Name: Aplicação de duas avistou Ácaro Tetranychus urticae De Estudos Planta-praga de Interação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprenda a coletar e aplicar ácaros Tetranychus urticae em plantas experimentais usando pincel ou bomba. Este protocolo padronizado permite quantificar danos foliares pelo método da grade, facilitando estudos de interação planta-praga com análise estatística.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este projeto foi financiado pelo Governo do Canadá através do Genome Canada e do Ontario Genomics Institute (OGI-046), e Ontario Research Fund–Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (para M.G. e V.G.). T.V.L. é pós-doutorando do Fundo para Pesquisa Científica Flandres (FWO).

1. Manutenção da Mite População Aranha NOTA: Ácaros são criados na Califórnia feijão vermelho (Phaseolus vulgaris). <ol><li> Cultivar plantas a partir de sementes de feijão por 2-3 semanas antes da infestação. </li><li> Intermix essas plantas com plantas infestadas; ácaros adultos vão colonizar rapidamente o material vegetal fresco. </li><li> Remover velhas plantas de feijão infestados cada 7-10 dias, substituindo-os com plantas frescas. </li></ol> 2. Coleta Adulto Feminino Ácaros <ol><li> Mite coleção usando o método de lavagem <ol><li> Para a coleta de ácaros, coloque uma planta de feijão fresco em contato com plantas infestadas de 1 a 2 dias antes do experimento. </li><li> Utilize de 20 a 30 plantas de feijão frescos para coletar 1.000 a 2.000 ácaros adulto do sexo feminino. </li><li> Prepare uma solução de Tween 20 a 0,001%, utilizando a água da torneira à temperatura ambiente. </li><li> Lavar feijoeiro infestadas na solução de Tween 20, utilizando 2-3 plantas de cada vez. </li><li&gt; Cada planta é lavado 2-3x para coletar todos os ácaros das folhas. </li><li> Complete a etapa 2.1.4 dentro de 10 min para evitar a mortalidade dos ácaros. </li></ol></li><li> O isolamento da fêmea adulta ácaros por filtração da suspensão Mite através de peneiras de malha Tamanho Definido <ol><li> Preparar os seguintes peneiras de tamanhos de malha: 500 um (para remover os detritos) e 300 um (para recolher os ácaros adultos fêmeas) (Figura 1A). </li><li> Filtrar a suspensão através do crivo de 500 mM. </li><li> ReFilter a suspensão através da peneira de 300 mM. Ácaros fêmeas adultas serão retidos. </li><li> Mergulhe uma peneira 300 mm com ácaros fêmeas adultas em água corrente limpa para remover o Tween 20. </li><li> Espalhe ácaros em uma única camada na parte inferior da peneira. </li><li> Use papel toalha para remover o excesso de água da rede e dos lados da peneira. NOTA: Isso é feito porque os ácaros precisam secar rapidamente, a fim de se recuperar. </li><li> Preparar um conjunto tal como mostrado na Figura 1B; isso permitirá que os ácaros se mover livremente, mas vai impedi-los de escapar. </li><li> Coloque a peneira com ácaros no topo do crivo que é usado como um suporte. </li><li> Cerque-peneira de fundo com água para evitar os ácaros da dispersão. NOTA: Os ácaros vai começar a recuperar depois de cerca de 5 min. Após aproximadamente 30 minutos, o número de ácaros que se deslocam é suficiente para iniciar a recolha (Figura 1D). Ácaros devem ser recolhidos no prazo de 1 hora, como eles produzem seda que irá interferir com a coleção. </li></ol></li></ol> 3. Fábrica infestação com ácaros NOTA: Uma vez que os ácaros fêmeas adultas se recuperaram, eles podem ser usados ​​para a infestação de plantas. Há dois métodos utilizados para infestar as plantas experimentais com ácaros fêmeas adultas: a) usando um pincel fino (seção de protocolo 3.1) e b), utilizando uma bomba ou linha de vácuo (seção de protocolo 3.2). <ol><li> Mite Infestação usando uma escova NOTA: infestação do ácaro aranhacom uma escova é utilizado para a aplicação de até 30 ácaros para cada planta. <ol><li> Use uma escova de cabelo redonda arte suave de tamanho 00 ou mais fino. </li><li> Molhe a escova com água da torneira RT. </li><li> Gentilmente pegar ácaros da peneira usando a ponta do pincel e transferi-los para a planta. </li></ol></li><li> Infestação do ácaro usando uma bomba NOTA: infestação de plantas com ácaros coletados por uma linha de bomba / vácuo é utilizada quando mais de 30 ácaros são aplicadas. Para este método, uma bomba de vácuo para componentes microelectrónicos captador ou uma linha de vácuo pode ser usado. É importante manter o constante do fluxo de ar e uma resistência suficiente (2-4 psi). <ol><li> Anexar uma ponta de pipeta de 1 ml para o tubo que liga a linha da bomba de vácuo ou usando um corte de 1,5 ml tubo de centrífuga, na parte inferior, como um adaptador entre o tubo de bomba / vácuo e a ponta. </li><li> Coloque um pedaço de toalha de papel entre a ponta da pipeta e o adaptador (1,5 ml tubo de centrifugação). Nota: O objetivo deste é a ácaros armadilha dentro tele ponteira durante o processo de aspiração e também para reduzir o fluxo de ar (Figura 1C). </li><li> Colete ácaros diretamente da peneira usando a ponta da pipeta. </li><li> Alternativamente, recolher os ácaros, um por um a partir de folhas infestadas, usando um estereoscópio. </li><li> Quando foi recolhido o número necessário de ácaros, remover a ponta da pipeta a partir do tubo, fazendo com que o pedaço de toalha de papel na parte de trás da ponta da pipeta não é perturbada. </li><li> Colete ácaros tocando a ponta da pipeta e aglomeração dos ácaros juntos. Em seguida, coloque-os na folha; dentro de segundos, os ácaros vai começar a dispersar-se na folha. </li></ol></li></ol> 4. Gravação e avaliação dos danos Planta <ol><li> Danos às plantas de gravação NOTA: Para A. thaliana, planta dano é avaliada após 4 dias de alimentação do ácaro. O dano é registrada como a superfície total das manchas cloróticas. Para a medição de danos, toda a roseta é cortado e digitalizada.Parâmetros de verificação descritos são para um scanner Epson V30, mas vai agir como um bom ponto de partida para qualquer scanner de mesa similar. Mantenha parâmetros de digitalização constantes para todos os experimentos, permitindo a comparação entre experimentos corridas individuais. <ol><li> Cubra scanner com a folha de transparência para evitar a contaminação da superfície do scanner com material vegetal. </li><li> Corte uma roseta inteira e lugar na mesa do scanner para que lado adaxial (superior) de folhas estão enfrentando a fonte de luz do scanner e elemento de captura. Alternativamente, se rosetas são muito densos para capturar folhas individuais, sem sobreposição, dissecar a roseta em folhas individuais ou grupos de folhas que não se sobrepõem com uma tesoura fina antes de colocar na mesa do scanner. Vários rosetas podem ser digitalizados simultaneamente. </li><li> Cubra rosetas ou folhas com um pedaço de papel branco para evitar a adesão e contaminação da tampa do scanner. </li><li> Feche a tampa do scanner e executar uma varredura com os seguintes parâmetros: Resolução: 1,200 dpi; Modo de cor: Adobe RGB; Brilho: 25; Tipo de Arquivo: JPEG máxima qualidade. </li><li> Salve arquivos de imagem para análise de danos subseqüentes. </li></ol></li><li> Danos Planta Quantificação NOTA: A área de dano é calculado manualmente usando o Photoshop. Devido às grandes diferenças em forma de folha e a intensidade da cor dos sintomas, como resultado da alimentação de ácaro, métodos automáticos eram fiáveis. Assim, um método que serve para avaliar os danos planta: <ol><li> Abra a imagem da planta com Photoshop. </li><li> Crie uma nova camada, em seguida, sobrepor imagem digitalizada com uma grade de 0,25 mm x 0,25 mm divisões (Ver ou Display - Show - Grade, atalho de teclado Ctrl + &#39;). </li><li> Em uma camada sobreposta, marque área foliar danificada usando um ponto (use a ferramenta &quot;Pencil&quot;, atalho de teclado B). Usar um único ponto para cada quadrado da grelha abaixo dos quais não é o dano que cobre mais do que uma metade da unidade de grelha. O tamanho do ponto é definido em pixels (isto é, </em&gt; 52 pixels por ponto). </li><li> Quando todos os quadrados da grade que mostram danos às plantas que cubram pelo menos metade da unidade grade são marcados com um ponto, use a ferramenta histograma (Janela - Histograma) para determinar o número total de pixels na camada. A ferramenta permite que um histograma para medir o número de pixels. Uma vez que cada ponto é representado por um número constante e conhecida de pixels, a ferramenta histograma vai medir o número total de pixels, que representa o número total de pontos, e, por extensão, o número total de quadrados marcados. </li><li> Calcular o número de &quot;pontos&quot; marcadas por meio da seguinte fórmula: Número de pontos = número total de pixels / número de pixels por ponto. </li><li> Calcula-se a área total de lesões através da multiplicação do número de pontos marcados sobre a imagem da área de um quadrado da grelha, tal como um ponto corresponde a um quadrado da grelha. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJeppson%2C+LR+%22Mites+injurious+to+economic+plants%22">Mites injurious to economic plants</a>. , University of California Press. (1975).</li>
<li>Migeon, A., Dorkeld, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spider+Mites+Web%3A+a+comprehensive+database+for+the+Tetranychidae%5BTitle%5D)+AND+%22http%3A%2F%2Fwww.montpellier.inra.fr%2FCBGP%2Fspmweb%22%5BJournal%5D)">Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae.</a> http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).</li>
<li>Croft, B. A., Vandebaan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+and+Genetic-Factors+Influencing+Evolution+of+Pesticide+Resistance+in+Tetranychid+and+Phytoseiid+Mites%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Appl+Acarol%22%5BJournal%5D)">Ecological and Genetic-Factors Influencing Evolution of Pesticide Resistance in Tetranychid and Phytoseiid Mites.</a> Exp Appl Acarol. 4, 277-300 (1988).</li>
<li>Van Leeuwen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+heteroplasmy+and+the+evolution+of+insecticide+resistance%3A+Non-Mendelian+inheritance+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial heteroplasmy and the evolution of insecticide resistance: Non-Mendelian inheritance in action.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 5980-5985 (2008).</li>
<li>Van Leeuwen, T., Vontas, J., Tsagkarakou, A., Dermauw, W., Tirry, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acaricide+resistance+mechanisms+in+the+two-spotted+spider+mite+Tetranychus+urticae+and+other+important+Acari%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">Acaricide resistance mechanisms in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and other important Acari: A review.</a> Insect Biochem Molec. 40, 563-572 (2010).</li>
<li>Dermauw, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cys-loop+ligand-gated+ion+channel+gene+family+of+Tetranychus+urticae%3A+Implications+for+acaricide+toxicology+and+a+novel+mutation+associated+with+abamectin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">The cys-loop ligand-gated ion channel gene family of Tetranychus urticae: Implications for acaricide toxicology and a novel mutation associated with abamectin resistance.</a> Insect Biochem Molec. 42, 455-465 (2012).</li>
<li>Van Leeuwen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population+bulk+segregant+mapping+uncovers+resistance+mutations+and+the+mode+of+action+of+a+chitin+synthesis+inhibitor+in+arthropods%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Population bulk segregant mapping uncovers resistance mutations and the mode of action of a chitin synthesis inhibitor in arthropods.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109, 4407-4412 (2012).</li>
<li>Dearden, P. K., Donly, C., Grbic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+pair-rule+gene+homologues+in+a+chelicerate%3A+early+patterning+of+the+two-spotted+spider+mite+Tetranychus+urticae%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Expression of pair-rule gene homologues in a chelicerate: early patterning of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae.</a> Development. 129, 5461-5472 (2002).</li>
<li>Khila, A., Grbic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+silencing+in+the+spider+mite+Tetranychus+urticae%3A+dsRNA+and+siRNA+parental+silencing+of+the+Distal-less+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development+genes+and+evolution%22%5BJournal%5D)">Gene silencing in the spider mite Tetranychus urticae: dsRNA and siRNA parental silencing of the Distal-less gene.</a> Development genes and evolution. 217, 241-251 (2007).</li>
<li>Grbic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mity+model%3A+Tetranychus+urticae%2C+a+candidate+for+chelicerate+model+organism%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays+%3A+news+and+reviews+in+molecular%2C+cellular+and+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Mity model: Tetranychus urticae, a candidate for chelicerate model organism.</a> BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 29, 489-496 (2007).</li>
<li>Grbic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+of+Tetranychus+urticae+reveals+herbivorous+pest+adaptations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The genome of Tetranychus urticae reveals herbivorous pest adaptations.</a> Nature. 479, 487-492 (2011).</li>
<li>Kliebenstein, D., Pedersen, D., Barker, B., Mitchell-Olds, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+quantitative+trait+loci+controlling+glucosinolates%2C+myrosinase+and+insect+resistance+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of quantitative trait loci controlling glucosinolates, myrosinase and insect resistance in Arabidopsis thaliana.</a> Genetics. 161, 325-332 (2002).</li>
<li>Abe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+jasmonate+in+response+and+tolerance+of+Arabidopsis+to+thrip+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+%26+cell+physiology%22%5BJournal%5D)">Function of jasmonate in response and tolerance of Arabidopsis to thrip feeding.</a> Plant & cell physiology. 49, 68-80 (2008).</li>
<li>Whiteman, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mining+the+plant-herbivore+interface+with+a+leafmining+Drosophila+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+ecology%22%5BJournal%5D)">Mining the plant-herbivore interface with a leafmining Drosophila of Arabidopsis.</a> Molecular ecology. 20, 995-1014 (2011).</li>
<li>Goodspeed, D., Chehab, E. W., Min-Venditti, A., Braam, J., Covington, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+synchronizes+jasmonate-mediated+defense+with+insect+circadian+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis synchronizes jasmonate-mediated defense with insect circadian behavior.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 4674-4677 (2012).</li>
<li>Kim, J. H., Lee, B. W., Schroeder, F. C., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+indole+glucosinolate+breakdown+products+with+antifeedant+effects+on+Myzus+persicae+%28green+peach+aphid%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+journal+%3A+for+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Identification of indole glucosinolate breakdown products with antifeedant effects on Myzus persicae (green peach aphid).</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 54, 1015-1026 (2008).</li>
<li>Adio, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+and+defensive+function+of+Ndelta-acetylornithine%2C+a+jasmonate-induced+Arabidopsis+metabolite%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis and defensive function of Ndelta-acetylornithine, a jasmonate-induced Arabidopsis metabolite.</a> Plant Cell. 23, 3303-3318 (2011).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tomato+homolog+of+CORONATINE-INSENSITIVE1+is+required+for+the+maternal+control+of+seed+maturation%2C+jasmonate-signaled+defense+responses%2C+and+glandular+trichome+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The tomato homolog of CORONATINE-INSENSITIVE1 is required for the maternal control of seed maturation, jasmonate-signaled defense responses, and glandular trichome development.</a> Plant Cell. 16, 126-143 (2004).</li>
<li>Kant, M. R., Ament, K., Sabelis, M. W., Haring, M. A., Schuurink, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+timing+of+spider+mite-induced+direct+and+indirect+defenses+in+tomato+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential timing of spider mite-induced direct and indirect defenses in tomato plants.</a> Plant Physiol. 135, 483-495 (2004).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Este vídeo demonstra protocolos utilizados para isolar e infestam plantas com grandes números de ácaros fêmeas adultas. Embora nós apresentamos esse protocolo usando A. thaliana, ele pode ser usado para qualquer sistema de interação planta-ácaro aranha e atualmente está sendo aplicado com sucesso também em plantas de tomateiro e videira (Vitis vinifera). Os rendimentos de protocolo de resultados reprodutíveis, indicando que os ácaros coletados são do estado fisiológico comparável (Figura 3).</s...

Interação planta-praga é um tema de grande importância científica e econômica. Foi estudado historicamente usando as duas plantas de cultivo (como o tomate) e da planta modelo, A. thaliana. Em ambos os casos, a suscetibilidade da planta de herbívoros pode ser medido diretamente por meio de avaliação de fenótipo da planta após o ataque herbívoro ou indiretamente, por meio da avaliação do desempenho de pragas. Medidas diretas de suscetibilidade da planta foram utilizados anteriormente para um número de espécies de insetos-praga usando uma variedade de métodos. Por exemplo, pragas de larvas de lepidópteros é medido como uma estimativa da porção de tecido da planta consumida por qualquer Plutella xylostella (traça de Diamondback) ou Trichoplusia ni (lagarta da couve), a olho nu, com a ajuda de uma grelha 12. Além disso, existem métodos que utilizam a imagem digital de dano foliar com posterior análise de imagem quantitativa. Tais métodos foram utilizados emestudos de A. interação thaliana com Frankliniella occidentalis (tripes flor ocidentais) 13, Scaptomyza flava (drosófila folha de mineração) 14, e T. ni 15. As medidas indiretas de suscetibilidade da planta são amplamente utilizados em estudos de interação planta-praga. Por exemplo, a susceptibilidade de A. thaliana de pêssego pulgão Myzus persicae herbivoria normalmente é avaliada através da análise de fecundidade pragas e descrição da morfologia de uma planta após interação 16,17. Outro indicador indirecto típico de A. thaliana suscetibilidade à praga é uma avaliação de peso seco ou molhado do herbívoro. Este parâmetro é utilizado para caracterizar a herbivoria de lepidoterans, como Pieris rapae (pequeno branco), P. xylostella, ou T. ni em seu larval ou de pupa encena 15,17. Ácaros são-conteúdo da célula feEders. Induzida por danos Mite é reconhecida como uma coleção de manchas cloróticas que variam em cor do branco ao verde pálido. A susceptibilidade de uma planta hospedeira para ácaro herbivoria foi previamente avaliada quer indirectamente através da análise de desempenho ácaro dias pós-infestação 18,19, ou diretamente usando morfologia de plantas semanas pós-infestação de 18 ou usando uma imagem digital de folhas expostas aos ácaros por dias com posterior análise de imagem automatizado 19. Estes métodos foram sendo desenvolvidos e utilizados para estudos de interações entre plantas de tomate e T. urticae, e normalmente usado um pequeno número de ácaros (5-15 por tratamento) que foram coletados a partir da população de ácaros mista e foram colocados na superfície da folha, utilizando uma escova de cerdas macias. No entanto, estes métodos não são adequados para estudos em que um maior número de ácaros precisam de ser aplicados. Além disso, durante o processamento direto de imagens de folhas de software de análise de imagemcomo o Adobe Photoshop (San Jose, CA) ou ImageJ 20 pode ser utilizado para a análise de danos tomate, estes protocolos de modificação precisa, a fim de ser aplicado a folhas, que têm uma maior reflectividade da superfície ou são levemente coloridas e possuem tricomas altamente visíveis ( por exemplo, A. thaliana) que interferem com a seleção automática de manchas cloróticas que marcam danos às plantas. Além disso, a fase de desenvolvimento de ácaros que podem ser facilmente utilizados com os métodos anteriores, é limitada às fêmeas adultas mais prevalentes e facilmente identificáveis ​​e opõe-se a utilização de outras fases de desenvolvimento. O primeiro passo crítico para análise de alto rendimento de interação planta-ácaro aranha é estabelecer, protocolos simples e robustas reprodutíveis para desafiar plantas com ácaros e confiável avaliar os resultados de interação. Neste vídeo, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande númemero de ácaros fêmeas adultas, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado permite a recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente. Além disso, estes protocolos podem ser aplicados a qualquer planta hospedeira ácaro, mas são especificamente demonstrado no caso de A. thaliana.

<table><tbody><tr><td>Material vegetal:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Feijão vermelho da Califórnia</td><td>Stokes, Thorold, ON, Canadá</td><td></td><td>com 2 semanas de idade, bem infestado de ácaros 2 ou 3 dias antes do uso. Outras cultivares de Phaseolus vulgaris podem ser utilizadas.</td></tr><tr><td>Produtos químicos:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>1% solução de estoque preparada para simplificar a alíquota</td></tr><tr><td>Água</td><td></td><td></td><td>da torneira À temperatura ambiente, o calor e o frio afetam a taxa de sobrevivência e o desempenho dos ácaros</td></tr><tr><td>Outros materiais e equipamentos:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Bandeja</td><td></td><td></td><td></td>de plástico</tr><tr><td>Conjunto de tesouras</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Copos</td><td></td><td></td><td></td>de 2 L</tr><tr><td>Toalhas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de papel Conjuntos de peneiras</td><td>Fabricado internamente</td><td></td><td>Estão disponíveis instruções detalhadas</td></tr><tr><td>Escova</td><td></td><td></td><td></td>fina</tr><tr><td>Pipetas</td> Pontas <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> de<td>pipeta</td><td>0,2 e 1 ml</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de 1,5 ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bomba</td><td></td><td></td> de ar <td>Bomba tipo aquário com fluxo de ar invertido. A linha de vácuo pode ser usada. A queda de pressão necessária é de aprox. 2-4 psi</td></tr><tr><td>Scanner Estereoscópio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Epson</td><td>V30</td><td>Qualquer scanner de mesa que permita o grau necessário de controle sobre a qualidade da digitalização. Usamos o Epson V30 para nossos experimentos.</td></tr><tr><td>Computador</td><td></td><td></td><td>Windows ou OS X PC compatível com hardware de scanner e software Adobe Photoshop.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop software</td><td>Adobe Systems Inc., San Jose, CA, EUA</td><td>vários</td><td>Qualquer versão com a ferramenta Histograma incluída.</td></tr></tbody></table>

aplicação de duas avistou Ácaro<em&gt; tetranychus urticae</em&gt; de estudos planta-praga de interação

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

O ácaro-rajado, Tetranychus urticae, é um herbívoro de artrópodes polífagas onipresente que se alimenta de uma notavelmente ampla gama de espécies, com mais de 150 de valor econômico. É uma das principais pragas das culturas de estufa, especialmente em Solanaceae e Cucurbitaceae (por exemplo, tomates, beringelas, pimentos, pepinos, abobrinha) e plantas ornamentais de efeito estufa (por exemplo, rosas, crisântemos, cravos), culturas anuais (como o milho, o algodão, soja e açúcar de beterraba) e em culturas perenes (alfafa, morangos, uvas, frutas cítricas, e ameixas) 1,2. Além do polyphagy extremo que torna uma importante praga agrícola, T. urticae tem uma tendência para desenvolver a resistência a uma vasta gama de insecticidas e acaricidas que são usados ​​para o seu controlo 3-7. T. urticae é um excelente organismo experimental, uma vez que tem um ciclo de vida rápido (7 dias a 27 ° C)e podem ser facilmente mantidas a uma densidade elevada no laboratório. Métodos de Ensaio para a expressão do gene (incluindo a hibridização in situ e a coloração do anticorpo) e para inactivar a expressão dos genes endógenos de ácaros de aranha com RNA de interferência foram desenvolvidos 8-10. Recentemente, toda a seqüência do genoma de T. urticae foi relatado, criando uma oportunidade para desenvolver este herbívoro de pragas como um organismo modelo com recursos equivalentes genômicos que já existem em algumas de suas plantas hospedeiras (Arabidopsis thaliana eo Solanum lycopersicum tomate) 11. Juntos, esses organismos modelo pode fornecer insights sobre bases moleculares das interações planta-praga. Aqui, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande número de ácaros adultos do sexo feminino, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado enables recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente.

Usando 20 a 30 plantas de feijão infestados, pode-se coletar cerca de 2.000 ácaros adulto do sexo feminino usando peneiras. O tempo necessário para infestar 10 plantas com 20 ácaros por planta é de aproximadamente 15 minutos se estiver usando um pincel para transferir ácaros. Combinações de coleta e os métodos de aplicação são mostrados na Figura 2. Este protocolo gera resultados reprodutíveis de danos às plantas, demonstrando que os ácaros coletados são do estado fisiológic...

Protocolos para preparação eficiente de amostras homogêneas de ácaros, infestação de plantas experimentais e avaliação de danos às plantas, como requerido para estudos de interação planta-praga foram desenvolvidos.

Aplicação de duas avistou Ácaro<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; De Estudos Planta-praga de Interação

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

O objetivo geral deste procedimento é coletar ácaros-aranha rapidamente e com confiabilidade em um estágio de desenvolvimento específico. Isso é realizado primeiramente criando ácaros em plantas de feijão. Em seguida, a planta experimental é infestada com ácaros fêmeas usando um pincel ou bomba, dependendo do número de ácaros a ser aplicado em uma única planta.O passo final é a quantificação manual do dano nas plantas utilizando o método da grade em um programa de edição gráfica. Em última análise, a análise estatística é utilizada para demonstrar a suscetibilidade diferencial de linhagens ou ecótipos vegetais ao ataque do ácaro-aranha. A vantagem deste método em relação às técnicas existentes é que ele fornece um procedimento eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande número de ácaros fêmeas adultos, sua aplicação em uma planta hospedeira experimental e a avaliação do dano causado à planta pela alimentação dos ácaros.O protocolo apresentado permite a coleta rápida e eficiente de centenas de indivíduos em qualquer estágio de desenvolvimento, que podem ser utilizados em aplicações experimentais subsequentes. Para iniciar, cultive plantas de feijão vermelho da Califórnia a p

application-two-spotted-spider-mite-tetranychus-urticae-for-plant

Research

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Este manuscrito demonstra e discute técnicas usadas para pesquisa susceptibilidade de pesticidas e detectar a resistência ao contato e pesticidas sistêmicos em pragas artrópodes.

Bioensaios de Resistência a Inseticidas Monitoramento

Este vídeo explica os mecanismos de resistência da planta hospedeira à herbivoria e demonstra um teste sem chance de escolha que as estimativas da contribuição relativa de antibiose e tolerância a cigarrinha resistência...

Mecanismos Herbívoro caracterizando Resistance: Spittlebugs em Brachiaria Spp. como Exemplo

Este manuscrito descreve um sensor multi-espectral óptica que eficazmente detectada dano ao algodão estação cedo artificialmente infestados com diferentes densidades das populações de ácaros de aranha com duas manchas.

Avaliação de Sensoriamento Remoto do Dois-manchada danos Aranha Mite em Cotton Greenhouse

Aqui, relatamos os diferentes estágios envolvidos no desenvolvimento baseado no conhecimento de um efetivo microssecticida, incluindo o isolamento, identificação, triagem e seleção do fungo entomopatogênico "melhor ajustado", Metarhizium anisopliae , para controle de pragas de insetos na agricultura .

Desenvolvimento de<em&gt; Metarhizium anisopliae</em&gt; Como um Mycoinsecticide: do isolamento ao desempenho do campo

Tabelas de vida permitem a quantificação das fontes e as taxas de mortalidade nas populações de insetos e contribuam para a compreensão, previsão e manipulação dinâmica populacional em agroecossistemas. São apresentados métodos para realização e análise de tabelas de vida baseada em coorte no campo para um inseto com estágios de vida imatura séssil.

Metodologia para desenvolvimento de tabelas de vida para insetos sésseis no campo utilizando a mosca branca, Bemisia tabaci, em algodão como um modelo de sistema

Apresentado aqui é um protocolo para determinar o número de tripes e predadores de insetos piratas minutos em culturas sobre várias datas em experimentos de campo. Também ilustrado é como determinar a eficácia das táticas de gestão contra tripes e avaliar os benefícios da predação por bugs piratas minutos.

Amostragem para estimar espécies de Frankliniella flor tripes e Orius espécies predadores em experimentos de campo

A micro-TC é uma ferramenta não destrutiva capaz de analisar as estruturas das plantas em três dimensões. O presente protocolo descreve o preparo da amostra para alavancar micro-CT para analisar a estrutura e função de plantas parasitas. Diferentes espécies são utilizadas para destacar as vantagens deste método quando associado a preparações específicas.

Aproveitando a microtomografia computadorizada para analisar interações parasitas planta-hospedeiro

Este protocolo apresenta um sistema otimizado de bioensaio foliar destacado para avaliar a eficácia de fungos entomopatogênicos (FPE) contra o pulgão mostarda (Lipaphis erysimi (Kalt.)), um inseto partenogenético. O método descreve o processo de coleta de dados durante os experimentos com placas de Petri, permitindo que os pesquisadores meçam consistentemente a virulência do PFE contra pulgões da mostarda e outros insetos partenogenéticos.

Avaliação do Efeito Afidicida de Fungos Entomopatogênicos Contra Insetos Partenogenéticos, Pulgão Mostarda, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Aqui, apresentamos um protocolo para extração de veneno de Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial criado com filme de polietileno e solução de aminoácidos.

Extração de veneno da vespa parasitoide Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial

Um protocolo de bioensaio de folhas destacadas foi estabelecido para tripes de pimenta de criação massal usando um método de folhas destacadas modificado em recipientes de vidro contendo ágar, garantindo alta sobrevivência e desenvolvimento sincronizado. Este sistema permite a triagem eficiente da virulência de fungos entomopatogênicos contra larvas de 2ºínstar e fornece um suprimento confiável de tripes para avaliações de laboratório, estufa e campo.

Estabelecimento de um sistema de criação de tripes de pimenta (Scirtothrips dorsalis Hood) para triagem de virulência de fungos entomopatogênicos

Aprenda a coletar e aplicar ácaros Tetranychus urticae em plantas experimentais usando pincel ou bomba. Este protocolo padronizado permite quantificar danos foliares pelo método da grade, facilitando estudos de interação planta-praga com análise estatística.

Aplicação de duas avistou Ácaro

Explorar mais vídeos