Name: Induzida pela quimioterapia Vascular Toxicidade - em tempo real In vivo Imagem de Impairment Vessel (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: Aprenda a usar microscopia confocal de fibra para imagem vascular em tempo real em modelo animal. Este método permite avaliar a toxicidade vascular de agentes quimioterapêuticos com alta definição celular.

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Declaração de Ética: Todos os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidado Animal Institucional. Cuidados com os animais foi de acordo com as diretrizes institucionais. Camundongos ICR feminino (7-8 semanas de idade; 25 - 30 g) foram alojados em ar condicionado, luz controlada biotério da Faculdade de Medicina Sackler na Universidade de Tel-Aviv. Pelo termo, os animais foram sacrificados com overdose de anestesia. 1. Fibred microscopia de fluorescência confocal (FCFM) Calibração <ol><li> Ligar o dispositivo. </li><li> Ligue a microssonda (mini0 / 30). </li><li> Calibrar o dispositivo de acordo com as instruções do fabricante. </li></ol> 2. Ratos Preparação for Imaging <ol><li> Anestesiar por uma injecção subcutânea de ambas Ketaset (100 mg / kg) e XYL-M2 (6 mg / kg). Confirme anesthetization adequada por falta de resposta aos toe-pinch. </li><li> Faça uma incisão na pele abaixo da virilha, a fim de<html> revelar os vasos arteriais femorais. Manter o local da incisão úmido com solução salina após a incisão. </li><li> Aqueça a cauda, ​​usando um saco (ou uma luva) cheia de água quente (não muito quente ao toque) durante aproximadamente 30 segundos. Prepara-se uma (IV) para a administração intravenosa de derivação de FITC dextrano (um agente de contraste) e de um ou outro agente quimioterapêutico ou de solução salina, por inserção de uma agulha (30 L, 1/2 polegada) na veia da cauda e ligando uma seringa de 1 ml a ele . Garantir a veia está aberto ao injetar soro fisiológico. NOTA: Uma administração IV de FITC dextrano (peso molecular elevado; 100 ul; 10 mg / ml; 2,000 kDa) facilita a visualização da microvasculatura femoral por FCFM. Doxorrubicina (100 ul; 8 mg / kg, adriamicina) ou solução salina também será mais tarde administrados IV na veia da cauda de pré-aquecida. </li><li> Posicione o mouse supinely em um palco de poliestireno. Prenda o mouse para a almofada e manter a posição usando fita adesiva cirúrgica. </li></ol>title &quot;&gt; 3. Imagens de fêmur vasos sanguíneos, FCFM Durante e após a administração de doxorrubicina ou Saline NOTA: O microscópio confocal desfibrado utilizado neste estudo é composto por duas unidades: (1) microssonda (mini0 / 30). (2) unidade de digitalização a laser (LSU-488; 488 nm de comprimento de onda). <ol><li> Executar todas as datas-voltas análises utilizando o laser de comprimento de onda nm LSU 488. NOTA: O principal detector unidade detecta o filtrado (500-650 nm) fluorescência emitida. As imagens obtidas são reconstruídos depois e exibido a uma taxa de 12 frames / seg. </li><li> Desligue cuidadosamente a seringa da agulha e anexar uma nova seringa contendo FITC dextrano. Administrar (IV) 100 uL de FITC dextrano. </li><li> Deslocar a microssonda (mini0 / 30) para um campo de vista apropriado e fixar-lo, após um ajuste para o eixo z, a fim de se obter a imagem correspondente. Aguarde até que o sinal inicial a desvanecer-se, até que um sinal claro e focado é visible. </li><li> Grave um fluxo de sangue linha de base para um curto período de estabilização (~ 30 segundos). Em seguida, conectar-se a agulha outra seringa, contendo doxorrubicina ou soro fisiológico. IV administrar doxorrubicina a 100 ul de solução salina ou. </li><li> Monitorar o fluxo de FITC-dextrano injectado continuamente durante 20 min. No software associado-FCFM, use o botão de diâmetro na régua superior, a fim de medir os vasos sanguíneos e categorizá-los como pequenos (&lt;15 mm) ou grande (&gt; 15 mm). </li><li> Eutanásia do animal com anestesia overdose. </li></ol>

<ol><li>Chow, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthracyclines+cause+endothelial+injury+in+pediatric+cancer+patients%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Anthracyclines cause endothelial injury in pediatric cancer patients: a pilot study.</a> J Clin Oncol. 24 (6), 925-928 (2006).</li>
<li>Nuver, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+chemotherapy-induced+cardiovascular+changes+in+patients+with+testicular+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Acute chemotherapy-induced cardiovascular changes in patients with testicular cancer.</a> J Clin Oncol. 23 (36), 9130-9137 (2005).</li>
<li>Vos, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+effects+of+cytotoxics%3A+balance+between+desired+and+unwanted+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Rev%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell effects of cytotoxics: balance between desired and unwanted effects.</a> Cancer Treat Rev. 30 (6), 495-513 (2004).</li>
<li>Kerbel, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Accidental%27+anti-angiogenic+drugs.+anti-oncogene+directed+signal+transduction+inhibitors+and+conventional+chemotherapeutic+agents+as+examples.Eur%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer%22%5BJournal%5D)">'Accidental' anti-angiogenic drugs. anti-oncogene directed signal transduction inhibitors and conventional chemotherapeutic agents as examples.Eur.</a> J Cancer. 36 (10), 1248-1257 (2000).</li>
<li>Soultati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+vascular+toxicity+from+chemotherapeutic+agents%3A+preclinical+evidence+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Rev%22%5BJournal%5D)">Endothelial vascular toxicity from chemotherapeutic agents: preclinical evidence and clinical implications.</a> Cancer Treat Rev. 38 (5), 473-483 (2012).</li>
<li>Tempelhoff, G. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+coagulation+during+adjuvant+epirubicin%2Fcyclophosphamide+chemotherapy+in+patients+with+primary+operable+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Blood coagulation during adjuvant epirubicin/cyclophosphamide chemotherapy in patients with primary operable breast cancer.</a> J Clin Oncol. 14 (9), 2560-2568 (1996).</li>
<li>Ben Aharon, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-induced+vascular+toxicity--targeting+potential+pathways+may+reduce+procoagulant+activity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-induced vascular toxicity--targeting potential pathways may reduce procoagulant activity.</a> PLoS One. 8 (9), e7515(2013).</li>
<li>Laemmel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibered+confocal+fluorescence+microscopy+%28Cell-viZio%29+facilitates+extended+imaging+in+the+field+of+microcirculation.+A+comparison+with+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Fibered confocal fluorescence microscopy (Cell-viZio) facilitates extended imaging in the field of microcirculation. A comparison with intravital microscopy.</a> J Vasc Res. 41 (5), 400-411 (2004).</li>
<li>Al-Gubory, K. H., Houdebine, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+green+fluorescent+protein-expressing+cells+in+transgenic+animals+using+fibred+confocal+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of green fluorescent protein-expressing cells in transgenic animals using fibred confocal fluorescence microscopy.</a> Eur J Cell Biol. 85 (8), 837-845 (2006).</li>
<li>Bar-Joseph, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioimaging+as+a+novel+strategy+to+detect+doxorubicin-induced+damage+to+gonadal+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">In vivo bioimaging as a novel strategy to detect doxorubicin-induced damage to gonadal blood vessels.</a> PLoS One. 6 (9), e23492(2011).</li>
<li>Kaushal, V., Kaushal, G. P., Mehta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+toxicity+of+anthracyclines+on+cultured+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endothelium%22%5BJournal%5D)">Differential toxicity of anthracyclines on cultured endothelial cells.</a> Endothelium. 11 (5-6), 253-258 (2004).</li>
<li>Kim, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-induced+platelet+cytotoxicity%3A+a+new+contributory+factor+for+doxorubicin-mediated+thrombocytopenia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-induced platelet cytotoxicity: a new contributory factor for doxorubicin-mediated thrombocytopenia.</a> J Thromb Haemost. 7 (7), 1172-1183 (2009).</li>
<li>Walsh, J., Wheeler, H. R., Geczy, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+tissue+factor+on+human+monocytes+by+cisplatin+and+adriamycin%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Modulation of tissue factor on human monocytes by cisplatin and adriamycin.</a> Br J Haematol. 81 (4), 480-488 (1992).</li>
<li>Kotamraju, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxorubicin-induced+apoptosis+in+endothelial+cells+and+cardiomyocytes+is+ameliorated+by+nitrone+spin+traps+and+ebselen.+Role+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Doxorubicin-induced apoptosis in endothelial cells and cardiomyocytes is ameliorated by nitrone spin traps and ebselen. Role of reactive oxygen and nitrogen species.</a> J Biol Chem. 275 (43), 33585-33592 (2000).</li>
<li>Vasquez-Vivar, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+synthase-dependent+superoxide+generation+from+adriamycin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide synthase-dependent superoxide generation from adriamycin.</a> Biochemistry. 36 (38), 11293-11297 (1997).</li>
</ol>

Avaliar a toxicidade vascular induzida por quimioterapia é um desafio devido à dificuldade em visualizar a dinâmica da vasculatura em resposta a um estímulo em tempo real. Numerosos estudos clínicos têm implicado que várias quimioterapias causar lesão vascular direta, mas o mecanismo e as características desta toxicidade ainda não foi esclarecido. Nós estabelecemos um tempo real, in vivo plataforma de imagem molecular para avaliar a toxicidade vascular potencial de quimioterapia em ratos que compreendem de micr...

A evidência clínica indica que várias classes de quimioterapias provocar uma variedade de patologias vasculares manifestadas por fenômeno de Raynaud, hipertensão, infarto do miocárdio, ataque cerebrovascular, e veno-occlusivedisease hepática 1,2. &quot;As drogas anti-angiogênicos&quot; acidental &quot;&quot; é um termo relativamente novo, que descreve agentes quimioterápicos convencionais que atuam como inibidores da angiogénese possíveis, embora não originalmente desenvolvido para este fim de 3-5, mas projetado para eliminar as células tumorais através da imposição de tão pouco &quot;colateral danos &quot;para as células normais quanto possível 3. Vários quimioterapias têm sido implicados como vasculo-tóxicos como observado em estudos clínicos utilizando biomarcadores séricos. Entre estes estão os agentes (tais como ciclofosfamida), compostos de platina, tais como cisplatina () e antraciclinas 1,2,5-7 alquilação. Complicações cardiovasculares agudos podem ocorrer como result de toxicidade vascular induzida por quimioterapia. Eles podem evoluir para doenças crónicas como a aterosclerose e conta para o aumento do risco de morbidade vascular tarde. No entanto, apesar de montagem evidência clínica, há uma escassez de estudos designados enfatizando o mecanismo de toxicidade vascular e, portanto, maior elucidação da patogênese exata que infligem se justifica. Um grande desafio para revelar o mecanismo de toxicidade vascular induzida por quimioterapia resulta da complexidade de investigar a função vascular in vivo. Descrevemos aqui uma plataforma de alta resolução em imagem molecular in vivo em ratinhos que permite capturar características dos navios, o fluxo de sangue e. Esta plataforma facilita a detecção de efeitos directos vasculares induzidas pelo tratamento: em tempo real, bem como a segui-los durante um período de tempo dentro dos mesmos indivíduos.

<table><tbody><tr><td>anestesia geral</td><td>Fort Dodge Animal Health, IA, EUA e Biove Laboratories, França</td><td></td><td>100 mg/kg de cetaset e 6 mg/kg de</td></tr><tr><td>creme depilatório</td> XYL-M2 (Veet)<td>ReckittBenckiser, Bristol, Reino Unido</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 G, agulha de 1/2 polegada acoplada a uma seringa</td><td></td><td></td><td></td>de 1 ml</tr><tr><td>FITC dextrano (10 mg/ml; MW 2.000 kDa)</td><td>Sigma</td><td>FD2000S</td><td>100 &mu; l volume</td></tr><tr><td>Doxorrubicina</td><td>Teva, Israel</td><td></td><td>8 mg/kg, Adriamicina</td></tr><tr><td>paclitaxel</td><td>Taro, Israel</td><td></td><td>1,2 mg/kg, solução</td></tr><tr><td>salina</td><td></td><td></td><td></td></tr> Medexel</tbody></table>

induzida pela quimioterapia vascular toxicidade - em tempo real<em&gt; in vivo</em&gt; imagem de impairment vessel

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Certas classes de quimioterapias podem exercer alterações vasculares agudas que podem evoluir em condições de longo prazo que podem predispor o paciente a um risco aumentado de morbidade vascular. No entanto, embora a evidência clínica de montagem, há uma escassez de estudos claros de toxicidade vascular e, portanto, a etiologia de um grupo heterogêneo de distúrbios cardiovasculares vasculares / continua a ser elucidado. Além disso, o mecanismo que pode ser a base toxicidade vascular pode completamente diferentes dos princípios da cardiotoxicidade induzida por quimioterapia, a qual está relacionada a lesão directa dos miócitos. Nós estabelecemos um tempo real, in vivo plataforma de imagem molecular para avaliar a toxicidade vascular aguda potencial de terapias anti-cancerígenas. Criámos uma plataforma de in vivo, imagiologia molecular de alta resolução em camundongos, adequado para a visualização de vasos dentro de órgãos confinados e blo de referênciavasos od dentro dos mesmos indivíduos, enquanto que cada indivíduo servir como seu próprio controle. Paredes dos vasos sanguíneos foram prejudicadas após a administração de doxorrubicina, o que representa um único mecanismo de toxicidade vascular que pode ser o evento no início de lesão de órgãos-alvo. Aqui, o método de microscopia de fluorescência (FCFM) imagiologia confocal baseado fibered é descrito, o qual fornece um modo inovador para compreender os fenómenos fisiológicos nos níveis celulares e subcelulares nos sujeitos animais.

Em imagiologia contínua in vivo em tempo real O aparelho de imagem usada aqui é uma alta definição, microscópio confocal fibered, equipado com uma sonda que permite a visualização da vascularização e a sua resposta a vários estímulos como a quimioterapia. Este método é minimamente invasivo, uma vez que, embora possa facilitar a imagiologia de vasos profundos ou órgão, que exige uma pequena incisão para a sonda. Os feixes de sonda consistem em dezenas de milhares de fibras ópti...

Descrevemos aqui o método de imagem baseada em microscopia fluorescente confocal de fibra (FCFM), que fornece um modo inovador para entender fenômenos fisiológicos nos níveis celular e subcelular em animais.

Induzida pela quimioterapia Vascular Toxicidade - em tempo real<em&gt; In vivo</em&gt; Imagem de Impairment Vessel

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

O objetivo geral deste procedimento é utilizar um microscópio confocal de fibra de alta definição para visualizar a vasculatura e sua resposta a diversos estímulos. Isso é realizado primeiramente calibrando o microscópio e, em seguida, injetando o animal por via intravenosa com fitzy dextrina para facilitar a visualização dos vasos sanguíneos; então, os vasos são imageados com o microscópio confocal de fluorescência em tempo real, durante e após o tratamento experimental. Em última instância, esta plataforma de imagem molecular in vivo pode ser utilizada para avaliar a potencial toxicidade vascular de agentes como quimioterápicos em um modelo animal.Em geral, indivíduos novos neste método podem ter dificuldades, pois configurar um sistema e capturar uma imagem estável pode ser desafiador. O procedimento será demonstrado pelo Dr. Sef, um pós-doutorando do laboratório. Antes de preparar o camundongo para a aquisição de imagens, ligue o microscópio de fluorescência confocal com fibra e conecte a microsonda mini zero 30.Calibre o aparelho de acordo com as instruções do fabricante. Quando o microscópio estiver pronto, posicione o camundongo em posição supina sobre uma plataforma de poli

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