Medindo Spinal pré-sináptica Inibição em Ratos por raiz dorsal Gravação Potencial In Vivo

A inibição pré-sináptica é um dos mecanismos inibitórios mais poderosos da medula espinhal. Alterações patológicas na inibição pré-sináptica são importadas em vários mecanismos de padrão de doença. Por exemplo, dor neuropática e inflamatória, bem como processamento anormal da dor central.

É importante na lesão medular e nos distúrbios do sistema nervoso central com hiperexcitabilidade motora. Portanto, quando modelos animais para esses distúrbios são investigados, conhecer os pontos fortes da inibição pré-sináptica forneceria informações significativas. Apresentamos aqui um método de como avaliar a inibição pré-sináptica em um modelo de camundongo.

A inibição pré-sináptica in vivo é mediada pela despolarização do ens primário, que é induzida pela sinapse axonal GABAérgica Axo nas fibras pré-sinápticas sensoriais. Gaby, A atividade do receptor leva a um aumento na condutância do cloreto, que então provoca a despolarização afluente primária devido à distribuição local do íon. Essa despolarização bloqueia a propagação dos potenciais de ação nos terminais do exoma e reduz suas forças, levando a uma diminuição do influxo de cálcio e à redução da liberação do transmissor.

Assim, os potenciais pós-sinápticos excitatórios em monos, synaptically exci, os neurônios modernos podem ser inibidos sem alterar o potencial de membrana pós-sináptica e a excitabilidade do potencial conduzido de volume de neurônios modernos desta despolarização otorrinolaringológica primária fornece uma medida direta da inibição pré-sináptica na medula espinhal, e esses potenciais podem ser medidos a partir da medula espinhal, raízes dorsais após a estimulação, e estes são chamados de potenciais radiculares dorsais. A medição dos potenciais da raiz dorsal está bem estabelecida e tem sido amplamente utilizada em gatos, ratos e sapos, mas em camundongos, os registros foram quase exclusivamente realizados em preparações ex vivo e isoladas da medula espinhal. Aqui descrevemos um método de como registrar esses potenciais radiculares em camundongos anestesiados in vivo, permitindo uma medida direta da inibição pré-sináptica no organismo intacto.

Para gravação de DRP em camundongos in vivo, é necessário o seguinte equipamento. Instrumentos de açúcar padrão, um microscópio estéreo três manual para posicionar o eletrodo de estimulação, o eletrodo de gravação e o eletrodo de referência, respectivamente. Além disso, uma estrutura de mouse e um padrão de aquecimento para controlar a temperatura corporal do mouse para estimulação e gravação sozinho ou estimulador.

Um amplificador padrão e uma coleta de dados são necessários para melhorar a relação sinal-ruído. Durante a gravação do DRP, eletrodos de seção personalizados são necessários para a fabricação deles. Puxe a tubulação de vidro convencional com um extrator de pipeta padrão.

Quebre a ponta do eletrodo usando uma lima de diamante para alargar a ponta abrindo fogo. Polir a ponta com uma tocha de laboratório padrão para alisá-la. Antes de iniciar a preparação, anize o animal com uma injeção IP de keils e fixe a cabeça do camundongo dentro da estrutura estereotáxica.

Em seguida, teste a profundidade da anestesia beliscando o PO traseiro do mouse. Inicie o preparo somente quando não houver retirada do PO, a profundidade da anestesia deve ser verificada repetidamente durante o procedimento. Injeções repetitivas de seno de cetamina no músculo quadríceps traseiro.

Prolongue a anestesia, monitore a temperatura corporal do animal com a sonda retal. Para a preparação da coluna dorsal. Abra a pele ao longo da linha média dorsal.

Solte a pele do tecido subjacente para separar a vértebra do tecido conjuntivo circundante. Faça dois cortes em ambos os lados da coluna e alargue os cortes separando o tecido com o bisturi. Em seguida, remova os processos espinhosos S usando um pequeno mamilo ósseo.

Começando nos níveis lombares. Prossiga para os níveis torácicos médios para evitar o ressecamento desta ferida operacional. Passe pequenos pedaços de gaze ao redor da ferida e umedeça-os com cloreto de sódio a 0,9%.

Em seguida, comece a preparar a medula espinhal começando pela região lombar. Empurre cuidadosamente a ponta do mamilo ósseo no espaço entre duas vértebras adjacentes. Tome cuidado especial para reduzir ao máximo a pressão aplicada à medula espinhal.

Prossiga para os níveis torácicos úmidos na medula espinhal com líquido cefalorraquidiano artificial. Faça isso repetidamente durante todas as etapas subsequentes. Abra o durômetro com cuidado usando uma agulha de 30 gorge.

Em seguida, afrouxe e separe duas raízes ipsilaterais adjacentes da coluna. Em seguida, corte as raízes o mais distal possível. Durante o procedimento.

Evite o puxão excessivo das raízes, pois isso acabará dificultando uma gravação bem-sucedida do DRP. Depois de posicionar o eletrodo de referência próximo à medula espinhal, mova a ponta de um eletrodo de seção próximo à extremidade proximal de uma raiz dorsal. Em seguida, posicione a raiz dorsal sobre a abertura da ponta do eletrodo de sucção.

Em seguida, coloque a raiz dorsal no eletrodo aplicando uma pressão negativa curta através de uma seringa conectada ao eletrodo. Em seguida, encha o eletrodo com A CSF enquanto aplica baixa pressão negativa contínua até que a solução envolva a raiz do agente e o fio de cloreto de prata dentro do eletrodo. Em seguida, eleve a ponta do eletrodo da medula espinhal para que nenhuma ponte de líquido provoque curto-circuito no eletrodo.

Repita as etapas para a segunda raiz adjacente do ipsi. Uma vez posicionados os dois eletrodos, inicie o registro do DRP estimulando uma rota enquanto registra a partir da outra, aumente a tensão do estímulo para níveis supramáximos. As gravações típicas de potenciais de raiz dorsal se parecem com a mostrada no painel esquerdo.

Um artefato de estimulação curto é seguido por uma deflexão positiva curta e uma deflexão negativa prolongada. A última deflexão é o potencial real da raiz dorsal. Sua amplitude pode ser calculada em relação à linha de base registrada diretamente antes do registro do estímulo.

Vários traços de um par de raízes como artefatos de movimentos respiratórios e/ou artefatos de eletrocardiograma podem interferir no DRP registrado. Após uma gravação bem-sucedida, é possível alternar o local de estimulação e gravação e realizar uma segunda gravação. O método de gravação apresentado.

Os potenciais radiculares in vivo permitem a avaliação de ent primário, antipolarização e animal intacto, especialmente em combinação com camundongos geneticamente modificados. Pode ser uma ferramenta poderosa para investigar os mecanismos subjacentes à inibição da coluna vertebral. Uma integração da coluna vertebral é crítica para a função motora e a percepção sensorial multimodal.

Este método é útil em pesquisas que abordam dor, lesão da medula espinhal, lesão de nervos periféricos e inflamação. O registro de PRM in vivo permite os analisadores das interações da atividade supraespinhal e da almofada. Isso não é possível em preparações isoladas da medula espinhal geralmente usadas para medir o DRP em camundongos.

Em princípio, a aplicação do medicamento na medula espinhal é possível durante a gravação. A aplicação local por meio de pipetas adicionais pode melhorar e acelerar o controle de uma concentração local de drogas.