Name: Spinal Cord Injury completo e Cérebro Dissection Protocolo para Wholemount Subsequente In Situ Hibridização em larval da lampreia de mar (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Aprenda a realizar transecção completa da medula espinhal e dissecção cerebral em lampreias marinhas para estudar orientação axonal após lesão. Este método permite visualizar neurônios identificados em preparações de montagem inteira.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Apoiado pelo NIH Grants NS14837, R01 NS38537, R24 HD050838 ao Dr. Michael E. Selzer; Bolsa de Pesquisa Shriners SHC-85220 para o Dr. Michael E Selzer; e Shriners Research Grant SHC-85310 para o Dr. Michael I. Shifman. O Dr. Antón Barreiro-Iglesias foi apoiado pela Fundación Barrié (Espanha) e pela Xunta de Galicia (Galiza, Espanha).

Ver Tabela 1 para todos os materiais utilizados neste protocolo. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidado Animal Institucional da Universidade de Temple. 1. Os animais <ol><li> Obter tipo selvagem lampreias marinhas larvais (Petromyzon marinus L.), 10-14 cm de comprimento (4-7 anos) dos córregos que alimentam o Lago Michigan, a partir de afluentes do rio Delaware (Pensilvânia) ou córregos em Maine. </li><li> No laboratório, a manter as larvas em grupos de 50 - 100 animais em tanques de água doce de 50 galões a 16 ° C. Linha de tanques com uma polegada de cascalho para as larvas de toca, e que a água é filtrada e carvão condicionado com pedras de ar por pelo menos 48 horas para remover o cloro e outras impurezas antes de colocar as lampreias neles. Não há necessidade de alimentar os animais, que reciclam seus próprios detritos, até o dia de uso. </li></ol> 2. completa SpinalCord transecção <ol><li> Antes da cirurgia da espinal medula preparar uma solução lampreia Ringer com a seguinte composição: NaCl 110 mM, KCl 2,1 mM, 2,6 mM de CaCl 2, 1,8 mM MgCl 2 e 10 mM de tampão Tris; pH 7,4. </li><li> Para realizar a transecção da medula espinhal, coloque as larvas em um pequeno recipiente a ser anestesiada com 1% de metano tricaina em solução Ringer gelada. </li><li> Uma vez anestesiados lugar os animais em uma placa de Petri com meio cheio Sylgard (de silicone) e quatro pinos de utilizar insectos (0,15 mm de diâmetro) para manter os animais em posição para a operação (um é colocado no focinho do animal, um na cauda e dois no nível de 5 º guelras). Encha o prato de petri quase até o topo com uma solução de Ringer. Coloque o prato com a larva no gelo durante a realização da cirurgia sob o microscópio estereoscópico. </li><li> Para realizar a transecção da medula espinal dorsal, mediano, fazer uma incisão longitudinal com um bisturi (# 11) ao nível de 5 ºbranquial para visualizar a medula espinhal. Inicialmente, a pele é aberta por inserção da ponta da lâmina do bisturi voltada para cima e, em seguida, o tecido muscular é cortado muito suavemente até que a coluna vertebral pode ser visto a partir de cima. Moda dois ganchos dos pinos de insetos e usá-los para segurar as paredes do corpo aberta durante a realização da transecção da medula espinhal. </li><li> Completamente transecção da medula espinal ao nível da 5 ª guelras por meio de um par de tesouras (Castroviejo # 8), inserir as tesouras perpendicularmente para a medula espinhal. A medula espinhal tem de ser completamente cortado transversalmente com um corte limpo. Visualizar a medula espinhal extremidades cortadas ao microscópio estereoscópico para confirmar que a espinal medula foi completamente cortado transversalmente. Em seguida, realinhar as extremidades cortadas da medula espinal após a transecção usando um par de pinças (5). </li><li> Depois de realizar a transecção da medula espinal fechar a ferida na parede dorsal do corpo com um par de pinças finas e colocado as larvas em gelo durante 1 h para permitir que a ferida to secar. Coloque um pedaço de papel de filtro entre o gelo e as larvas e mergulhe-o com uma solução de Ringer lampreia. A baixa temperatura mantém os animais vivos ao mesmo tempo que permite que a ferida se secar ao ar e, portanto, ajudar a evitar infecções. </li><li> Em seguida, transferir as larvas para pequenos tanques (1 larva por tanque) com água gelada por 24 horas. </li><li> Examinar o lesionado larvas 1 dia após a transecção espinal para comportamentalmente confirmar que não há movimento caudal ao local da lesão. A transecção da medula espinal é considerada completa se a larva possa mover apenas a sua cabeça rostral para o local da lesão (ao nível dos 5 th guelras). Se este for o caso, as larvas podem ser agora transferidos para tanques (1 larva por tanque) com água doce, à temperatura ambiente (23 ° C) para permitir a sua recuperação para os pontos de tempo seleccionados. </li><li> Durante o período de recuperação de mudar a água a cada 2 a 3 dias. </li></ol> 3. Cérebro Dissecção e Preparação deo cérebro por meio de hibridação in situ <ol><li> Nos momentos desejados após a lesão re-anestesiar as lampreias marinhas das larvas e lugar e fixá-los na placa de Petri com solução de Ringer para realizar a dissecação do cérebro como acima. </li><li> Para dissecar o cérebro, em primeiro lugar fazer uma incisão transversal com o bisturi entre a narina eo órgão pineal. A partir daqui, começa a cortar o tecido que envolve o cérebro, utilizando um par de tesouras Castroviejo, mantendo-a com uma pinça. </li><li> Uma vez que o cérebro está exposto, remover o plexo coróide, utilizando um par de pinças e utilizar os ganchos para espalhar a cabeça do animal, e expor os nervos cranianos. Em seguida, corte a forma transversal da medula espinhal com a tesoura Castroviejo. Segurar a medula espinal com um par de pinças, enquanto usando outro par de fórceps para cortar os nervos cranianos a dissecar o cérebro. </li><li> Após a dissecção, colocar o cérebro em um pequeno pedaço de silicone e mantenha-o em posição inserindo dois insect pinos no bulbos olfativos 1 e na medula espinal. Em seguida, corte a parte posterior e comissuras cerebrotectal do cérebro ao longo da linha média dorsal com a tesoura e desviar as placas alar lateralmente e fixá-los plana para o silicone com 4 pinos de insetos (Figura 2). </li><li> Transferir o pedaço de silicone com o cérebro de um tubo contendo 4% de paraformaldeído em tampão fosfato salino (pH 7,4) para ser fixada em temparature ambiente durante 3 horas num rotor. </li><li> Após a fixação usar o cérebro para wholemount hibridação in situ tal como descrito anteriormente (Swain et al., 1994). Os cérebros de animais de controlo ou sham operado deve ser executado sempre em paralelo com os cérebros de animais lesionados. O cérebro de larvas wholemounted pode ser estudada por hibridação in situ devido à sua forma plana e fina, e também devido à ausência de mielina 10, o que faz com que o cérebro relativamente translúcido. </li></ol>

<ol><li>Rodicio, M. C., Barreiro-Iglesias, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lampreys+as+an+animal+model+in+regeneration+studies+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Lampreys as an animal model in regeneration studies after spinal cord injury.</a> Rev Neurol. 55, 157-166 (2012).</li>
<li>Davis, G. R. Jr, McClellan, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extent+and+time+course+of+restoration+of+descending+brainstem+projections+in+spinalcord-transected+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Extent and time course of restoration of descending brainstem projections in spinalcord-transected lamprey.</a> J Comp Neurol. 344, 65-82 (1994).</li>
<li>Jacobs, A. J., Swain, G. P., Snedeker, J. A., Pijak, D. S., Gladstone, L. J., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+neurofilament+expression+selectively+in+regenerating+reticulospinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Recovery of neurofilament expression selectively in regenerating reticulospinal neurons.</a> J Neurosci. 17, 5206-5220 (1997).</li>
<li>Shifman, M. I., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+netrin+receptor+UNC-5+in+lamprey+brain+modulation+by+spinal+cord+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Neurorehabil+Neural+Repair%22%5BJournal%5D)">Expression of the netrin receptor UNC-5 in lamprey brain modulation by spinal cord transection.</a> Neurorehabil Neural Repair. 14, 49-58 (2000).</li>
<li>Barreiro-Iglesias, A., Laramore, C., Shifman, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sea+lamprey+UNC5+receptors+cDNA+cloning%2C+phylogenetic+analysis+and+expression+in+reticulospinal+neurons+at+larval+and+adult+stages+of+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">The sea lamprey UNC5 receptors cDNA cloning, phylogenetic analysis and expression in reticulospinal neurons at larval and adult stages of development.</a> J Comp Neurol. 520, 4141-4156 (2012).</li>
<li>Shifman, M. I., Yumu, lR. E., Laramore, C., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+repulsive+guidance+molecule+RGM+and+its+receptor+neogenin+after+spinal+cord+injury+in+sea+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Expression of the repulsive guidance molecule RGM and its receptor neogenin after spinal cord injury in sea lamprey.</a> Exp Neurol. 217, 242-251 (2009).</li>
<li>Busch, D. J., Morgan, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synuclein+accumulation+is+associated+with+cell-specific+neuronal+death+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Synuclein accumulation is associated with cell-specific neuronal death after spinal cord injury.</a> J Comp Neurol. 520, 1751-1771 (2012).</li>
<li>Shifman, M. I., Zhang, G., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+death+of+identified+reticulospinal+neurons+after+spinal+cord+injury+in+lampreys%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Delayed death of identified reticulospinal neurons after spinal cord injury in lampreys.</a> J Comp Neurol. 510, 269-282 (2008).</li>
<li>Swain, G. P., Jacobs, A. J., Frei, E., Selzer, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+in+situ+hybridization+in+wholemounted+lamprey+brain+neurofilament+expression+in+larvae+and+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">A method for in situ hybridization in wholemounted lamprey brain neurofilament expression in larvae and adults.</a> Exp. Neurol. 126, 256-269 (1994).</li>
<li>Bullock, T. H., Moore, J. K., Fields, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+myelin+sheaths%3A+both+lamprey+and+hagfish+lack+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Evolution of myelin sheaths: both lamprey and hagfish lack myelin.</a> Neurosci Lett. 48, 145-148 (1984).</li>
<li>Cohen, A. H., Kiemel, T., Pate, V., Blinder, J., Guan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+can+alter+the+function+outcome+of+spinal+cord+regeneration+in+larval+lampreys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Temperature can alter the function outcome of spinal cord regeneration in larval lampreys.</a> Neuroscience. 90, 957-965 (1999).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Aqui apresentamos um protocolo detalhado para executar uma transecção medular completa e dissecção cerebral posterior em lampreias marinhas larvais. Este procedimento permite que as diferenças de análise da expressão gênica entre medula espinhal identificável salientes neurônios após a lesão medular por meio de um cérebro inteiro de montagem de hibridização in situ. O passo crítico no processo é o correcto desempenho de uma completa transecção da medula espinal, o que pode ser controlado através da observação das extrem...

Nos mamíferos lesão medular (LM) é uma condição devastadora que leva à perda permanente da função abaixo do local da lesão, porque os axônios lesionados não se regeneram através da zona de trauma e se reconectar com suas metas adequadas. Em contraste com os mamíferos, lampreia recuperar locomoção após uma lesão completa da medula espinal. Uma forma interessante, a lampreia tem um conjunto de 36 projectando neurónios da medula espinal que são identificáveis ​​individualmente em conjunto de montagem em preparações de cérebro devido ao seu grande tamanho 2,3 (Figura 1) . Todos esses neurônios espinhais de projeção são axotomizados por um alto nível de transecção completa da medula espinhal. Estudos anteriores de nosso grupo e outros mostraram que, mesmo na presença de recuperação funcional após SCI alguns destes neurónios mostram uma muito baixa capacidade de regeneração (que são considerados &quot;maus regeneradores&quot;), enquanto outros geralmente regenerar seu axónio através do local da lesão (que são consideradas de &quot;gregeneradores ood &quot;). 2,3 Esta característica faz com que as lampreias um modelo vertebrado interessante estudar as diferenças na expressão gênica entre o bem eo mal regenerador neurônios espinhais-projetando que por sua vez levará para as diferenças na capacidade de regeneração intrínseca dos neurônios que tentar regenerar seus axônios no mesmo ambiente extrínseca. 1 Usando esse modelo, já haviam demonstrado que a medula de projeção neurônios com baixa capacidade regenerativa show de expressão de receptores de moléculas orientação axonal como UNC5 4,5 e neogenin 6, que medeiam a ação inibitória da netrin e RGM respectivamente. Além disso, utilizando este método nosso grupo também mostrou que apenas as boas regeneradores mostram uma recuperação da expressão de neurofilamentos após o ferimento e durante o processo de regeneração. Recentemente, Busch e Morgan 7 por imunofluorescência demonstraram que os regeneradores maus mostrará um increased expressão de sinucleína após a lesão, o que tem sido relacionado pelos autores para o fato de que o &quot;mau regenerador&quot; neurônios espinhais-projetando morrer lentamente após um completo medula espinhal transection 5,7,8. Assim, o modelo de lampreia de uma lesão completa da medula espinhal tem emergido como um modelo muito útil para entender o que faz um cordão espinhal neurônio projetando um &quot;mau regenerador&quot; após axotomia. Para realizar os estudos que estão executando um protocolo completo cirurgia espinal medula transecção e uma dissecção cerebral posterior nos pontos de tempo desejado após a lesão para realizar wholemount hibridação in situ. No presente artigo metodológico apresentamos um protocolo detalhado para o bom desempenho de uma medula cirurgia completa lesão da medula em lampreias larvais, a posterior manutenção dos animais ea dissecação cerebral final e preparação do cérebro para uma wholemount hibridização in situ. Um protocolo detalhado para perform o wholemount hibridização in situ no cérebro de lampreias larvais foi relatada anteriormente. 9 Além disso, o protocolo de lesão medular e dissecação do cérebro pode ser usado também para, em seguida, processar os cérebros para imuno-histoquímica ou outros métodos histológicos.

<table><tbody><tr><td>Tricaine metano sulfonato</td><td>Spectrum</td><td>TR108</td><td>Solução saturada de benzocaína em PBS para sacrifício</td></tr><tr><td>Bisturi #3</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas para bisturi: #11</td><td>Fine Science Tools&nbsp;</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Castroviejo #8</td><td>Ferramentas de Belas Ciências&nbsp;</td><td>15002-08</td> Fórceps #4 & #5 Dumont, Suíça Roboz RS4955#4 para a dissecção da medula espinhal; #5 para o microscópio de dissecação Olympus SZ51 Sylgard Dow Corning Co. de 15002-08 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>184</td><td></td></tr><tr><td>Alfinetes de insetos 0,15, 0,20 mm</td><td>Austerlitz</td><td>Sem catálogo #</td><td>0,15 mm para fixar o cérebro e a medula espinhal; 0,20 mm para o corpo</td></tr><tr><td>7 ml HDPE Tubos de cintilação com tampas</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-337-1</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído 16%</td><td>Microscopia Eletrônica Science (EMS)</td><td>19210</td><td>Diluir a 4% em PBS</td></tr></tbody></table>

spinal cord injury completo e cérebro dissection protocolo para wholemount subsequente<em&gt; in situ</em&gt; hibridização em larval da lampreia de mar

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Depois de uma lesão completa da medula espinhal, lampreias marinhas no primeiro estão paralisados ​​abaixo do nível da transecção. No entanto, eles se recuperam locomoção depois de várias semanas, e isso é acompanhado por regeneração curta distância (alguns mm) dos axônios propriospinal e axônios espinal-se projectam a partir do tronco cerebral. Entre os 36 grandes neurônios espinhais-projetando identificáveis, alguns são bons e outros são regeneradores maus regeneradores. Esses neurônios podem ser mais facilmente identificados em preparações wholemount SNC. A fim de compreender os mecanismos neuronais intrínsecos que favorecem ou inibem a regeneração do axônio após a lesão nos vertebrados do SNC, podemos determinar diferenças na expressão gênica entre os bons e maus regeneradores, e como expressão é influenciada pela medula transecção espinhal. Este artigo ilustra as técnicas para larval habitação e lampreias marinhas adultas recentemente transformados em tanques de água, produzindo completos transecções da medula espinhal sob visão microscópica, e preparando brain e wholemounts da medula espinhal para hibridização in situ. Resumidamente, os animais são mantidos em 16 &#160; ° C e anestesiados em 1% benzocaína na lampreia Ringer. A medula espinal é seccionado com tesoura iridectomia através de uma abordagem dorsal e o animal é deixado recuperar em tanques de água a 23 ° C. Para a hibridização in situ, os animais são reanesthetized e o cérebro e medula removido por meio de uma abordagem dorsal.

Como um exemplo dos resultados que podem ser obtidos quando se usa este método, as imagens representativas dos cérebros wholemounted que mostram a expressão dos transcritos neogenin em neurónios projectam-medulares identificáveis ​​de controlo e 2 semanas após a lesão a lampreia mar larvas são mostrados na Figura 2. Os leitores são referidos num estudo anterior 6 relatando a relação entre a expressão de neogenin após uma transecção medular completa ea capacidade de regeneração da medula espin...

As lampreias recuperar locomoção após uma lesão completa da medula espinhal. No entanto, alguns neurônios espinhais de projeção são bons regeneradores e outros não. Este artigo ilustra as técnicas para larvas de lampreia mar habitação (e adultos recém-transformados), produzindo completos transecções medulares e preparar cérebros wholemount e medulas espinhais de hibridização in situ.

Spinal Cord Injury completo e Cérebro Dissection Protocolo para Wholemount Subsequente<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridização em larval da lampreia de mar

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

O objetivo geral deste procedimento é realizar uma transecção completa da medula espinhal e uma dissecação encefálica para o estudo do direcionamento axonal após lesão. Isso é realizado primeiramente transeccionando a medula espinhal de uma lampreia no nível da quinta brânquia. Em seguida, o cérebro é dissecado e fixado ao sylgard.Após fixar o cérebro, ele pode ser armazenado em metanol ou usado imediatamente para hibridização in situ; mudanças na expressão de receptores de orientação axonal podem ser observadas em uma vértebra em regeneração após uma lesão medular. A vantagem da técnica que vamos demonstrar hoje em comparação com os métodos mais convencionais de seccionamento em parafina ou em criostato é que ela permite visualizar todo o cérebro, incluindo os neurônio que projetam para a medula espinhal, que são grandes e identificáveis.Quem demonstra o procedimento é a Dra. Kathy Zang, cientista pesquisadora em nosso laboratório. Larvas selvagens de lampreia-do-mar da espécie Petromyzon marinus foram obtidas a partir de riachos afluentes do Lago Michigan, no estado da Pensilvânia, até o Rio Delaware, ou riachos do Maine.Larvas de quatro a sete anos têm de 10 a 14 centímetros de

complete-spinal-cord-injury-brain-dissection-protocol-for-subsequent

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra um método para investigar lesões cerebrais em larvas de peixe-zebra usando microscopia eletrônica de transmissão de varredura (STEM) em larga escala, uma técnica que combina elementos de microscopia eletrônica de varredura (SEM) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM) para produzir imagens de alta resolução. Ele descreve as etapas envolvidas na preparação de amostras e na aquisição de imagens STEM de alta resolução para identificar lesões cerebrais.

Investigando uma lesão cerebral larval de peixe-zebra usando microscopia eletrônica de transmissão de varredura em larga escala

Processos de desenvolvimento, tais como a proliferação, a modelagem, diferenciação, e a orientação do axónio pode ser facilmente modelada na medula espinal do peixe-zebra. Neste artigo, nós descrevemos um procedimento de montagem para os embriões de peixe-zebra, que otimiza a visualização destes eventos.

Dissecção e montagem lateral de embriões Zebrafish: Análise de Desenvolvimento da Medula Espinhal

Após transecção espinhal, adulto zebrafish tem recuperação funcional por seis semanas após a lesão. Para tirar proveito da transparência larval e recuperação mais rápida, apresentamos um método para seccionar a medula espinhal larval. Após transecção, observamos recuperação sensorial começando em 2 dias após a lesão, e movimento C-curva por 3 dias após a lesão.

Transecção medular nos larval Zebrafish

Registrar correntes de Ca2+ na membrana facial de liberação pré-sináptica é a chave para uma compreensão precisa da entrada de Ca2+ e da liberação de neurotransmissores. Apresentamos uma dissociação aguda da medula espinhal da lampreia que produz axônios reticuloespinhais isolados funcionais, permitindo o registro diretamente da membrana facial de liberação de terminais pré-sinápticos individuais.

Aguda dissociação de lampreia reticulospinais axônios para permitir a gravação do lançamento Rosto Membrana de terminais pré-sinápticos funcionais individuais

Apresentamos um protocolo utilizando microscopia de lapso de tempo de excitação de dois fótons para visualizar simultaneamente a dinâmica das lesões de axônio e mielina em tempo real. Este protocolo proposto permite estudos de fatores intrínsecos e extrínsecos que podem influenciar o destino do axônio mielinizado central após a lesão e contribuir para a incapacidade clínica permanente.

Um Ex Vivo Induzida por laser Lesão Medular modelo para avaliar mecanismos de axonal Degeneration em tempo real

Doenças desmielinizantes podem ser modeladas em animais por aplicação focal de lisolecitina no SNC. Uma única injeção de lisolecitina na medula espinhal do camundongo produz uma lesão que se repara espontaneamente com o tempo. O objetivo é estudar os fatores envolvidos na desmielinização e remielinização e testar agentes para melhorar o reparo.

Experimental desmielinização e remielinização de Medula Espinhal Murino por Injeção Focal de lisolecitina

A microscopia eletrônica 2D em larga escala (EM), ou nanotomia, é a aplicação em todo o tecido da resolução em nanoescala. Aqui descrevemos um método universal de nanotomia aplicado para investigar o cérebro larval do peixe-zebra na saúde e em lesões cerebrais não invasivas.

Transmissão de digitalização em grande escala Electron Microscopy (Nanotomy) de saudável e Ofendidos Zebrafish Cérebro

Este manuscrito descreve métodos para registos electrofisiolicos de neurónios espinais de embriões de peixe-zebra e larvas. A preparação mantém neurónios in situ e muitas vezes envolve a dissecção mínima. Estes métodos permitem o estudo electrofisiológico de uma variedade de neurónios espinais, a partir da aquisição inicial excitabilidade eléctrica através dos primeiros estádios larvares.

zebrafish<em&gt; In Situ</em&gt; Spinal Cord Preparação para gravações eletrofisiológicas da Spinal Sensorial e Motor Neurons

Modificamos o modelo de queda de peso de Marmarou para o zebrafish adulto para examinar uma amplitude de patologias após lesão cerebral traumática por força bruta (TCE) e os mecanismos subjacentes à regeneração neuronal subsequente. Este modelo de TBI de força bruta é escalável, induz um TCE leve, moderado ou grave, e recapitula a heterogeneidade da lesão observada no TBI humano.

Um modelo escalável para estudar os efeitos da lesão por força bruta em zebrafish adulto

O presente protocolo descreve um método para induzir lesões específicas de tecido e altamente reprodutíveis em larvas de zebrafish usando um sistema de lesão a laser combinado com uma plataforma microfluida automatizada para o manuseio de larvas.

Lesões semi-automatizadas semi-automatizadas controladas por laser para estudar a regeneração da medula espinhal em larvas de zebrafish

A transeção da medula espinhal xenopus laevis é um método de lesão relevante para estudar lesão medular e regeneração, fazendo um corte transversal que corta completamente a medula espinhal no nível torácico.

Transeção da Medula Espinhal em Xenopus laevis Tadpoles

Aprenda a realizar transecção completa da medula espinhal e dissecção cerebral em lampreias marinhas para estudar orientação axonal após lesão. Este método permite visualizar neurônios identificados em preparações de montagem inteira.

Spinal Cord Injury completo e Cérebro Dissection Protocolo para Wholemount Subsequente In Situ Hibridização em larval da lampreia de mar (Vídeo) | JoVE Journal

Spinal Cord Injury completo e Cérebro Dissection Protocolo para Wholemount Subsequente

Explorar mais vídeos