Name: Aplicação de duas avistou Ácaro Tetranychus urticae De Estudos Planta-praga de Interação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprenda a coletar e aplicar ácaros Tetranychus urticae em plantas experimentais usando pincel ou bomba. Este protocolo padronizado permite quantificar danos foliares pelo método da grade, facilitando estudos de interação planta-praga com análise estatística.

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Este projeto foi financiado pelo Governo do Canadá através do Genome Canada e do Ontario Genomics Institute (OGI-046), e Ontario Research Fund–Global Leadership in Genomics and Life Sciences GL2-01-035 (para M.G. e V.G.). T.V.L. é pós-doutorando do Fundo para Pesquisa Científica Flandres (FWO).

1. Manutenção da Mite População Aranha NOTA: Ácaros são criados na Califórnia feijão vermelho (Phaseolus vulgaris). <ol><li> Cultivar plantas a partir de sementes de feijão por 2-3 semanas antes da infestação. </li><li> Intermix essas plantas com plantas infestadas; ácaros adultos vão colonizar rapidamente o material vegetal fresco. </li><li> Remover velhas plantas de feijão infestados cada 7-10 dias, substituindo-os com plantas frescas. </li></ol> 2. Coleta Adulto Feminino Ácaros <ol><li> Mite coleção usando o método de lavagem <ol><li> Para a coleta de ácaros, coloque uma planta de feijão fresco em contato com plantas infestadas de 1 a 2 dias antes do experimento. </li><li> Utilize de 20 a 30 plantas de feijão frescos para coletar 1.000 a 2.000 ácaros adulto do sexo feminino. </li><li> Prepare uma solução de Tween 20 a 0,001%, utilizando a água da torneira à temperatura ambiente. </li><li> Lavar feijoeiro infestadas na solução de Tween 20, utilizando 2-3 plantas de cada vez. </li><li&gt; Cada planta é lavado 2-3x para coletar todos os ácaros das folhas. </li><li> Complete a etapa 2.1.4 dentro de 10 min para evitar a mortalidade dos ácaros. </li></ol></li><li> O isolamento da fêmea adulta ácaros por filtração da suspensão Mite através de peneiras de malha Tamanho Definido <ol><li> Preparar os seguintes peneiras de tamanhos de malha: 500 um (para remover os detritos) e 300 um (para recolher os ácaros adultos fêmeas) (Figura 1A). </li><li> Filtrar a suspensão através do crivo de 500 mM. </li><li> ReFilter a suspensão através da peneira de 300 mM. Ácaros fêmeas adultas serão retidos. </li><li> Mergulhe uma peneira 300 mm com ácaros fêmeas adultas em água corrente limpa para remover o Tween 20. </li><li> Espalhe ácaros em uma única camada na parte inferior da peneira. </li><li> Use papel toalha para remover o excesso de água da rede e dos lados da peneira. NOTA: Isso é feito porque os ácaros precisam secar rapidamente, a fim de se recuperar. </li><li> Preparar um conjunto tal como mostrado na Figura 1B; isso permitirá que os ácaros se mover livremente, mas vai impedi-los de escapar. </li><li> Coloque a peneira com ácaros no topo do crivo que é usado como um suporte. </li><li> Cerque-peneira de fundo com água para evitar os ácaros da dispersão. NOTA: Os ácaros vai começar a recuperar depois de cerca de 5 min. Após aproximadamente 30 minutos, o número de ácaros que se deslocam é suficiente para iniciar a recolha (Figura 1D). Ácaros devem ser recolhidos no prazo de 1 hora, como eles produzem seda que irá interferir com a coleção. </li></ol></li></ol> 3. Fábrica infestação com ácaros NOTA: Uma vez que os ácaros fêmeas adultas se recuperaram, eles podem ser usados ​​para a infestação de plantas. Há dois métodos utilizados para infestar as plantas experimentais com ácaros fêmeas adultas: a) usando um pincel fino (seção de protocolo 3.1) e b), utilizando uma bomba ou linha de vácuo (seção de protocolo 3.2). <ol><li> Mite Infestação usando uma escova NOTA: infestação do ácaro aranhacom uma escova é utilizado para a aplicação de até 30 ácaros para cada planta. <ol><li> Use uma escova de cabelo redonda arte suave de tamanho 00 ou mais fino. </li><li> Molhe a escova com água da torneira RT. </li><li> Gentilmente pegar ácaros da peneira usando a ponta do pincel e transferi-los para a planta. </li></ol></li><li> Infestação do ácaro usando uma bomba NOTA: infestação de plantas com ácaros coletados por uma linha de bomba / vácuo é utilizada quando mais de 30 ácaros são aplicadas. Para este método, uma bomba de vácuo para componentes microelectrónicos captador ou uma linha de vácuo pode ser usado. É importante manter o constante do fluxo de ar e uma resistência suficiente (2-4 psi). <ol><li> Anexar uma ponta de pipeta de 1 ml para o tubo que liga a linha da bomba de vácuo ou usando um corte de 1,5 ml tubo de centrífuga, na parte inferior, como um adaptador entre o tubo de bomba / vácuo e a ponta. </li><li> Coloque um pedaço de toalha de papel entre a ponta da pipeta e o adaptador (1,5 ml tubo de centrifugação). Nota: O objetivo deste é a ácaros armadilha dentro tele ponteira durante o processo de aspiração e também para reduzir o fluxo de ar (Figura 1C). </li><li> Colete ácaros diretamente da peneira usando a ponta da pipeta. </li><li> Alternativamente, recolher os ácaros, um por um a partir de folhas infestadas, usando um estereoscópio. </li><li> Quando foi recolhido o número necessário de ácaros, remover a ponta da pipeta a partir do tubo, fazendo com que o pedaço de toalha de papel na parte de trás da ponta da pipeta não é perturbada. </li><li> Colete ácaros tocando a ponta da pipeta e aglomeração dos ácaros juntos. Em seguida, coloque-os na folha; dentro de segundos, os ácaros vai começar a dispersar-se na folha. </li></ol></li></ol> 4. Gravação e avaliação dos danos Planta <ol><li> Danos às plantas de gravação NOTA: Para A. thaliana, planta dano é avaliada após 4 dias de alimentação do ácaro. O dano é registrada como a superfície total das manchas cloróticas. Para a medição de danos, toda a roseta é cortado e digitalizada.Parâmetros de verificação descritos são para um scanner Epson V30, mas vai agir como um bom ponto de partida para qualquer scanner de mesa similar. Mantenha parâmetros de digitalização constantes para todos os experimentos, permitindo a comparação entre experimentos corridas individuais. <ol><li> Cubra scanner com a folha de transparência para evitar a contaminação da superfície do scanner com material vegetal. </li><li> Corte uma roseta inteira e lugar na mesa do scanner para que lado adaxial (superior) de folhas estão enfrentando a fonte de luz do scanner e elemento de captura. Alternativamente, se rosetas são muito densos para capturar folhas individuais, sem sobreposição, dissecar a roseta em folhas individuais ou grupos de folhas que não se sobrepõem com uma tesoura fina antes de colocar na mesa do scanner. Vários rosetas podem ser digitalizados simultaneamente. </li><li> Cubra rosetas ou folhas com um pedaço de papel branco para evitar a adesão e contaminação da tampa do scanner. </li><li> Feche a tampa do scanner e executar uma varredura com os seguintes parâmetros: Resolução: 1,200 dpi; Modo de cor: Adobe RGB; Brilho: 25; Tipo de Arquivo: JPEG máxima qualidade. </li><li> Salve arquivos de imagem para análise de danos subseqüentes. </li></ol></li><li> Danos Planta Quantificação NOTA: A área de dano é calculado manualmente usando o Photoshop. Devido às grandes diferenças em forma de folha e a intensidade da cor dos sintomas, como resultado da alimentação de ácaro, métodos automáticos eram fiáveis. Assim, um método que serve para avaliar os danos planta: <ol><li> Abra a imagem da planta com Photoshop. </li><li> Crie uma nova camada, em seguida, sobrepor imagem digitalizada com uma grade de 0,25 mm x 0,25 mm divisões (Ver ou Display - Show - Grade, atalho de teclado Ctrl + &#39;). </li><li> Em uma camada sobreposta, marque área foliar danificada usando um ponto (use a ferramenta &quot;Pencil&quot;, atalho de teclado B). Usar um único ponto para cada quadrado da grelha abaixo dos quais não é o dano que cobre mais do que uma metade da unidade de grelha. O tamanho do ponto é definido em pixels (isto é, </em&gt; 52 pixels por ponto). </li><li> Quando todos os quadrados da grade que mostram danos às plantas que cubram pelo menos metade da unidade grade são marcados com um ponto, use a ferramenta histograma (Janela - Histograma) para determinar o número total de pixels na camada. A ferramenta permite que um histograma para medir o número de pixels. Uma vez que cada ponto é representado por um número constante e conhecida de pixels, a ferramenta histograma vai medir o número total de pixels, que representa o número total de pontos, e, por extensão, o número total de quadrados marcados. </li><li> Calcular o número de &quot;pontos&quot; marcadas por meio da seguinte fórmula: Número de pontos = número total de pixels / número de pixels por ponto. </li><li> Calcula-se a área total de lesões através da multiplicação do número de pontos marcados sobre a imagem da área de um quadrado da grelha, tal como um ponto corresponde a um quadrado da grelha. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Este vídeo demonstra protocolos utilizados para isolar e infestam plantas com grandes números de ácaros fêmeas adultas. Embora nós apresentamos esse protocolo usando A. thaliana, ele pode ser usado para qualquer sistema de interação planta-ácaro aranha e atualmente está sendo aplicado com sucesso também em plantas de tomateiro e videira (Vitis vinifera). Os rendimentos de protocolo de resultados reprodutíveis, indicando que os ácaros coletados são do estado fisiológico comparável (Figura 3).</s...

Interação planta-praga é um tema de grande importância científica e econômica. Foi estudado historicamente usando as duas plantas de cultivo (como o tomate) e da planta modelo, A. thaliana. Em ambos os casos, a suscetibilidade da planta de herbívoros pode ser medido diretamente por meio de avaliação de fenótipo da planta após o ataque herbívoro ou indiretamente, por meio da avaliação do desempenho de pragas. Medidas diretas de suscetibilidade da planta foram utilizados anteriormente para um número de espécies de insetos-praga usando uma variedade de métodos. Por exemplo, pragas de larvas de lepidópteros é medido como uma estimativa da porção de tecido da planta consumida por qualquer Plutella xylostella (traça de Diamondback) ou Trichoplusia ni (lagarta da couve), a olho nu, com a ajuda de uma grelha 12. Além disso, existem métodos que utilizam a imagem digital de dano foliar com posterior análise de imagem quantitativa. Tais métodos foram utilizados emestudos de A. interação thaliana com Frankliniella occidentalis (tripes flor ocidentais) 13, Scaptomyza flava (drosófila folha de mineração) 14, e T. ni 15. As medidas indiretas de suscetibilidade da planta são amplamente utilizados em estudos de interação planta-praga. Por exemplo, a susceptibilidade de A. thaliana de pêssego pulgão Myzus persicae herbivoria normalmente é avaliada através da análise de fecundidade pragas e descrição da morfologia de uma planta após interação 16,17. Outro indicador indirecto típico de A. thaliana suscetibilidade à praga é uma avaliação de peso seco ou molhado do herbívoro. Este parâmetro é utilizado para caracterizar a herbivoria de lepidoterans, como Pieris rapae (pequeno branco), P. xylostella, ou T. ni em seu larval ou de pupa encena 15,17. Ácaros são-conteúdo da célula feEders. Induzida por danos Mite é reconhecida como uma coleção de manchas cloróticas que variam em cor do branco ao verde pálido. A susceptibilidade de uma planta hospedeira para ácaro herbivoria foi previamente avaliada quer indirectamente através da análise de desempenho ácaro dias pós-infestação 18,19, ou diretamente usando morfologia de plantas semanas pós-infestação de 18 ou usando uma imagem digital de folhas expostas aos ácaros por dias com posterior análise de imagem automatizado 19. Estes métodos foram sendo desenvolvidos e utilizados para estudos de interações entre plantas de tomate e T. urticae, e normalmente usado um pequeno número de ácaros (5-15 por tratamento) que foram coletados a partir da população de ácaros mista e foram colocados na superfície da folha, utilizando uma escova de cerdas macias. No entanto, estes métodos não são adequados para estudos em que um maior número de ácaros precisam de ser aplicados. Além disso, durante o processamento direto de imagens de folhas de software de análise de imagemcomo o Adobe Photoshop (San Jose, CA) ou ImageJ 20 pode ser utilizado para a análise de danos tomate, estes protocolos de modificação precisa, a fim de ser aplicado a folhas, que têm uma maior reflectividade da superfície ou são levemente coloridas e possuem tricomas altamente visíveis ( por exemplo, A. thaliana) que interferem com a seleção automática de manchas cloróticas que marcam danos às plantas. Além disso, a fase de desenvolvimento de ácaros que podem ser facilmente utilizados com os métodos anteriores, é limitada às fêmeas adultas mais prevalentes e facilmente identificáveis ​​e opõe-se a utilização de outras fases de desenvolvimento. O primeiro passo crítico para análise de alto rendimento de interação planta-ácaro aranha é estabelecer, protocolos simples e robustas reprodutíveis para desafiar plantas com ácaros e confiável avaliar os resultados de interação. Neste vídeo, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande númemero de ácaros fêmeas adultas, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado permite a recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente. Além disso, estes protocolos podem ser aplicados a qualquer planta hospedeira ácaro, mas são especificamente demonstrado no caso de A. thaliana.

<table><tbody><tr><td>Material vegetal:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Feijão vermelho da Califórnia</td><td>Stokes, Thorold, ON, Canadá</td><td></td><td>com 2 semanas de idade, bem infestado de ácaros 2 ou 3 dias antes do uso. Outras cultivares de Phaseolus vulgaris podem ser utilizadas.</td></tr><tr><td>Produtos químicos:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>1% solução de estoque preparada para simplificar a alíquota</td></tr><tr><td>Água</td><td></td><td></td><td>da torneira À temperatura ambiente, o calor e o frio afetam a taxa de sobrevivência e o desempenho dos ácaros</td></tr><tr><td>Outros materiais e equipamentos:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Bandeja</td><td></td><td></td><td></td>de plástico</tr><tr><td>Conjunto de tesouras</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Copos</td><td></td><td></td><td></td>de 2 L</tr><tr><td>Toalhas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de papel Conjuntos de peneiras</td><td>Fabricado internamente</td><td></td><td>Estão disponíveis instruções detalhadas</td></tr><tr><td>Escova</td><td></td><td></td><td></td>fina</tr><tr><td>Pipetas</td> Pontas <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> de<td>pipeta</td><td>0,2 e 1 ml</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de 1,5 ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bomba</td><td></td><td></td> de ar <td>Bomba tipo aquário com fluxo de ar invertido. A linha de vácuo pode ser usada. A queda de pressão necessária é de aprox. 2-4 psi</td></tr><tr><td>Scanner Estereoscópio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Epson</td><td>V30</td><td>Qualquer scanner de mesa que permita o grau necessário de controle sobre a qualidade da digitalização. Usamos o Epson V30 para nossos experimentos.</td></tr><tr><td>Computador</td><td></td><td></td><td>Windows ou OS X PC compatível com hardware de scanner e software Adobe Photoshop.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop software</td><td>Adobe Systems Inc., San Jose, CA, EUA</td><td>vários</td><td>Qualquer versão com a ferramenta Histograma incluída.</td></tr></tbody></table>

aplicação de duas avistou Ácaro<em&gt; tetranychus urticae</em&gt; de estudos planta-praga de interação

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

O ácaro-rajado, Tetranychus urticae, é um herbívoro de artrópodes polífagas onipresente que se alimenta de uma notavelmente ampla gama de espécies, com mais de 150 de valor econômico. É uma das principais pragas das culturas de estufa, especialmente em Solanaceae e Cucurbitaceae (por exemplo, tomates, beringelas, pimentos, pepinos, abobrinha) e plantas ornamentais de efeito estufa (por exemplo, rosas, crisântemos, cravos), culturas anuais (como o milho, o algodão, soja e açúcar de beterraba) e em culturas perenes (alfafa, morangos, uvas, frutas cítricas, e ameixas) 1,2. Além do polyphagy extremo que torna uma importante praga agrícola, T. urticae tem uma tendência para desenvolver a resistência a uma vasta gama de insecticidas e acaricidas que são usados ​​para o seu controlo 3-7. T. urticae é um excelente organismo experimental, uma vez que tem um ciclo de vida rápido (7 dias a 27 ° C)e podem ser facilmente mantidas a uma densidade elevada no laboratório. Métodos de Ensaio para a expressão do gene (incluindo a hibridização in situ e a coloração do anticorpo) e para inactivar a expressão dos genes endógenos de ácaros de aranha com RNA de interferência foram desenvolvidos 8-10. Recentemente, toda a seqüência do genoma de T. urticae foi relatado, criando uma oportunidade para desenvolver este herbívoro de pragas como um organismo modelo com recursos equivalentes genômicos que já existem em algumas de suas plantas hospedeiras (Arabidopsis thaliana eo Solanum lycopersicum tomate) 11. Juntos, esses organismos modelo pode fornecer insights sobre bases moleculares das interações planta-praga. Aqui, um método eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande número de ácaros adultos do sexo feminino, a sua aplicação em uma planta hospedeira experimental ea avaliação dos danos planta devido à alimentação ácaro são descritos. O protocolo apresentado enables recolha rápida e eficiente de centenas de pessoas, em qualquer estádio de desenvolvimento (ovos, larvas, ninfas, machos adultos e fêmeas) que pode ser utilizado para aplicação experimental subsequente.

Usando 20 a 30 plantas de feijão infestados, pode-se coletar cerca de 2.000 ácaros adulto do sexo feminino usando peneiras. O tempo necessário para infestar 10 plantas com 20 ácaros por planta é de aproximadamente 15 minutos se estiver usando um pincel para transferir ácaros. Combinações de coleta e os métodos de aplicação são mostrados na Figura 2. Este protocolo gera resultados reprodutíveis de danos às plantas, demonstrando que os ácaros coletados são do estado fisiológic...

Protocolos para preparação eficiente de amostras homogêneas de ácaros, infestação de plantas experimentais e avaliação de danos às plantas, como requerido para estudos de interação planta-praga foram desenvolvidos.

Aplicação de duas avistou Ácaro<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; De Estudos Planta-praga de Interação

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

O objetivo geral deste procedimento é coletar ácaros-aranha rapidamente e com confiabilidade em um estágio de desenvolvimento específico. Isso é realizado primeiramente criando ácaros em plantas de feijão. Em seguida, a planta experimental é infestada com ácaros fêmeas usando um pincel ou bomba, dependendo do número de ácaros a ser aplicado em uma única planta.O passo final é a quantificação manual do dano nas plantas utilizando o método da grade em um programa de edição gráfica. Em última análise, a análise estatística é utilizada para demonstrar a suscetibilidade diferencial de linhagens ou ecótipos vegetais ao ataque do ácaro-aranha. A vantagem deste método em relação às técnicas existentes é que ele fornece um procedimento eficiente para a coleta rápida e fácil de um grande número de ácaros fêmeas adultos, sua aplicação em uma planta hospedeira experimental e a avaliação do dano causado à planta pela alimentação dos ácaros.O protocolo apresentado permite a coleta rápida e eficiente de centenas de indivíduos em qualquer estágio de desenvolvimento, que podem ser utilizados em aplicações experimentais subsequentes. Para iniciar, cultive plantas de feijão vermelho da Califórnia a partir de sementes por duas a três semanas antes da infestação, misturando essas plantas com plantas já infestadas. Ácaros adultos colonizarão rapidamente o material vegetal fresco.Remova as plantas de feijão antigas infestadas a cada sete a dez dias e substitua-as por plantas frescas para coletar ácaros utilizando o método de lavagem. Coloque uma planta de feijão fresca em contato com as plantas infestadas um a dois dias antes do experimento. Utilize 20 a 30 plantas de feijão frescas para coletar de 1.000 a 2.000 fêmeas adultas de ácaros.No dia do experimento, corte o ácaro. Coloque as plantas de feijão infestadas na base, depois lave as plantas de feijão infestadas duas a três plantas por vez em uma solução de tween 20 a 0,001%. Cada planta é lavada duas a três vezes para coletar todos os ácaros das folhas.Trabalhe dentro de uma janela de 10 minutos para evitar a mortalidade dos ácaros. Em seguida, prepare uma peneira de 500 micrômetros para remover detritos e uma peneira de 300 micrômetros para coletar os ácaros fêmeas adultos. Filtre a suspensão através da peneira de 500 micrômetros e, em seguida, reencha a suspensão através da peneira de 300 micrômetros.Ácaros fêmeas adultos são retidos se acumular espuma em excesso na peneira. Com os ácaros, pode-se lavar suavemente sob água corrente em temperatura ambiente. Mergulhe uma peneira de 300 micrômetros com ácaros fêmeas adultas em água da torneira limpa para remover o tween 20 e espalhe os ácaros em uma única camada no fundo da peneira.Use uma toalha de papel para remover o excesso de água da tela e dos lados da peneira, para que os ácaros possam secar rapidamente e se recuperar. Em seguida, coloque uma peneira com ácaros sobre a peneira utilizada como suporte. Rodeie a peneira inferior com água para impedir que os ácaros se dispersem.Isso permitirá que os ácaros se movam livremente, mas impedirá que escapem. A infestação por ácaros-aranha com um pincel é utilizada para aplicação de até 30 ácaros por planta. Utilize um pincel redondo de cerdas macias, tamanho zero, zero ou mais fino.Umedeça o pincel com água da torneira em temperatura ambiente. Com o auxílio da ponta do pincel, colete cuidadosamente os ácaros da peneira e transfira-os para a planta. Quando mais de 30 ácaros são aplicados, a infestação da planta é realizada com ácaros coletados por meio de uma linha de vácuo com bomba.Para este método, acople uma ponteira de pipeta de um mililitro ao tubo que se conecta à bomba ou à linha de vácuo utilizando um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro. Corte a base para usar como adaptador entre o tubo de vácuo da bomba e a ponteira; coloque um pedaço de papel-toalha entre a ponteira da pipeta e o adaptador. O objetivo disso é aprisionar ácaros dentro da ponteira da pipeta durante o processo de aspiração, além de reduzir o fluxo de ar, coletando os ácaros diretamente da peneira utilizando a ponteira da pipeta.Alternativamente, colete ácaros um a um de folhas infestadas utilizando um estereoscópio. Quando o número necessário de ácaros tiver sido coletado, remova a ponteira da pipeta do tubo, certificando-se de que o pedaço de papel-toalha na parte traseira da ponteira permaneça inalterado.Colete os ácaros batendo na ponta da pipeta e agrupando-os. Em seguida, coloque-os sobre a folha. Em segundos, os ácaros começarão a se dispersar pela folha.Para registrar danos na planta, cubra a superfície do scanner com uma folha de transparência para evitar contaminar a superfície do equipamento. Com o material vegetal, corte toda a roseta e coloque-a sobre a superfície do scanner.Assim, os lados adaxiais das folhas ficam voltados para o scanner. Com a fonte de luz e o elemento de captura, várias rosetas podem ser digitalizadas simultaneamente. Alternativamente, se as rosetas forem muito densas, dificultando a captura de folhas individuais sem sobreposição, dissecar a roseta em folhas individuais ou grupos de folhas não sobrepostas com uma tesoura fina antes de colocá-las no scanner.Cubra as rosetas ou folhas com um pedaço de papel branco para evitar aderência e contaminação da tampa do scanner. Feche a tampa do scanner e realize uma digitalização com resolução de 1.200 DPI, brilho ajustado para +25 e tipo de arquivo definido como jpeg de qualidade máxima. Salve os arquivos de imagem para análise subsequente de danos.Para quantificar os danos na planta, abra a imagem da planta no Photoshop. Crie uma nova camada. Em seguida, sobreponha a imagem digitalizada com uma grade de pontos de 25 milímetros por ponto.Divisões de 25 milímetros em uma camada sobreposta. Marque as áreas foliares danificadas usando um ponto com a ferramenta lápis. Use um único ponto para cada quadrado da grade abaixo onde houver dano cobrindo mais da metade da unidade da grade.O tamanho do ponto é definido em pixels. Quando todos os quadrados da grade que mostram dano na planta cobrindo pelo menos metade da unidade da grade forem marcados com um ponto, utilize uma ferramenta de histograma para determinar o número de pixels na camada que representa o número de pontos, e, por extensão, o número total de quadrados marcados.Calcule o número de pontos marcados dividindo o número total de pixels pelo número de pixels por ponto. Calcule a área total de dano multiplicando o número de pontos marcados na imagem pela área de um quadrado da grade, já que um ponto corresponde a um quadrado da grade. Este gráfico exibe a área de dano medida em plantas de AANA com três semanas de idade.Quatro dias após a aplicação de 20 fêmeas de ácaros-aranha. Os resultados dos danos nas plantas são reprodutíveis, demonstrando que os ácaros coletados apresentam estado fisiológico semelhante e são adequados para estudos de interação planta-ácaro-aranha. Este gráfico exibe a área de dano medida em plantas AANA de três semanas de idade quatro dias após a aplicação de 20 fêmeas de ácaros-aranha.Como exemplo de aplicação experimental, a variação natural e a suscetibilidade ao ácaro-rajado, ou orry, foram avaliadas em três sessões de aana ess mediante a aplicação de 20 fêmeas de ácaro-rajado por planta utilizando uma escova úmida e o registro dos danos quatro dias após a infestação. A quantificação dos dados de dano pode ser apresentada em um gráfico de barras ou um gráfico de caixa, e analisada pelo método estatístico apropriado. Neste exemplo, a suscetibilidade ao ácaro-rajado ou bry varia significativamente entre as sessões.Os passos de isolamento e infestação podem ser concluídos em até 30 minutos, dependendo do número de amostras e da escolha do fluxo de trabalho. É importante lembrar que os ácaros não devem permanecer submersos na solução 20 por mais de 10 minutos. O isolamento utilizando o sistema de sementes pode ser usado para obter frações de ácaros em diversos estágios de desenvolvimento, que podem ser utilizadas para uma variedade de experimentos, não apenas na área de interação praga-planta, mas também em fisiologia do desenvolvimento e biologia molecular.

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Research

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Aplicação de duas avistou Ácaro

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