O ciático Nervo cuffing Modelo de Dor Neuropática em Ratos
July 16th, 2014
A dor neuropática é uma conseqüência de uma lesão ou doença que afeta o sistema somatossensorial. O "modelo cuff" da dor neuropática em ratos consiste na implantação de um manguito de polietileno em todo o ramo principal do nervo ciático. A alodinia mecânica é testado usando filamentos de von Frey.
O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo de camundongo de dor neuropática após compressão de nervos periféricos. Após preparar o animal para a cirurgia, o ramo principal do nervo ciático é exposto e um manguito de polietileno é inserido ao redor do nervo. Em seguida, a ferida é fechada.
Para testar a sensibilidade da pata, os ratos são colocados em caixas transparentes sobre uma placa de aço perfurada. Uma série de filamentos de Von Fray cada vez maiores são então aplicados à pata até que o animal reaja consistentemente à pressão. Em última análise, a presença de uma alodinia mecânica de longa duração e ipsilateral à pata operada pode ser observada plotando os limiares mecânicos obtidos no teste de Von Fray ao longo do tempo.
Este modelo pode ajudar a responder a questões-chave no campo da dor, como os mecanismos subjacentes à dor neuropática. Também pode ser usado para estudar os tratamentos atuais, para testar agentes neoterapêuticos ou para estudar as consequências anxi depressivas da dor neuropática. A demonstração visual desse método é, no entanto, crítica, pois o implante do manguito é uma etapa difícil de explicar sem suporte visual.
Para avaliar o limiar de retirada mecânica da pata, primeiro coloque os camundongos para habitação em caixas individuais transparentes em uma placa de aço perfurada, até 12 animais podem ser testados em paralelo para o teste. Use filamentos de von Frey. Esses cabelos de plástico de diâmetros calibrados são fixados a um aplicador portátil.
Ao dobrar, cada filamento exerce uma pressão proporcional ao seu diâmetro. Em camundongos, os filamentos mais usados variam do ponto 16 a 10 gramas. Comece com a pressão mais leve.
Ao medir os limiares para testar os ratos, aplique o filamento na pata traseira esquerda até que os filamentos comecem a dobrar. Evite as bordas laterais da pata, que podem ser mais sensíveis. O animal reage à aplicação do filamento.
Se a pata recuar ou for retirada, repita a aplicação mais duas vezes e, se o animal reagir às três aplicações, teste a outra pata. Caso contrário, aplique os filamentos um total de cinco vezes antes de testar a outra pata. Teste cada mouse consecutivamente com o filamento de von Frey escolhido e, em seguida, repita o processo com o próximo filamento.
Se um animal reage três vezes ao mesmo filamento, isso é considerado um resultado positivo. Quando dois filamentos consecutivos obtiverem pontuações positivas, pare o teste nessa pata. O limite de retirada da pata é o menor dos valores de dois gramas para um determinado camundongo.
Esses valores podem diferir entre as duas patas. Repita este procedimento diariamente até que pelo menos três valores limite consecutivos estejam estáveis. Em seguida, prossiga com a cirurgia.
Registre o peso do animal, que deve ser superior a 20 gramas, e anestesie o animal com cetamina e xilazina. Verifique a ausência de reflexos da pata ou dos olhos. Aplique um gel protetor nos olhos com um cotonete.
Em seguida, raspe a perna direita do joelho ao quadril. Em seguida, posicione o animal com a pata traseira direita para cima em um pequeno travesseiro e prenda essa perna com fita adesiva. Desinfete a pele exposta com clorexidina e etanol 70%.
Comece palpando para encontrar o fêmur. Em seguida, faça uma incisão de 0,5 centímetro paralela ao fêmur cerca de 1,5 milímetros posterior ao fêmur. Agora, usando bastões de autoclave, separe o músculo próximo ao fêmur, mas não os corte.
O ramo principal do nervo ciático deve ser visível. Se houver sangramento, certifique-se de limpá-lo com um cotonete para os controles simulados. Isso completa a cirurgia para que os camundongos sejam algemados.
Insira dois bastões abaixo do nervo ciático para expor o ramo principal do nervo. Adicione um esguicho de soro fisiológico para hidratar o nervo. Agora segure um manguito dividido com uma vara de aço pontiaguda e uma braçadeira de buldogue.
Em seguida, insira o bulldog e gire-o 180 graus para que ele segure o manguito oposto à abertura lateral do manguito. Agora feche o buldogue e remova a vara pontiaguda. Em seguida, peça a um assistente que segure os dois bastões sob o nervo e separe-os suavemente.
Para permitir o acesso ao nervo, insira o manguito de dois milímetros ao redor do ramo principal do nervo ciático. Comece inserindo a parte do manguito que é distal ao buldogue ao redor da parte do nervo que é proximal ao quadril. Em seguida, feche o manguito suavemente com um alicate para garantir que o manguito esteja fechado corretamente.
Vire por cima. Agora, retire os palitos e suture a pele fechada. Usando nós cirúrgicos, transfira o mouse para sua gaiola doméstica limpa, colocando-o no lado esquerdo.
Mantenha-o aquecido com a lâmpada de calor até que acorde. Adicione comida e água extras na gaiola para que o rato possa se nutrir. Os animais podem ser testados quanto a limiares de abstinência ruins no dia seguinte à cirurgia, mas é melhor esperar três dias para diminuir a hipersensibilidade pós-cirúrgica com este procedimento.
O manguito em camundongos exibe uma alodinia ipsilateral por mais de dois meses em comparação com os controles simulados. Tratar os camundongos com cinco miligramas por quilograma de nortriptilina. Um antidepressivo tricíclico duas vezes ao dia alivia a alodinia neuropática após cerca de duas semanas de tratamento.
Se o tratamento fosse interrompido, os camundongos geralmente recaíam em três a quatro dias. Este modelo também é sensível a outro tratamento da dor neuropática: os gabapentinóides. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como descobrir o ramo principal do nervo ciático em mize anestesiado e inserir uma tampa ao redor dele.
Neste modelo de dor neuropática, o teste de uma briga permite avaliar ainda mais os limiares mecânicos e estudar as respostas aos medicamentos.
Visão Geral
Este artigo descreve um modelo de dor neuropática em camundongos induzida por compressão do nervo periférico usando um manguito de polietileno ao redor do nervo ciático. O modelo permite a avaliação da alodinia mecânica através do teste de filamentos von Frey.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Pesquisa sobre Dor
- Modelos Animais
Fundamentos
- A dor neuropática resulta de lesões ou doenças que afetam o sistema somatossensorial.
- O modelo de manguito é um método amplamente utilizado para estudar dor neuropática em camundongos.
- A alodinia mecânica é um sintoma comum que pode ser medido neste modelo.
- Compreender os mecanismos da dor neuropática é crucial para desenvolver tratamentos eficazes.
Objetivo do Estudo
- Estabelecer um modelo de camundongo confiável para estudar dor neuropática.
- Avaliar a sensibilidade mecânica e a alodinia após a compressão do nervo.
- Investigar potenciais tratamentos para dor neuropática.
Métodos Utilizados
- Preparação do camundongo e implantação cirúrgica de um manguito de polietileno ao redor do nervo ciático.
- Avaliação da alodinia mecânica usando filamentos von Frey.
- Monitoramento dos limiares de retirada da pata ao longo do tempo.
- Avaliação dos efeitos do tratamento usando nortriptilina e gabapentóides.
Principais Resultados
- Os camundongos exibiram alodinia ipsilateral de longa duração após a implantação do manguito.
- Os limiares mecânicos foram estáveis e mensuráveis ao longo do tempo.
- O tratamento com nortriptilina aliviou a alodinia neuropática.
- Os gabapentóides também mostraram eficácia na redução dos sintomas de dor.
Conclusões
- O modelo de manguito é uma ferramenta valiosa para estudar os mecanismos da dor neuropática.
- Permite a avaliação da eficácia do tratamento em um ambiente controlado.
- Pesquisas futuras podem se basear neste modelo para explorar novas estratégias terapêuticas.
