Name: Compreender Organogenesis precoce Usando um Simplificado In Situ Protocolo de hibridação em Xenopus (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 50 s
Description: Aprenda a hibridização in situ em montagem inteira em embriões de Xenopus laevis para visualizar a expressão gênica durante o desenvolvimento inicial. Este protocolo simplificado permite localizar com precisão a atividade gênica em órgãos específicos.

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Os autores gostariam de agradecer ao CIHR pelo apoio da bolsa de Steve Deimling e ao Departamento de Pediatria da University of Western Ontario pelo apoio a Steve Deimling, Rami Halabi e Stephanie Grover. Este trabalho foi apoiado pelo NSERC grant R2654A11 e um NSERC Discovery Accelerator Supplement

<ol><li>Ninomiya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadherin-dependent+differential+cell+adhesion+in+Xenopus+causes+cell+sorting+in+vitro+but+not+in+the+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Cadherin-dependent differential cell adhesion in Xenopus causes cell sorting in vitro but not in the embryo.</a> J Cell Sci. 125, 1877-1883 (2012).</li>
<li>Movassagh, M., Philpott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+differentiation+in+Xenopus+requires+the+cyclin-dependent+kinase+inhibitor%2C+p27Xic1%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac differentiation in Xenopus requires the cyclin-dependent kinase inhibitor, p27Xic1.</a> Cardiovasc Res. 79, 436-447 (2008).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expression+of+alphaA-+and+betaB1-crystallin+during+normal+development+and+regeneration%2C+and+proteomic+analysis+for+the+regenerating+lens+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">The expression of alphaA- and betaB1-crystallin during normal development and regeneration, and proteomic analysis for the regenerating lens in Xenopus laevis.</a> Mol Vis. 17, 768-778 (2011).</li>
<li>Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization%3A+an+improved+whole-mount+method+for+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization: an improved whole-mount method for Xenopus embryos.</a> Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).</li>
<li>Kirilenko, P., Weierud, F. K., Zorn, A. M., Woodland, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+Xenopus+primordial+germ+cell+migration+depends+on+the+germplasm+mRNA+encoding+the+PDZ+domain+protein+Grip2%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">The efficiency of Xenopus primordial germ cell migration depends on the germplasm mRNA encoding the PDZ domain protein Grip2.</a> Differentiation. 76, 392-403 (2008).</li>
<li>Deimling, S. J., Drysdale, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf+is+required+to+regulate+anterior-posterior+patterning+in+the+Xenopus+lateral+plate+mesoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">Fgf is required to regulate anterior-posterior patterning in the Xenopus lateral plate mesoderm.</a> Mech Dev. , (2011).</li>
<li>Fletcher, R. B., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+FGF+signaling+in+the+establishment+and+maintenance+of+mesodermal+gene+expression+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">The role of FGF signaling in the establishment and maintenance of mesodermal gene expression in Xenopus.</a> Dev Dyn. 237, 1243-1254 (2008).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSive%2C+HL+%22Early+development+of+Xenopus+laevis+%3A+a+laboratory+manual%22">Early development of Xenopus laevis : a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2000).</li>
<li>Park, E. C., Hayata, T., Cho, K. W., Han, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+cDNA+microarray+identification+of+genes+with+endodermal+organ+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Xenopus cDNA microarray identification of genes with endodermal organ expression.</a> Dev Dyn. 236, 1633-1649 (2007).</li>
<li>Horb, M. E., Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoderm+specification+and+differentiation+in+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Endoderm specification and differentiation in Xenopus embryos.</a> Dev Biol. 236, 330-343 (2001).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNieuwkoop%2C+PD+%22Normal+table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29+%3A+a+systematical+and+chronological+survey+of+the+development+from+the+fertilized+egg+till+the+end+of+metamorphosis%22">Normal table of Xenopus laevis (Daudin) : a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. , Garland Pub. (1994).</li>
<li>Gebhardt, D. O., Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Lithium+on+the+Competence+of+the+Ectoderm+in+Ambystoma+Mexicanum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">The Influence of Lithium on the Competence of the Ectoderm in Ambystoma Mexicanum.</a> J Embryol Exp Morphol. 12, 317-331 (1964).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+formation+in+artificially+activated+ectoderm+%28Rana+pipiens+and+Ambystoma+punctatum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Pattern formation in artificially activated ectoderm (Rana pipiens and Ambystoma punctatum).</a> Dev Biol. 6, 255-279 (1963).</li>
<li>Sato, S. M., Sargent, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+approach+to+dorsoanterior+development+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular approach to dorsoanterior development in Xenopus laevis.</a> Dev Biol. 137, 135-141 (1990).</li>
<li>Smith, S. J., Kotecha, S., Towers, N., Latinkic, B. V., Mohun, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XPOX2-peroxidase+expression+and+the+XLURP-1+promoter+reveal+the+site+of+embryonic+myeloid+cell+development+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">XPOX2-peroxidase expression and the XLURP-1 promoter reveal the site of embryonic myeloid cell development in Xenopus.</a> Mech Dev. 117, 173-186 (2002).</li>
<li>Drysdale, T. A., Tonissen, K. F., Patterson, K. D., Crawford, M. J., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+troponin+I+is+a+heart-specific+marker+in+the+Xenopus+embryo%3A+expression+during+abnormal+heart+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cardiac troponin I is a heart-specific marker in the Xenopus embryo: expression during abnormal heart morphogenesis.</a> Dev Biol. 165, 432-441 (1994).</li>
<li>Carroll, T., Wallingford, J., Seufert, D., Vize, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+pronephric+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of pronephric development.</a> Curr Top Dev Biol. 44, 67-100 (1999).</li>
<li>Tonissen, K. F., Drysdale, T. A., Lints, T. J., Harvey, R. P., Krieg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((XNkx-2.5%2C+a+Xenopus+gene+related+to+Nkx-2.5+and+tinman%3A+evidence+for+a+conserved+role+in+cardiac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">XNkx-2.5, a Xenopus gene related to Nkx-2.5 and tinman: evidence for a conserved role in cardiac development.</a> Dev Biol. 162, 325-328 (1994).</li>
<li>Davidson, L. A., Ezin, A. M., Keller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+wound+healing+by+apical+contraction+and+ingression+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Motil+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Embryonic wound healing by apical contraction and ingression in Xenopus laevis.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 53, 163-176 (2002).</li>
<li>Hurtado, R., Mikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+sensitivity+and+stability+in+two-color+in+situ+hybridization+by+means+of+a+novel+chromagenic+substrate+combination%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Enhanced sensitivity and stability in two-color in situ hybridization by means of a novel chromagenic substrate combination.</a> Dev Dyn. 235, 2811-2816 (2006).</li>
</ol>

Os autores não têm interesses financeiros concorrentes a divulgar.

A capacidade para utilizar em hibridação in situ para visualizar o padrão de expressão de genes específicos é o método mais vulgarmente usado para identificar os órgãos ou tipos de células específicas do embrião de Xenopus. Isto é por causa de diversas vantagens oferecidas por esta técnica. A expressão de um gene pode identificar estruturas específicas bem antes de qualquer sinal histológicas de diferenciação, tais como o caso para a expressão em Nkx2.5 os progenitores do coração ante...

O padrão de expressão de um gene específico é uma informação importante para determinar o papel potencial desse gene no desenvolvimento de um órgão ou tipo de célula específico. Simplificando, se não for expresso na hora e no lugar certos, é improvável que desempenhe um papel fundamental. Em Xenopus, como na maioria dos embriões iniciais, o ensaio mais comumente usado para detectar a expressão de um gene é a hibridização in situ de montagem inteira usando sondas de RNA antisense marcadas. O uso de coloração de anticorpos para avaliar a expressão de um gene em Xenopus está se tornando mais comum à medida que os pesquisadores descobrem anticorpos, geralmente criados contra proteínas de mamíferos, que reagem de forma cruzada ao homólogo de Xenopus ou geram seus próprios 1-3. No entanto, a grande maioria dos estudos sobre a organogênese de Xenopus ainda utiliza sondas de RNA antisense. Quando os anticorpos são usados, cada anticorpo individual geralmente requer otimização para os protocolos primários de concentração ou fixação de anticorpos. Em contraste, o protocolo para hibridizações in situ é essencialmente invariante para diferentes sondas. O conceito básico é relativamente simples e um excelente protocolo padrão foi bem estabelecido 4. Nosso protocolo é uma versão simplificada do protocolo original 4 que ainda fornece excelente detecção de padrões de expressão gênica no embrião inicial. Os embriões são fixados e então preparados para hibridização, alterando soluções e temperaturas de modo que permita a ligação de alta rigidez da sonda de RNA antisense marcada ao seu mRNA alvo. A sonda não ligada é lavada e os embriões são então preparados para a ligação de um anticorpo contra o rótulo nas sondas de RNA. O excesso de anticorpos é então lavado e uma reação enzimática de cor é usada para localizar onde a sonda de RNA está ligada ao embrião. Existem agora várias linhas transgênicas de Xenopus que impulsionam a expressão de proteínas fluorescentes em tecidos específicos e estão disponíveis nos centros de estoque de Xenopus, como o National Xenopus Resource em Woods Hole. Embora muito útil para muitos experimentos que exigem o exame da organogênese em embriões vivos, essa opção requer alojamento separado para as linhagens transgênicas. 
A hibridização in situ pode delinear claramente onde órgãos ou tipos de células específicos se formarão no embrião inicial (Figura 1). A técnica é notavelmente sensível, uma vez que se pode detectar a expressão gênica em um pequeno número de células em um único embrião 5. No entanto, a hibridização in situ usando a intensidade da coloração colorimétrica não é considerada quantificável porque a reação de cor não é linear. Apesar da dificuldade em quantificar a intensidade da coloração, as mudanças na expressão são frequentemente bastante perceptíveis; particularmente quando a hibridização in situ mostra aumentos ou diminuições quantificáveis no tamanho dos domínios de expressão 6,7. 
As vantagens claras da hibridização in situ de montagem inteira a tornam um ensaio crítico no estudo do desenvolvimento inicial. No entanto, é demorado e requer muitas etapas ao longo de vários dias. Este protocolo é uma versão simplificada do protocolo padrão que elimina várias etapas sem reduzir a qualidade do resultado in situ. A simplificação também elimina fontes de variabilidade, facilitando a solução de problemas se uma hibridização in situ não for ideal. Especificamente, eliminamos o uso de tratamentos com proteinase K e RNAse do embrião, duas etapas que podem depender da qualidade do reagente e também podem reduzir a intensidade do sinal se exageradas. O protocolo também oferece algum grau de economia de custos devido à eliminação do uso de vários reagentes. Finalmente, este protocolo também fornece algumas diretrizes simples para melhorar a captura de imagens de resultados de hibridização in situ. Embora este protocolo seja otimizado para trabalho em embriões de Xenopus, é provável que pelo menos algumas das simplificações sejam aplicáveis ao trabalho de hibridização in situ em outros sistemas embrionários.

<table><tbody><tr><td>Agitadores de tubos Labguake</td><td>VWR</td><td>17-08-2011</td><td></td></tr><tr><td>Frascos VWR</td><td>VWR</td><td>10-07-2012</td><td></td></tr><tr><td>L-cisteína</td><td></td><td>BioShop CYS342.500</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de trifosfato de ribonucleosídeo, 100mM</td><td>Roche</td><td>11277057001</td><td></td></tr><tr><td>Digoxigenina-11-UTP</td><td>Roche</td><td>11209256910</td><td></td></tr><tr><td>inibidor Rnase (Rnase OUT)</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>T7 RNA Polimerase</td><td>Fermentas</td><td>EPO111</td><td></td></tr><tr><td>T3 RNA Polimerase</td><td>Fermentas</td><td>EPO101</td><td></td></tr><tr><td>SP6 RNA Polimerase</td><td>Fermentas</td><td>EPO131</td><td></td></tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>18047-019</td><td></td></tr><tr><td>Soro de Ovelha</td><td> Wisent</td><td>31150</td><td></td></tr><tr><td>Reagente bloqueador</td><td>Roche</td><td>11096176001</td><td></td></tr><tr><td>BM roxo Ap Substrato</td><td>Roche</td><td>11442094001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Digoxigenina-Ap Feb fragmentos</td><td>Roche</td><td>11093274910</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>VWR</td><td>CAMX0485-7</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>BioShop</td><td>SOD002.10</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>EM&nbsp;</td><td>7910</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BioShop</td><td>EDT001.500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioShop</td><td>TRS003.5</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>EM&nbsp;</td><td>9480</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>Mops</td><td>BioShop</td><td>MOP001.250</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E-3889-25G</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>BioShop</td><td>PAR070.500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Formamida</td><td>&nbsp; VWR&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>CAFX0420-4&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNA</td><td>Roche</td><td>10109223001</td><td></td></tr><tr><td>Ácido Maleico</td><td>&nbsp; VWR&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>CAMX0100-3</td><td></td></tr><tr><td>citrato de sódio tri-sódio</td><td>BioShop</td><td>CIT001</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrogênio (solução a 30%)</td><td>EM&nbsp;</td><td>HX0635-2</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>BioShop</td><td>ALB001.100</td><td></td></tr><tr><td>PVP-40</td><td>ICN</td><td>195451</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0300-10</td><td></td></tr><tr><td>Álcool Benzílico</td><td>Sigma</td><td>B-1042</td><td></td></tr><tr><td>Benzoato de Benzila</td><td>Sigma</td><td>B-6630</td><td></td></tr><tr><td>Agarose UltraPure&nbsp;</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>16500-500</td><td></td></tr></tbody></table>

compreender organogenesis precoce usando um simplificado<em&gt; in situ</em&gt; protocolo de hibridação em<em&gt; xenopus</em

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Organogênese é o estudo de como os órgãos são especificados e, em seguida, adquirem sua forma e funções específicas durante o desenvolvimento. O embrião de Xenopuslaevis é muito útil para estudar a organogênese porque seu grande tamanho os torna muito adequados para identificar órgãos nas primeiras etapas da organogênese. Neste momento, o principal método usado para identificar um órgão ou primórdio específico é a hibridização in situ de montagem inteira com sondas de RNA antisense marcadas específicas para um gene que é expresso no órgão de interesse. Além disso, é relativamente fácil manipular genes ou vias de sinalização em Xenopus e a hibridização in situ permite testar mudanças na presença ou morfologia de um órgão-alvo. A hibridização in situ de montagem inteira é um protocolo de vários dias com muitas etapas envolvidas. Aqui, fornecemos um protocolo simplificado com número reduzido de etapas e reagentes usados que funciona bem para ensaios de rotina. Os robôs de hibridização in situ facilitaram muito o processo e detalhamos como e quando utilizamos essa tecnologia no processo. Uma vez concluída uma hibridização in situ, capturar a melhor imagem do resultado pode ser frustrante. Fornecemos conselhos sobre como otimizar a imagem dos resultados da hibridização in situ. Embora o protocolo descreva a avaliação da organogênese em Xenopus laevis, o mesmo protocolo básico pode quase certamente ser adaptado para Xenopus tropicalis e outros sistemas modelo.

A utilização de sondas específicas de tecido podem fornecer informações de destaque no que diz respeito ao estado de desenvolvimento para órgãos específicos. Nos exemplos a seguir, a fase do embrião é baseado na tabela estadiamento Nieuwkoop e Faber a 11. Se alguém usa genes formulário sondas expressas após a diferenciação, troponina I cardíaca na fase 28-30, por exemplo (Figura 1C), a presença ou o tamanho de um órgão diferenciado pode ser avaliado em qualquer diferenciação fase pos...

O embrião de Xenopus laevis continua a ser excepcionalmente útil no estudo do desenvolvimento inicial devido ao seu grande tamanho e facilidade de manipulação. É fornecido um protocolo simplificado para o protocolo de hibridização in situ de montagem inteira que pode ser usado na identificação de órgãos específicos neste sistema modelo.

Compreender Organogenesis precoce Usando um Simplificado<em&gt; In Situ</em&gt; Protocolo de hibridação em<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

O objetivo geral do experimento a seguir é demonstrar onde um determinado gene é expresso dentro de um embrião intacto. Isso é alcançado fixando o RNA para ser localizado no local dentro do embrião como um segundo passo. Uma sonda de RNA antissenso específica para o gene de interesse é hibridizada com o RNA alvo dentro do embrião.Esta sonda contém um epítopo, geralmente digoxigenina, que pode ser posteriormente detectado. Em seguida, um anticorpo conjugado à fosfatase alcalina é hibridizado ao epítopo na sonda de RNA, seguido pelo uso de uma coloração colorimétrica. Para visualizar onde o RNA está localizado dentro do embrião, são obtidos resultados que mostram com precisão onde o gene de interesse é expresso, com base na reação cor e no conhecimento da anatomia do embrião.A principal vantagem do nosso protocolo em relação aos protocolos existentes é que ele é mais rápido e utiliza menos reagentes, sem perda aparente de qualidade. Este método pode responder perguntas fundamentais na embriologia, como a especificação e o padrão de formação dos tecidos. Embora este método possa fornecer informações sobre o desenvolvimento de opus, ele também pode ser usado para muitos outros embriões

understanding-early-organogenesis-using-simplified-situ-hybridization

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este vídeo demonstra de 2 cores montar toda hibridização in situ, um método pelo qual o padrão de expressão espacial e temporal de 2 genes diferentes podem ser visualizados em embriões de galinha jovens. Este método foi originalmente introduzido por David Wilkinson, Henrique Domingos, Phil e David Ingham Ish-Horowicz.

Monte Whole dupla hibridização in situ de embriões de galinha precoce

Xenopus embrionárias epitélios são um sistema modelo ideal para estudar os comportamentos das células, como o desenvolvimento de polaridade e mudar de forma durante a morfogênese epitelial. Histologia tradicional de amostras fixa é cada vez mais sendo complementado por live-célula de imagem confocal. Aqui nós demonstrar os métodos para isolar os tecidos de rã e visualizar ao vivo as células epiteliais e seus citoesqueleto usando live-célula microscopia confocal.

Em células vivas, Imagem e Análise Quantitativa de células embrionárias epiteliais em Xenopus laevis</em

Xenopus ectoderma embrionário tornou-se um modelo atraente para os estudos da polaridade celular. Um ensaio é descrito, em que a distribuição subcelular de proteínas fluorescentes é avaliada em células ectoderma. Este protocolo vai ajudar abordar as questões relacionadas ao controle espacial de sinalização.

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O peixe-zebra, um pequeno peixe tropical, tornou-se um modelo popular para estudar a função do gene durante o desenvolvimento de vertebrados e doença. A expressão espacial e temporal dos genes alvo pode ser determinada...

Alta resolução Monte Whole<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridização dentro embriões Zebrafish para estudar a expressão gênica e função

Uma técnica para o transplante "Extreme Anterior Domain" tecido facial entre embriões de Xenopus laevis foi desenvolvido. Tecidos podem ser movidos de um gene de expressão fundo em outra, permitindo o estudo das necessidades locais para o desenvolvimento craniofacial e sinalização para as interações entre as regiões faciais.

Transplantes faciais em<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Os embriões

O tentilhão-zebra (Taeniopygiaguttata) é um organismo modelo valioso; no entanto, os estágios iniciais do desenvolvimento do tentilhão-zebra não foram extensivamente estudados. O protocolo descreve como dissecar embriões precoces para aplicações moleculares e de desenvolvimento.

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Nos embriões de Xenopus, as células do teto do blastocele são pluripotentes e podem ser programadas para gerar vários tecidos. Aqui, descrevemos protocolos para usar explantes de telhado de blastocele de anfíbios como um sistema de ensaio para investigar as principais características in vivo e in vitro do desenvolvimento neural inicial.

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Manipulação Física para Gerar Embriões Mini de Xenopus

Aprenda a hibridização in situ em montagem inteira em embriões de Xenopus laevis para visualizar a expressão gênica durante o desenvolvimento inicial. Este protocolo simplificado permite localizar com precisão a atividade gênica em órgãos específicos.

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