Desenvolvimento de Amelogenina-quitosana Hidrogel para In Vitro Esmalte Regrowth Com uma interface Densa

O objetivo geral deste procedimento é desenvolver um protocolo para a fabricação de um AMLO e hidrogel de quitosana para reconstrução superficial do esmalte. Isso é feito preparando primeiro fatias de dentes gravadas. Na segunda etapa, é preparado hidrogel fresco de AMLO e kitan.

Em seguida, o hidrogel AMLO e kitan é aplicado na superfície da fatia do dente. Finalmente, o esmalte dos dentes é regenerado com o hidrogel de chizen AMLO em saliva artificial. Em última análise, o tratamento ultrassônico e uma nano dentadura podem ser usados para avaliar a resistência mecânica da camada recém-formada e sua ligação ao esmalte natural.

As implicações desta técnica se estendem ao nosso desenvolvimento de uma tecnologia do que quando aplicada no esmalte dentário afetado, tanto em adultos quanto em crianças, interrompe a lesão de cárie precoce, reconstrói a perda de esmalte devido à cárie, preserva a estrutura dentária e previne a progressão da cárie dentária. Demonstrando o procedimento estará o Dr. Chittar um, um pós-doutorado do meu laboratório. Comece selecionando um terceiro molar humano sem nenhuma cárie restaurada.

Use uma serra diamantada de baixa velocidade resfriada a água para cortar a coroa longitudinalmente em fatias de dois milímetros de espessura e, em seguida, remova a parte da raiz do molar por ultrassom. Limpe as fatias por dois minutos e depois enxágue-as com água ionizada três vezes para simular lesões erosivas. Condicione as duas fatias com ácido fosfórico a 30% por 30 segundos.

Em seguida, enxágue-os imediatamente com a água ionizada. Então ultrassonicamente. Limpe as fatias gravadas por dois minutos novamente e enxágue-as com água ionizada.

Mais três vezes. Para preparar a solução estoque Kazan. Primeiro dissolva 1% de peso por volume, Kazan em uma solução de ácido acético de 1% de volume por volume, seguido de agitação a 80 graus Celsius durante a noite.

Depois de resfriar a solução à temperatura ambiente, passe o esan por um filtro de 0,45 micrômetro e, em seguida, adicione um hidróxido de sódio molar para ajustar o pH para 5,0. Para preparar a solução-mãe de cálcio e fosfato, pesar o cloreto de cálcio e misturar uma solução 0,1 molar. Em seguida, vórtice a solução até que ela desapareça e ajuste o valor do pH para 11 com um hidróxido de sódio molar.

Em seguida, pese o fosfato de sódio diba. Misture uma solução molar 0,1 e vórtice até que a solução esteja límpida. Para preparar o hidrogel AMLO Genin kaizan, adicione 960 microlitros da solução 1%esan recém-preparada a um tubo contendo 200 microgramas de genin AMLO suíno recombinante.

Em seguida, vortex a solução até ficar clara. Agora, adicione 25 microlitros de solução de cloreto de cálcio 0,1 molar, seguidos por 15 microlitros de solução de fosfato de sódio diba 0,1 molar à solução de ozan contendo AMLO. Vortex a solução por cinco minutos.

Em seguida, adicione cuidadosamente um hidróxido de sódio molar para ajustar o pH da solução AMLO e ozan para 6,5 AMLO e ozan O hidrogel se formará quando o valor do pH atingir 6,5 para iniciar o crescimento do esmalte no AMLO andaz, um hidrogel. Primeiro, ajuste o pH da solução de saliva artificial para 7,0 com um hidróxido de sódio molar e armazene a solução a quatro graus Celsius. Em seguida, use uma seringa para aplicar cerca de 20 microlitros de AMLO e hidrogel chizen na fatia do dente da borda e coloque-a em um dessecador em temperatura ambiente.

Após duas horas, adicione 300 PPM de fluoreto de sódio à solução de saliva e, em seguida, transfira o corte do dente para um copo contendo 30 mililitros da solução. Cubra o copo com papel alumínio e coloque-o no forno a 37 graus Celsius. Finalmente, remova a fatia do dente após três a sete dias e coloque-a em um dessecador em temperatura ambiente até secar após o reparo por AMLO e hidrogel chizen por sete dias, uma camada semelhante a esmalte com espessura de 15 micrômetros se forma na superfície do esmalte condicionado.

A camada recém-crescida é feita de matrizes altamente ordenadas de cristais com um diâmetro de cerca de 50 nanômetros crescendo preferencialmente ao longo do eixo do mar perpendicular à superfície. Observe que esses cristais em forma de agulha são organizados em feixes semelhantes às unidades fundamentais do esmalte natural. A imagem de difração de elétrons da área selecionada da camada reparada exibe um padrão em forma de arco, revelando um alinhamento hierárquico dos cristais recém-crescidos.

Ao longo da análise de difração de raios X de 0 0 2 direções confirma que a camada recém-crescida é composta de apetite, que estão alinhados ao longo do eixo C cristalográfico de acordo com a microscopia eletrônica de varredura e observações de difração de elétrons de área selecionada nesta imagem, a microestrutura da interface entre a camada recém-crescida e o esmalte natural é mostrada. Observe que os cristais recém-crescidos não cresceram na mesma direção que o cristalito de esmalte original e que o crescimento do apetite mediado por proteínas resulta em uma orientação perpendicular dos cristais recém-crescidos em relação aos cristais de esmalte naturais. Não há lacuna aparente na interface entre a camada recém-crescida e o substrato de esmalte.

Em nanoescala, o esmalte e os cristais regenerados se fundiram para formar uma interface perfeita. Após 10 minutos de tratamento ultrassônico, a camada recém-crescida formada no hidrogel AMLO Genin chito ainda está fortemente ligada à superfície do esmalte e a estrutura organizada é preservada para a amostra tratada com hidrogel tizen sem am mologen. E, no entanto, observa-se uma grande lacuna entre o esmalte e a camada reparada para distinguir claramente entre a camada recém-crescida e o esmalte natural.

Neste experimento, a genina AMLO na camada recém-crescida foi marcada com imunofluorescência, a presença da genina AMLO foi então confirmada pela fluorescência verde dentro da camada recém-crescida. Conforme mostrado no gráfico após a corrosão ácida, a dureza e o módulo da superfície do esmalte diminuem quase 98 e 88%, respectivamente. O grupo controle tratado com hidrogel de ozan sem genina AMLO demonstra apenas melhora limitada na dureza e no módulo.

Em contraste, após a mineralização no hidrogel AMLO e ozan, observa-se um aumento de quase quatro vezes no módulo e nove vezes na dureza após seu desenvolvimento. Em VI e avaliação adicional em modelos, este protocolo pode ser expandido para projetar uma tecnologia para o tratamento de defeitos de enam, como cárie precoce, distância e erosão. Ena.