Um Modelo de Aprendizagem lateralizados Odor em ratos recém-nascidos para Dissecando Formação Neural dos circuitos Consolidação da Memória

Este protocolo introduz o aprendizado precoce da preferência de odor lateralizado em ratos usando oclusões agudas de uma única nária. Isso é feito primeiro construindo tampões nasais de polietileno removíveis. O segundo passo é ocluir o Áries desejado antes do treinamento comportamental.

Em seguida, prepare a cama perfumada e, em seguida, treine o animal na cama perfumada enquanto a acaricia com um pincel. A etapa final é testar a preferência de odor lateralizado usando um aparelho de teste de duas opções. Em última análise, a imuno-histoquímica da proteína de ligação ao elemento de resposta C amp fosforilada ou P crib é usada para demonstrar o silenciamento unilateral da atividade neuronal devido à reclusão única e à reversibilidade do método.

A principal vantagem desta técnica de nossa existência entre métodos de controle animal é que somos capazes de reduzir a variabilidade e o número de animais através da natureza de nosso projeto experimental de controle intra-animal antes da camada pós-natal 11, devido à falta de projeções de vírgulas anteriores maduras de MA, que dois hemisférios olfativos não estão conectados. Isso nos permite manipular um hemisfério independentemente do outro por meio da oclusão de nutrição única. Os hemisférios ocluídos servem como um controle intra-animal.

Embora essa técnica se concentre no aprendizado olfativo em ratos neonatais, as implicações nos permitirão responder a questões fundamentais sobre processos neurais durante o aprendizado e a memória, como plasticidade sináptica, metaplásica e seus mecanismos moleculares subjacentes. As conclusões tiradas de estudos usando esse método podem ser generalizadas para princípios básicos de aprendizagem e memória e mamíferos, especialmente durante períodos críticos pós-natais. Isso nos ajudará a construir um cenário promissor para possíveis terapias para perda de memória associada a condições fisiopatológicas.

Este método também é altamente adequado para outros processos relacionados ao olfato, como percepção de odor e revestimento de odor. O tampão nasal é construído a partir de tubos de polietileno 20 e três fios de sutura de seda zero. Primeiro, corte um pequeno pedaço de polietileno 22 a aproximadamente 0,8 centímetros.

Em seguida, passe a sutura de seda pelo tubo preparado de forma que haja rosca em ambos os lados da seção do tubo. Em uma extremidade da linha fora do plugue, dê um nó. Puxe a seção do tubo para baixo sobre o nó na rosca.

O nó deve se alojar dentro da tubulação. Apare as duas extremidades da rosca, de modo que cerca de dois milímetros de rosca fiquem salientes de uma extremidade do tubo. Para iniciar este procedimento, retire o filhote da represa e coloque-o em um prato seguro coberto com roupa de cama comum.

Usando um aplicador de ponta de algodão, aplique uma geléia de anestésico local, 2% de xilocaína no Áries a ser ocluído. Deixe o filhote descansar no prato por cerca de três minutos. Lucin no filhote é a etapa mais crítica neste procedimento.

A cura deve ser tomada durante a inserção do tampão nasal para evitar sangramento e danos aos tecidos. Em seguida, pegue o filhote e segure-o suavemente, mas com segurança, na mão não dominante com a mão dominante, pegue um nariz, tampe e passe a mesma geléia anestésica local ao redor da ponta da qual o fio não está saliente. Isso atuará como um anestésico para qualquer dor menor associada à inserção do plugue e um lubrificante dentro do nes.

Insira suavemente o tampão nasal segurando firmemente o filhote e girando lentamente o plugue com empurrões muito suaves até que o plugue esteja totalmente inserido e apenas a rosca de dois milímetros esteja saindo do Áries. Não deve haver sangramento de nenhum dos Áries durante este processo. Filhotes com sangramento durante a inserção do tampão nasal não podem ser usados para o experimento.

Deixe o animal descansar no prato por cinco minutos para se habituar ao plugue Antes de iniciar o treinamento para evitar contaminação por odores, prepare a cama perfumada em uma capela e, usando luvas novas, coloque 500 mililitros de cama de lascas de madeira em um saco plástico. Use uma seringa para retirar 0,3 mililitros de extrato de hortelã-pimenta e borrife sobre a roupa de cama no saco plástico. Feche o saco, agite o saco vigorosamente e deixe a roupa de cama descansar no saco por cinco minutos, coloque a roupa de cama perfumada em uma caixa de treinamento de acrílico rasa e transparente de 20 por 20 por cinco centímetros descoberta na hotte por cinco minutos antes de usar.

Assim que a roupa de cama estiver preparada, descarte as luvas usadas. Não permita que as luvas entrem em contato com os animais. Coloque 500 mililitros de roupa de cama sem perfume em outra caixa de treinamento de acrílico limpa e certifique-se de que não entre em contato com roupas de cama perfumadas ou luvas usadas.

Comece o paradigma de condicionamento de odor colocando o filhote habituado na cama perfumada para odor experimental. Além disso, filhotes positivos para OS de acidente vascular cerebral. Acaricie o filhote por 30 segundos.

Usando um pincel pequeno, use movimentos circulares rápidos principalmente ao redor da região traseira do filhote. O acariciar induz a liberação de norepinefrina para o bulbo olfatório e o córtex olfatório. Isso serve como um estímulo incondicional.

Deixe o filhote descansar por 30 segundos. Repita os 30 segundos de carícia, seguidos de 30 segundos de descanso por um total de 10 minutos. Quando os 10 pares de carícias e odor estiverem completos, remova o filhote da caixa de condicionamento.

Remova o tampão nasal e devolva o filhote à barragem para controle. Odor apenas para filhotes negativos do sistema operacional. Coloque o filhote habituado na cama perfumada por 10 minutos sem acariciar.

Após 10 minutos, remova o filhote da caixa de condicionamento. Remova o tampão nasal e devolva o filhote à barragem. O teste de preferência de odor lateralizado é realizado em vários momentos após a sessão final de treinamento.

O teste é realizado em uma câmara de teste de aço inoxidável de 30 por 20 por 18 centímetros que é colocada em cima de duas caixas de treinamento de acrílico separadas por uma zona neutra de dois centímetros. Uma caixa de treinamento contém roupa de cama perfumada, enquanto a outra caixa contém roupa de cama limpa e sem perfume. Prepare uma cama com aroma de hortelã-pimenta e uma cama sem perfume, conforme mostrado anteriormente, e coloque cada caixa sob lados opostos da câmara de teste.

Dois centímetros de distância. Coloque a malha plástica no piso da grade de metal da câmara de teste. Remova o P da barragem e coloque um pouco firme de graxa de silicone inodora no Aries que está ocluído.

Durante o treinamento, a graxa pode ser reaplicada durante todo o primeiro procedimento de teste, conforme necessário. Coloque o filhote na zona neutra da câmara de teste. Permita que o filhote explore a câmara por um minuto, registrando quanto tempo o filhote passou nos dois lados da câmara, ou seja, sobre hortelã-pimenta ou cama com aroma neutro.

Transfira o filhote para uma câmara de plástico coberta e deixe-o descansar por um minuto. Repita as tentativas de teste por um total de 10 minutos, mudando a orientação inicial do filhote na câmara para controlar as preferências de direção. Imediatamente após o teste, limpe a graxa do Áries.

Insira um tampão nasal de polietileno no Áries oposto, seguindo o mesmo procedimento de reclusão RY demonstrado anteriormente, e deixe o animal descansar por 10 minutos. Posteriormente, o teste de preferência de odor lateralizado é realizado no filhote. Outra vez. Quando o teste estiver concluído, remova o plugue e devolva o filhote à barragem.

A reclusão estreita única durante o treinamento de odor mais carícias leva a uma memória de odor lateralizada que é confinada aos NRIs poupados. Quando os filhotes são testados quanto a uma preferência de odor com o mesmo nary isolado que durante o treinamento, eles mostram uma preferência pelo odor condicionado. Isso não foi observado quando o teste foi feito com o oposto isolado.

Em contraste, os grupos de controle apenas de odor não mostram preferência de odor, independentemente de qual doença esteja ocluída. Durante o teste, o treinamento de odor lateralizado resulta na ativação lateralizada do sistema olfatório durante a exposição ao odor, imuno-histoquímica do bulbo olfatório ou OB e córtex piriforme anterior ou um PC mostrou significativamente menos Creb fosforilado no hemisfério ocluído após a exposição ao odor em comparação com o hemisfério poupado contralateral. A coloração de Nissel demonstra corpos celulares comparáveis na camada de células mitrais do OB e na camada de células piramidais do PC de ambos os hemisférios.

24 horas após a remoção do tampão nasal expressão do caranguejo ervilha Após a exposição ao odor nas células mitrais do OB e as células piramidais no PC são comparáveis entre os hemisférios ocluído e poupado. Isso indica que o efeito de uma única reclusão experimental é transitório e reversível e não resulta em danos neuronais visíveis a longo prazo que possam afetar a percepção do odor e a ativação neuronal aos odores durante o teste. Uma vez dominada, a oclusão de NA pode ser feita em menos de cinco minutos se for realizada corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante ter muito cuidado ao obstruir a narina. Qualquer força excessiva ou técnica inadequada pode causar sangramento e, portanto, danos à narina Após este procedimento. Outros métodos, como eletrofisiologia ex vivo e técnicas moleculares, podem ser usados para responder a perguntas adicionais sobre a plasticidade sináptica.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como usar oclusões estreitas unilaterais temporárias para lateralizar o aprendizado de odores e dissecar os circuitos neurais que sustentam a formação da memória.