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DOI: 10.3791/51792-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines the dissection of imaginal discs from Drosophila larvae for immunohistochemistry. It highlights the importance of imaginal discs in understanding developmental processes and gene expression.
As estruturas adultas de Drosophila são derivadas de estruturas semelhantes a sacos chamadas discos imaginais. A análise desses discos fornece informações sobre muitos processos de desenvolvimento, incluindo determinação de tecidos, estabelecimento de limites de compartimentos, proliferação celular, especificação do destino celular e polaridade celular planar. Este protocolo é usado para preparar discos imaginais para microscopia de luz / fluorescente.
O objetivo geral deste procedimento é dissecar discos imaginários de larvas de drosófila Para imuno-histoquímica, isso é feito removendo primeiro o complexo da cabeça que consiste em boca, ganchos, olhos e discos tenais e cérebro das larvas. O segundo passo é fixar o complexo da cabeça e incubá-lo com anticorpos primários e secundários. Em seguida, o olho e os discos tenais são separados do complexo da cabeça.
A etapa final é montar os discos imaginais em agente anti-branqueamento em uma lâmina de vidro. Em última análise, repórteres fluorescentes ou LAC Z e coloração de anticorpos podem revelar a expressão espacial e temporal de genes e proteínas dentro dos tecidos imaginais usando microscopia de fluorescência. Embora esta técnica possa ser usada para fornecer informações sobre a localização de genes e proteínas no disco imaginal.
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