Síntese e Purificação de Iodoaziridines Envolvendo Quantitative Seleção do Optimal fase estacionária para cromatografia

O objetivo geral deste procedimento é preparar e purificar um I oto uridina final. Isso é realizado primeiramente gerando di ito metil lítio por desprotonação do di ito metano em baixa temperatura e reagindo com um imã. O segundo passo é aquecer rapidamente a mistura reacional para promover a ciclização do intermediário di-iodeto ao produto desejado de I oto uridina.

Em seguida, avalia-se a estabilidade do produto I oto Uridina frente a várias fases estacionárias utilizadas em cromatografia para determinar a mais adequada para a purificação. O passo final consiste em purificar o I oto a iodo e realizar análise de RMN de próton. Em última instância, esta triagem de fases estacionárias para cromatografia é utilizada para demonstrar que a fase estacionária básica Illumina modificada para atividade quatro é a mais adequada para a purificação do IDO odine.

Tivemos pela primeira vez a ideia deste método quando descobrimos que os novos produtos de iodo IDO eram instáveis à cromatografia em gel de sílica e precisávamos de um método alternativo de purificação. A partir daí, desenvolvemos um procedimento para avaliar a estabilidade do iodo IO frente a uma variedade de fases estacionárias para cromatografia, que também pode ser aplicado a outros compostos potencialmente sensíveis. Demonstrarão este procedimento Tom e Dom, ambos estudantes de doutorado do meu grupo de pesquisa.

Primeiro, seque com chama um balão de fundo redondo de 100 mililitros contendo um bastão de agitação e equipado com septo, sob um fluxo de argônio. Após deixar o balão esfriar até a temperatura ambiente, adicione 5,7 mililitros de tetrahedrano anidro e 2,7 mililitros de éter etílico anidro por meio de seringa, e 315 microlitros de hexaetildisilano recém-destilado por meio de uma microsseringa. Coloque o balão em um banho de ultrassom de tamanho apropriado que permita sua completa imersão.

Após iniciar a agitação, adicione gelo seco e acetona ao recipiente para resfriar a solução até menos 78 graus Celsius. Em seguida, cubra o recipiente com papel de alumínio para minimizar a exposição do vaso de reação. À luz, adicione então 0,6 mililitros de 2,5 molar de butil-lítio em hexanos gota a gota por meio de seringa, durante dois a três minutos.

Após deixar a mistura sob agitação a menos 78 graus Celsius por 30 minutos. Para formar a solução de hexaetildilano de lítio, adicione um mililitro de tetrahidrofuran anidro a um balão de fundo redondo de 10 mililitros previamente secado em chama, utilizando uma seringa. Em seguida, adicione 135 microlitros de diclorometano por meio de uma microsseringa e gire suavemente o balão para garantir que a solução esteja bem misturada.

Em seguida, adicione gota a gota a solução de metano di-ITOM durante dois minutos à solução de dilano de lítio hexaetílico a menos 78 graus Celsius, deixando a solução sob agitação por 20 minutos. Pese 135 miligramas da amina em outro balão de fundo redondo de 10 mililitros previamente seco ao fogo e dissolva em dois mililitros de tetrahidrofuran anidro. Após os 20 minutos de tempo de desprotonação, adicione gota a gota a solução de amina à solução de metil-lítio di-ITO durante cinco minutos a menos 78 graus Celsius.

Imediatamente após a conclusão da adição gota a gota, retire o vaso de reação do banho de gelo seco. Cubra o frasco com papel alumínio e transfira-o para um banho de gelo e água a zero graus Celsius. Agite a solução por 15 minutos a zero graus Celsius.

Em seguida, interrompa a reação adicionando 30 mililitros de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Transfira a mistura para um funil de separação e adicione 30 mililitros de diclorometano. Agite a mistura, ventile o funil e remova a camada orgânica inferior.

Após repetir a extração duas vezes, adicione sulfato de sódio às camadas orgânicas combinadas para remover qualquer água presente na solução. Em seguida, filtre o sulfato de sódio por filtração a vácuo utilizando um funil de vidro com tampão de algodão, coletando o filtrado em um balão de fundo redondo de 250 mililitros, e remova o solvente sob pressão reduzida em um evaporador rotativo. Para obter uma amostra impura do produto de uridina ITO desejado.

Adicione 1 3 5 TRIMETOXibenzeno como padrão interno à diina bruta e dissolva a amostra de diina bruta em diclorometano. Certifique-se de que esta esteja completamente dissolvida. Retire uma alíquota dessa mistura e, em seguida, remova o solvente sob pressão reduzida.

Quando finalizado, analise a amostra por espectroscopia de RMN de próton. Após a análise de RMN, abra o espectro de RMN de próton registrado utilizando um software padrão de processamento de RMN, como o MestReNova. Clique com o botão direito no espectro e selecione integração.

Em seguida, escolha manual para fornecer a ferramenta de integração. Clique e arraste para cobrir a largura dos picos em 6,08 ppm e 4,87 ppm, a fim de integrar os sinais do padrão interno e do sinal CHI do aine, respectivamente. Clique com o botão direito no valor integrado do pico em 6,08 ppm, selecione editar integral e altere o valor normalizado para 3,0.

Em seguida, utilize o valor integral atualizado do sinal de CHI do iodo para determinar o rendimento do iodo I OTO. Após a conclusão da análise por RMN, misture 25 gramas das seguintes fases estacionárias com 50 mililitros de acetato de etila a 5% em hexano em seis frascos cónicos separados de 250 mililitros contendo barras de agitação no frasco cónico. Prepare uma solução de 50 mililitros, um acetato de etila a 5% em hexano, para ser usado como controle.

Em seguida, agite as suspensões em uma placa de agitação magnética. Adicione alíquotas de dois mililitros da solução padrão interno I OTO Azarin a cada um dos frascos cónicos mantidos à temperatura ambiente. Em seguida, agite as misturas de suspensão por 30 minutos.

Após 30 minutos, filtre cada uma das misturas em suspensão sob vácuo utilizando um funil centralizado, coletando cada filtrado em um balão de fundo redondo de 250 mililitros. Lave o resíduo no funil centralizado duas vezes com 30 mililitros de diclorometano. Remova o solvente das amostras resultantes utilizando um evaporador rotativo.

Em seguida, analise as amostras por espectroscopia de RMN de próton para calcular a quantidade de iota odina recuperada em cada caso. Conforme descrito anteriormente, registre os rendimentos no caderno de laboratório. Compare os rendimentos de I OTO Aine obtidos a partir de cada fase estacionária testada com o obtido anteriormente para determinar a amostra que fornece o maior rendimento.

Em seguida, repita a síntese previamente descrita para gerar a mistura bruta de iodo IO a fim de produzir a atividade básica de Illumina. Quatro, adicione 100 gramas de atividade básica de Illumina, um a um frasco redondo de 500 mililitros, e então adicione 10 mililitros de água ao frasco. Após adaptar o frasco com uma rolha de vidro, agite-o vigorosamente até que nenhum grumo seja visível, indicando uma distribuição uniforme da água por toda a Illumina.

Uma vez que a Illumina tenha esfriado até a temperatura ambiente, purifique o iodo IO bruto por cromatografia em coluna utilizando a atividade básica Illumina quatro. Como fase estacionária, elua com hexano gradativo até 5%YL acetato taxano. Combine as frações contendo o produto em um balão de fundo redondo e remova o solvente utilizando um evaporador rotatório para obter o iodo I oto puro.

Antes da purificação, um rendimento de 59% de I oto a iodo foi calculado por RMN de prótons. No entanto, este I oto a iodo foi difícil de purificar e sofreu decomposição significativa durante a purificação em sílica em Illumina básica. A atividade quatro forneceu o produto em 48% de rendimento.

A análise por RMN de prótono forneceu uma série de rendimentos para as fases estacionárias em relação ao padrão interno; a atividade básica Illumina quatro proporcionou o rendimento mais alto de 53%, que é o mais próximo do rendimento obtido por RMN. Portanto, a atividade básica Illumina quatro foi escolhida para o fim. O iota total foi recuperado por purificação em IR.

Uma ampla seleção de aminas ITO pode ser obtida com alto rendimento. Tanto aminas alifáticas quanto aromáticas são compatíveis com a reação, incluindo substituintes estericamente exigentes em posições terciárias e orto. A título de exemplo, propõe-se que a reação ocorra por desprotonação, seguida por adição nucleofílica.

Para fornecer o intermediário amino gem-di-iodeto, o aquecimento subsequente induz uma ciclização altamente estereosseletiva DIA, favorecendo o iodo cis. Devido a interações estéricas sutis no estado de transição da ciclização, durante a otimização da reação, o controle de temperatura e o tempo foram essenciais para o resultado da reação. A interrupção da reação sem aquecimento forneceu o iodo final IO e o di-iodeto amge.

No entanto, os produtos sofrem degradação sob as condições da reação, o que é evitado aquecendo a reação e reduzindo os tempos de reação. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como sintetizar o produto de irídio IO e avaliar sua estabilidade frente a uma ampla gama de fases estacionárias para purificação por cromatografia. Não se esqueça de que trabalhar com lítio mbu pode ser extremamente perigoso e de que precauções, como trabalhar sob atmosfera de nut e neutralizar com segurança o excesso, devem ser tomadas.

O reagente deve sempre ser utilizado ao realizar este procedimento.