. A hemostasia é alcançada com pressão suave aplicada por aplicadores de algodão.

Para revascularizar o receptor. Solte primeiro a pinça distal, depois a pinça proximal. Durante a cirurgia do receptor, é fundamental otimizar a precisão e a velocidade do procedimento.

Assim, o tempo de pinçamento cruzado deve ser idealmente inferior a 30 minutos. Para auxiliar a recuperação, aplique solução salina aquecida a 37 graus Celsius no local do enxerto. A fibrilação deve ser imediata e reverter espontaneamente para o ritmo sinusal dentro de alguns minutos.

Antes de fechar o local cirúrgico, deve-se administrar uma injeção de buprenorfina por via intramuscular. Finalize a operação fechando a ferida com um ponto contínuo absorvível 5-0 para todas as camadas teciduais. Após o fechamento da ferida cirúrgica, injete o animal receptor com ampicilina e uma injeção subcutânea de 0,6 mililitros de solução salina.

Para auxiliar na hidratação, coloque o animal sobre uma placa aquecida regulada em 37 graus Celsius até que recupere a consciência. A maioria dos animais bebe e até se alimenta dentro de três horas após a cirurgia. Se após oito horas o camundongo ainda apresentar sinais de desconforto, administre injeções de buprenorfina a cada 12 horas até que os sintomas desapareçam.

Se o camundongo permanecer em estado de sofrimento por mais de 48 horas, entre em contato com um veterinário durante os primeiros 10 dias pós-operatórios. Monitore diretamente a frequência cardíaca do enxerto por meio de palpação abdominal. Diariamente, registre a intensidade da pulsação como quatro mais (+) para um enxerto saudável até um mais (+) para uma pulsação fraca devido à rejeição avançada.

Registre um enxerto sem batimento como negativo devido à rejeição completa do enxerto após 10 dias. Continue monitorando o pulso cardíaco do enxerto três vezes por semana. Após 227 transplantes cardíacos heterotópicos, 90,3% foram bem-sucedidos por 24 horas e 86,8% foram bem-sucedidos por 48 horas. As falhas incluíram paralisia dos membros posteriores, coração sem batimento devido ao enxerto, lesão isquêmica e/ou trombose, e morte; os sobreviventes ao enxerto foram catalogados.

A causa da falha no transplante de coração foi determinada por meio de análise anatomopatológica. A análise do coração transplantado, aqui marcado por uma seta, revelou trombose e infarto do tecido cardíaco, sendo essa a causa da falência desse coração enxertado na combinação de linhagem doador C57 Black seis e receptor; nenhum coração foi rejeitado e os corações transplantados sobreviveram por mais de 100 dias. Neste caso, o coração havia reduzido ligeiramente de tamanho devido à atrofia muscular secundária ao seu status não sustentador de vida.

Em contraste, na combinação de linhagens com rejeição de doador DBA dois para receptor C 57 Black seis, esse coração transplantado deixou de bater no sétimo dia e apresentou evidências de rejeição em 100 dias. O mesmo coração estava completamente fibrotico e contraído quando analisado posteriormente. Esta técnica pode ser realizada em 90 milhões ou menos, se for executada corretamente, e não se esqueça de que trabalhar com gás de óxido nitroso pode ser extremamente perigoso.

O uso de um sistema de aspiração de gás anestésico está amplamente disponível.