Name: Construção de vapor Chambers usada para expor Ratos ao álcool durante o equivalente a todos os três trimestres de Desenvolvimento Humano (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Aprenda a construir câmaras de vapor de álcool personalizáveis para expor camundongos durante os três trimestres equivalentes da gestação humana. Este método permite estudar os efeitos da exposição fetal ao álcool em modelos animais.

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Apoiado por Institutos Nacionais de Saúde concede R01-AA015614, R01-AA014973, AA014127 e T32-K12-GM088021. Os autores agradecem a Samantha L. Blomquist para a assistência técnica e as Dras. Kevin Caldwell e Donald Partridge para avaliar criticamente o manuscrito e vídeo.

Todos os procedimentos com animais foram aprovados pela Universidade do Novo México de Ciências da Saúde-Centro Animal Care Institucional e Comitê de uso. 1. Montagem de câmara de vapor <ol><li> Corte as folhas de policarbonato com uma serra circular ou quebra-cabeças para as dimensões fornecidas no vídeo para a parte superior, inferior, frontal, traseira, laterais e porta (Figura 1 e Tabela 1). </li><li> Com uma serra circular ou de serra de vaivém, cortada uma abertura de 8 polegadas de altura por 16 cm de largura no centro do painel da frente. </li><li> Meça e marque os furos para a dobradiça do piano para o de 18 polegadas por 10 polegadas folha de policarbonato que se tornará a porta da câmara. </li><li> Na porta, perfurar buracos balcão de pia com um pouco 5/16 broca polegadas, e com um pouco de 3/16 polegadas broca, fazer o furo para os parafusos. Certifique-se para perfurar buracos balcão de pia no interior da porta para as cabeças dos parafusos. </li><li> Prepare as chapas de policarbonato para a soldagem. </li><li> Montar front, painéis traseiros e laterais para o painel de fundo usando Weld-on # 16. </li><li> Vede todas as aberturas entre os painéis com Weld-on # 16. </li><li> Prenda o painel superior com Weld-on # 16. </li><li> Use grampos de barras ou livros pesados ​​para manter tudo no lugar, enquanto as soldas curar. </li><li> Anexar um 1 polegada por uma peça de policarbonato de 12 polegadas para o painel frontal 1 polegada abaixo da abertura para a fixação da dobradiça da porta. </li><li> Deixe pelo menos 24 horas para Weld-on para a cura. </li><li> Corte 2 pedaços de tubulação PEX de 12 centímetros de comprimento e 1 pedaço de 1 polegada tubulação PEX longo. </li><li> Com um pouco de 5/16 perfuração, perfuração de um buraco em cada um dos tubos PEX 12 polegadas a cerca de 1 a 2 polegadas de uma extremidade. </li><li> Anexar 2 x 12 polegadas tubo PEX a um conector em T 3/8 de polegada, com os orifícios localizados fora do conector. </li><li> Tapar as extremidades abertas dos tubos PEX com 3/8 de polegada tampões. </li><li> Fixe a dobradiça de piano para o painel frontal e porta usando 4-40 parafusos e porcas. </li><li> Usando a porta como um guia, mark os furos necessários para a dobradiça de piano sobre o espaçador 1 polegada no painel frontal da câmara. </li><li> Com um pouco de 3/16 polegadas broca, faça os furos no painel frontal para a dobradiça piano. </li><li> Fixe a porta e dobradiça de piano ao painel frontal usando 4-40 parafusos e porcas. </li><li> Montar os grampos articulados, como mostrado no vídeo com uma anilha e uma porca em cada lado do braço lateral. </li><li> Mark e broca de 3/16 polegada buracos para a alternância grampos no painel frontal e anexar alternância braçadeiras com 4-40 parafusos e porcas. </li><li> Adiciona-se 3/8 de polegada selos bulbo de borracha para o interior da porta. </li><li> Com uma perfuração da broca de 5/8 de polegada, fazer um furo no centro do painel de topo para o orifício de entrada. </li><li> Faça um furo de 1/2 polegada de fundo / centro do painel de volta para a porta de saída. </li><li> Montar a porta de saída, empurrando a parte com rosca de 3/8 de polegada na parede por meio de adaptadores, através da parede de trás da câmara de vapor, no furo de passagem de saída. Prenda a porca dainterior da câmara para manter no lugar. </li><li> Retire a cobertura protetora de chapas de policarbonato. </li><li> Anexar o pedaço de tubo PEX 1 polegada para o conector em T e forçar o tubo PEX, através do orifício na parte superior da câmara a partir do interior. </li><li> Encaixe de 3/8 de polegada de cotovelo 90 para o topo do tubo PEX uma polegada a partir do exterior. NOTA: Faça um furo de 1/2 polegada na porta e inserir um septos selo 1/2 polegada para o buraco. </li><li> Repita os passos 1-22 para o ar apenas controlar câmara. </li></ol> 2. Rack e Assembléia Air Entrega <ol><li> Se colocar as câmaras no carrinho / cremalheira mencionado na lista de materiais, montar o carrinho de acordo com as instruções do fabricante. </li><li> Com nozes peças e parafusos, coloque um pedaço de policarbonato para o rack para manter os reguladores de fluxo de ar. </li><li> Em qualquer lugar do pedaço de policarbonato, marca e broca de 3/4 polegada buracos para os reguladores de fluxo de ar e anexar os reguladores com as porcasfornecida. </li><li> Encaixe de 3/8 polegadas através da parede do adaptador para as portas de entrada e de saída dos reguladores de fluxo de ar. </li><li> Monte o frasco de etanol com a pedra de aeração, # 8 rolha e liberação rápida na linha de conectores. </li><li> Usando 3/8 de polegada tubagem TYGON, ligar os reguladores de fluxo para a bomba de ar e um balão de etanol, como mostrado na Figura 1. </li><li> Para o ar de câmara única, prender a porta de saída do regulador de fluxo de ar para a entrada de 3/8 de polegada de cotovelo 90 com um tubo TYGON 3/8 de polegada, conforme mostrado na Figura 1. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500"> Representação Figura 1. Esquemática da configuração das câmaras de vapor. Um conector em T é ligado a uma bomba de ar de baixo ruído. Um dos lados do conector T está diretamente ligado a um regulador de fluxo de ar para a única câmara de vapor do ar. Os outros side é dividida outra vez e ligado a dois reguladores de fluxo de ar diferentes, uma para o ar e uma para o etanol. A câmara de ar está diretamente ligado ao regulador, como mostrado. Para a câmara de vapor de etanol, um regulador de fluxo de ar está ligado à pedra arejador imerso em etanol líquido no frasco de filtração. A porta de braço lateral do balão do filtro está ligado com a saída do regulador de ar, tal como indicado. O vapor de etanol fundiu e o ar é então ligado à entrada da câmara de vapor de etanol. Os tubos de saída (não mostrados) estão ligados a uma saída de ventilação na sala. 3. Teste Vapor Chambers e ajuste os níveis de etanol <ol><li> Adicionar 600 ml de etanol prova 190 para o balão de filtração, inserir a pedra de arejamento, e ligar a entrada do tubo para o braço lateral do balão. </li><li> Feche as portas da câmara e ligue a bomba de ar. </li><li> Ajustar os reguladores de fluxo de ar de modo a que cerca de metade da quantidade de ar que flui através do álcool líquido, o ar é misturado com. Ajustt o ar apenas o fluxo de ar para o escoamento combinado de álcool e ar da câmara de etanol. </li><li> Permitir que as câmaras a equilibrar durante pelo menos 30 min antes de se medir a concentração de etanol do ar. </li><li> Medir a concentração de etanol do ar por meio da extração de 5 ml de ar com uma agulha de 18G e uma seringa de 60 ml através do septo. Diluir essa amostra com ar ambiente puxando o êmbolo de volta para 60 ml (01:12 diluição). Medir o nível de álcool do ar usando um bafômetro, de acordo com as instruções do fabricante. A diluição do ar da câmara é necessário para alcançar o nível de vapor de álcool dentro da faixa de detecção do bafômetro. NOTA: Se utilizando diferentes níveis de exposição do álcool a diluição pode ter de ser ajustada. </li><li> Como ponto de partida, ajuste os reguladores de fluxo de ar conforme necessário para atingir uma concentração de álcool no ar de aproximadamente 4,5-5 g / dl (g de álcool vaporizado por dl de ar). </li></ol> 4. Criação de Animais <ol><li> Fêmeas casa grupo C578BL / 6 ratinhos (2-3 meses de idade) durante pelo menos uma semana para sincronizar os ciclos ovarianos. </li><li> Individualmente abrigar machos C57BL / 6 (2-5 meses de idade) por pelo menos 2 semanas. </li><li> Após a sincronização, coloque uma única fêmea com um único macho para 5 dias para permitir o acasalamento. </li><li> Após o acasalamento, os machos e remover individualmente fêmeas casa e colocá-los em câmaras. </li></ol> 5. Pré e pós-natal Etanol Vapor exposição <ol><li> Expor vacas prenhes ao vapor de etanol, durante 4 horas por dia começando às 10 horas, durante o ciclo de luz (luzes acesas a partir de seis horas - seis horas), exceto o dia do nascimento para evitar a morte filhote. </li><li> Pesar barragens no dia gestacional (G) 5, G13-G14, G18 e G20-para monitorar a gravidez; cama foi alterado nos dias em que as fêmeas foram pesadas para minimizar o manuseio. </li><li> Cada dia substituir o alimento para os grupos de etanol expostos para evitar o consumo de peletes com qualquer etanol absorvido nelas. </li><li> No dia danascimento não expor os animais. Após o nascimento expor as barragens e os filhotes de 4 horas por dia começando às 10 horas a partir de P1-P12. </li><li> Pesar os filhotes no P2, P8, P12, P25 e; e mudar de cama em P8 e P12 para minimizar a manipulação adicional. </li><li> Imediatamente após a última exposição (P12), transfira as gaiolas a um animal sala habitação standard. </li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Aqui, descrevemos em detalhes os métodos para a construção de câmaras de inalação de vapor. Os materiais e as ferramentas necessárias para a construção das câmaras estão prontamente disponíveis a partir de uma série de fornecedores comerciais e os passos para a construção das câmaras são relativamente simples. O sistema que nós descrevemos aqui não contém válvulas de retenção em linha para evitar o refluxo e mixagem. Não fomos capazes de medir qualquer etanol detectáveis ​​no ar apenas câmaras sugerindo que não temos qu...

Beber durante a gravidez pode prejudicar o feto, causando alterações persistentes em muitos órgãos e sistemas que diminuem significativamente a qualidade de vida para os indivíduos afetados e suas famílias. Estima-se que aproximadamente 10-30% das mulheres bebem durante a gravidez em os EUA, com 1-8% de beber em padrão binge 1,2. A gama de efeitos produzidos pela exposição ao etanol durante o desenvolvimento fetal é coletivamente conhecido como transtornos do espectro do álcool fetal (FASDs). Estimativas recentes indicam que FASDs são um importante problema de saúde pública, com uma prevalência tão alta quanto 2-5% em os EUA 3. O mais grave manifestação de FASDs é Síndrome Alcoólica Fetal (SAF), a qual é caracterizada por retardo de crescimento, anormalidades craniofaciais, e os déficits neurocomportamentais, incluindo dificuldades de aprendizagem. A prevalência da FAS foi estimada em 0,2-0,7% em os EUA 3. Os tratamentos atualmente disponíveis para FASDs são apenas parcialmente eficazese desenvolvimento de tratamentos mais eficazes é limitado pela má compreensão das bases celulares e moleculares do complexo espectro de transtornos. Os dados dos defeitos congénitos Nacionais Prevention Study (NBDPS) indicam que as mulheres grávidas mais comumente beber durante o 1 º trimestre, antes de ter sido detectado a gravidez, seguido de abstinência durante as fases posteriores de gestação 2. O NBDPS também descobriram que o segundo padrão mais comum de consumo de etanol durante a gestação envolve beber em todos os trimestres da gravidez 2. As razões para isso incluem a falta de conhecimento sobre os efeitos potencialmente nocivos da exposição fetal etanol (mesmo em doses baixas), o acesso limitado a cuidados de pré-natal, história positiva para transtornos neuropsiquiátricos e abuso ou dependência de álcool 4. Curiosamente, o NBDPS relatado que o terceiro padrão mais comum de consumo envolvido abstinência durante a 1 <sup&gt; º e 2 º trimestres seguidos de nd consumo durante o 3 º trimestre, quando é frequentemente assumido que o consumo é seguro porque organogênese tem sido quase concluída. No entanto, o 3 º trimestre é um período de alta susceptibilidade a danos no sistema nervoso induzida por etanol, porque este é um período em que circuitos neuronais sofrer profundo refinamento 2. O NBDPS identificou também outros padrões, menos frequentes do consumo de álcool que ocorrem durante a gravidez, incluindo o consumo ao longo do 1 º e 2 º trimestres seguidos de nd abstinência durante o 3 º trimestre 2. Numa tentativa de modelar os diferentes padrões de consumo de etanol observados em mulheres grávidas, um número de paradigmas de exposição etanol desenvolvimento têm sido estabelecida utilizando diversas espécies de animais, com ratos e ratinhos, sendo 5,6 o mais comum. A duração da gestação nesses animais tipicamente lasst cerca de 3 semanas, o que corresponde à 1 ª e 2 ª trimestres de gravidez humana. Muitos estudos com roedores têm avaliado o impacto de várias doses e padrões de exposição ao etanol durante este período. Exemplos dos métodos frequentemente utilizados para administrar o etanol para ratinhos e ratos fêmeas grávidas incluem a administração através de dietas líquidas 7,8, adição de etanol para a água potável 9,10, a ingestão voluntária de soluções adoçadas com sacarina 11, sonda gástrica 12, a inalação do vapor 13 , e subcutânea ou intraperitoneal 14. Os resultados destes estudos foram recapitulado vários dos défices observados em humanos com FASDs, demonstrando que a exposição durante as fases iniciais da gravidez é suficiente para danificar os circuitos neuronais em todo o cérebro (revisão em 6,15). As experiências com roedores também têm demonstrado que a exposição durante o equivalente a 3 ª </sup&gt; Trimestre de gravidez humana, o que corresponde aproximadamente aos primeiros 1-2 semanas de vida pós-natal em ratos e camundongos, podem comprometer significativamente o desenvolvimento do cérebro. Exposição durante este período foi modelado através da administração de etanol em ratos ou camundongos neonatais. O etanol tem sido administrada a estes animais, usando uma variedade de métodos, incluindo a alimentação por gastrostomia em animais criados artificialmente 16-18, intubação intragástrica 19, a injecção subcutânea de 20, e a inalação do vapor 21,22. Estes estudos demonstraram de forma convincente que o crescimento do cérebro jorro é um período de elevada vulnerabilidade para os efeitos no desenvolvimento de etanol 6. Como mencionado acima, beber durante todos os trimestres da gravidez é um padrão comum de consumo de etanol em mulheres 2. No entanto, comparativamente, poucos estudos avaliaram o impacto deste padrão de exposição utilizando modelos animais. Alguns destes estudos tomaram advantage de animais de grande porte, onde o 3 rd trimestre equivalente ocorre no útero, em vez de o período neonatal, como no caso de ratazanas e ratos. Estes modelos animais incluem primatas não humanos, ovelhas 23,24 25-27. No entanto, estes modelos animais, não têm sido amplamente utilizados em FASDs pesquisa, em parte, por causa do custo elevado e a necessidade de instalações de cuidados especializados. Roedores têm sido mais comumente usado para caracterizar o efeito da exposição ao etanol tudo trimestre sobre o desenvolvimento fetal 5. As cobaias foram particularmente vantajosa a este respeito dado o seu amplo desenvolvimento pré-natal e semelhanças na maturação do cérebro ao dos humanos 28,29. Com cobaias, foi possível caracterizar o efeito da exposição ao etanol, no útero, que inclui o período de desenvolvimento equivalente ao humano 3o trimestre. O custo relativamente alto destes animais, bem como a duração relativamente longa da gravidez(~ 67 dias), tem limitado o seu uso a poucos laboratórios que trabalham com FASDs pesquisa. Devido ao seu uso custo-eficácia e ampla na pesquisa biomédica, os pesquisadores usaram ratos para modelar a exposição ao etanol durante todos os trimestres da gravidez. Em estudos iniciais, os ratos foram expostos durante a gravidez através de dietas líquidas, seguido por administração de etanol através de gastrotomia para criados artificialmente recém-nascidos (dia pós-natal (P) 1-10), resultando em níveis de etanol no sangue de pico (BEC) nas barragens de 0,08 g / dl e em que os filhotes de 0,16 g / dl. Este paradigma causou alterações duradouras na mielinização do nervo óptico e redução do número de fibras de glia Bergmann no cerebelo 30-32. Da mesma forma, Maier e colaboradores usando condições de criação artificiais administrados etanol para barragens de ratos grávidas de forma binge-como via intubação intragástrica seguido por administração neonatal durante parte do 3 º trimestre equivalente (P4-9) 33,34. PEAK BECs maternos e filhote foram de 0,3 g / dl, tanto gestacional dia 20 e P6. Este paradigma exposição todos trimestre resultou em atraso de crescimento, que foi significativamente maior do que a observada nos filhotes expostos durante períodos determinados de gestação 33. Além disso, os ratos expostos a etanol durante o equivalente para todos os trimestres exibiram uma redução no número de Purkinje do cerebelo e células de grânulos que era maior do que o observado em animais expostos durante outros períodos de 34. As reduções no número de células do hipocampo também foram relatados com esse paradigma, mas esses efeitos parecem ser principalmente uma conseqüência da exposição durante o 3 º trimestre equivalente 35. Um método que envolve a administração de etanol via intragástrica gavagem para ambas as ratas grávidas e ratinhos neonatais também tem sido usado para modelar toda a exposição trimestre 36. Este método, o qual originou CEBs de 0,13 g / dl nas barragens (dia 17 de gestação) e 0,24 g / dl em crias de P6, lon induzidaalterações duração g nos níveis de neurotransmissores monoamina no hipocampo e no hipotálamo, e aumento da expressão de DNA metiltransferases e metil CpG proteína 2 de ligação no hipocampo 37,38. Usando um paradigma de exposição semelhantes (BEC = 0,14-0,2 g / dl em barragens e 0,2 g / dl em crias), Gil-Mohapel et al. 39 detectado um aumento no número de novos neurónios imaturos no giro dentado de ratos adultos que pode representar um mecanismo compensatório a lesão neuronal induzida por etanol ou uma alteração na maturação dos neurónios adultos nascidos. Os investigadores também têm tentado modelar toda a exposição ao etanol trimestre expondo barragens via dietas líquidas ou água potável durante a gravidez e lactação 9,40. No entanto, a utilidade de expor os filhotes através do leite da mãe é limitado porque normalmente resulta em baixos BECs filhote (por exemplo, ,002-,05 g / dl; 41,42). Os ratinhos foram também utilizados extensvamente para caracterizar os efeitos da exposição ao etanol de desenvolvimento. Este modelo animal compartilha muitos dos pontos fortes descritos acima para o modelo animal de ratos, com a vantagem adicional de que muitas linhagens de camundongos geneticamente modificados estão disponíveis 5. Ratos têm sido usados ​​com sucesso para caracterizar os efeitos do etanol durante o 1 º, 2 º ou 3 º trimestres de gestação 43,44. No entanto, o impacto de qualquer exposição trimestre nestes animais não foi bem caracterizado por ser tecnicamente mais difícil para expor os ratos durante o equivalente a todos os trimestres da gravidez humana. Por exemplo, a criação e artificial por sonda gástrica, que têm sido utilizados com sucesso em ratos, requerem procedimentos mais especializados em ratos 45. Ao melhor de nosso conhecimento, apenas um estudo até à data tem tentado estudar o efeito de qualquer exposição etanol trimestre utilizando camundongos; esses animais foram expostos a solução de etanol em água potável during gravidez e lactação 46. BECs maternas foram 0,07 g / dl e filhote BECs não foram determinadas, mas espera que seja uma fração daqueles em barragens. Aqui, descrevemos um novo modelo de exposição ao etanol tudo trimestre de ratos onde o álcool é administrada aos dois barragens grávidas e recém-nascidos através de câmaras de inalação de vapor. Câmaras de vapor foram construídos com base em um projeto anterior 47. Nós fornecemos instruções detalhadas sobre como construir as câmaras de inalação e executar os procedimentos de exposição. Nós também fornecemos informações sobre as CEBs que podem ser alcançados e do impacto da exposição na sobrevivência das crias e crescimento.

<table><tbody><tr><td>Policarbonato 1/4" transparente 48" x 24"</td><td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Espuma Vedação de bulbo de borracha 3/8"w x 7/32"h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 pés</td></tr><tr><td>Solda #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Dobradiça de piano 12" de comprimento</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 ft</td></tr><tr><td>Grampos de alavanca de retenção padrão</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>Tubo PEX 1/2"</td><td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td>10 pés</td></tr><tr><td>Conector de tubo em T farpado (Preto) Pacote 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Encaixe de plugue farpado (Preto) Pacote 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Encaixe de tubo de cotovelo farpado (Preto) Pacote 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>Adaptadores de parede de 3/8", tubo para tubo roscado</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Phillips Parafuso de máquina 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Parafuso de máquina porca sextavada 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Medidor de vazão de montagem em painel 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>FRASCO, FILTRO 1.000 ml 6/PACOTE</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>algarismo</td></tr><tr><td>Precision Seal Septa</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Tampa de Borracha Preta #8 1-furo</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBO TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBO TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Pedra Aerator P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" T-connectors Pk de 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>Seccionadores VWR cônicos Pk de 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr> 3<tr><td>/8 Mangueira Barb acoplamento em linha com válvula</td><td>Colder Products Company</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Bomba de ar de capacidade média</td><td>LMI Fabricantes</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Prateleira de arame Nexelate 36"W X 24"D X 63"H</td><td>Industrial global</td><td>T9A990135</td><td>1</td></tr><tr><td>Conjunto de (4) Rodas de Poliuretano de 5"</td> Global <td>industrial</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

construção de vapor chambers usada para expor ratos ao álcool durante o equivalente a todos os três trimestres de desenvolvimento humano

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

A exposição ao álcool durante o desenvolvimento pode resultar em uma constelação de anormalidades morfológicas e comportamentais que são conhecidos coletivamente como Transtornos do Espectro Fetal Álcool (FASDs). No final mais grave do espectro é a Síndrome Alcoólica Fetal (SAF), caracterizada por retardo de crescimento, dysmorphology craniofacial e déficits neurocomportamentais. Os estudos com modelos animais, incluindo os roedores, elucidaram muitos mecanismos celulares e moleculares envolvidas na patofisiologia da FASDs. Administração de etanol para roedores grávidas tem sido utilizado para modelar a exposição humana durante os primeiros e segundo trimestres da gravidez. Terceiro trimestre o consumo de etanol em humanos foi modelado usando roedores neonatais. No entanto, alguns estudos com roedores têm caracterizado o efeito da exposição ao etanol durante o equivalente a todos os três trimestres da gravidez humana, um padrão de exposição que é comum em mulheres grávidas. Aqui, vamos mostrar como construir câmaras de vapor a partir prontamente omateriais btainable que podem acomodar até seis gaiolas mouse padrão. Descrevemos um paradigma de câmara de vapor que pode ser utilizado para modelar a exposição ao etanol, com uma manipulação mínima, durante todos os três trimestres. Os nossos estudos demonstraram que vacas prenhes desenvolveu tolerância metabólica significativa de etanol. No entanto, os ratos neonatal não desenvolveram tolerância metabólica e do número de fetos, peso do feto, placenta peso, número de filhotes / ninhada, número de mortos filhotes / ninhada e peso das crias não foram significativamente afetadas pela exposição ao etanol. Uma vantagem importante deste paradigma é a sua aplicabilidade para estudos com ratinhos geneticamente modificados. Além disso, este paradigma minimiza o manuseio de animais, um grande confundir na pesquisa do alcoolismo fetal.

Figura 2A mostra que ambos os ratos grávidas e filhos neonatal foram expostos a concentrações de vapor de etanol relativamente estáveis ​​nas câmaras. Estas variaram entre 4-6 g / dl. Figura 2B mostra as CEBs obtidos nas ratas grávidas como uma função do tempo. CEBs foram medidos usando uma enzima álcool desidrogenase padrão baseado ensaio 48. No G5, BEC rapidamente aumentou para ~ 60 mM de 2 horas após o início da exposição e atingiu um pico no final do período de exposição ...

Nós demonstramos a construção de câmaras de vapor de álcool, utilizando materiais facilmente disponíveis que abrigam simultaneamente seis gaiolas de rato. Descrevemos ainda mais a sua utilização em um modelo do rato de exposição fetal ao álcool equivalente a todos os 3 trimestres de gestação humana. Este paradigma expõe animais durante a gestação e pós-natal dias 1-12.

Construção de vapor Chambers usada para expor Ratos ao álcool durante o equivalente a todos os três trimestres de Desenvolvimento Humano

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

Neste vídeo, demonstraremos como construir e montar câmaras de vapor de álcool. Também descreveremos um paradigma de inalação de álcool que expõe maas durante o equivalente a todos os três trimestres do desenvolvimento humano. As câmaras são altamente personalizáveis para os níveis desejados de álcool no sangue ou paradigmas de exposição.Nosso design de câmara pode abrigar até seis gaiolas de camundongos de tamanho padrão, onde os camundongos têm acesso lipídico ad a alimentos e água. Esse paradigma produz níveis relativamente altos de álcool no sangue em camundongos e filhotes prenhes sem o uso de rosol. Ouvimos do laboratório de Fernando Valenzuela na Universidade do Novo México.Neste vídeo, demonstraremos a montagem de câmaras de vapor de etanol de policarbonato e descreveremos seu uso em um modelo de camundongo de três trimestres de exposição fetal ao álcool. Qualquer pessoa com habilidades básicas de carpintaria poderá construir as câmaras e as dimensões podem ser modificadas para atender às necessidades individuais. As câmaras podem ser alojadas no biotério durante toda a exposição e minimizarão o estresse relacionado ao transporte e manuseio dos animais.Devido às diferenças nos estágios de desenvolvimento, a administração de etanol a roedores prenhes tem sido usada para modelar a exposição humana durante o primeiro e segundo trimestres, enquanto a administração de etanol a neonatos é usada para modelar a exposição do terceiro trimestre. Essas câmaras são projetadas para abrigar várias gaiolas de camundongos simultaneamente e expor mães grávidas, bem como recém-nascidos alojados com sua mãe. Algumas das vantagens de usar esse paradigma de exposição ao álcool incluem a capacidade de imitar todos os três trimestres de desenvolvimento, a redução do estresse de mães e filhotes prenhes, bem como a flexibilidade em seu controle sobre o nível de exposição ao etanol.Em cinco pedaços individuais de 24 por 48 polegadas de um quarto de polegada de espessura, folhas de policarbonato transparentes medem e marcam as dimensões fornecidas para a parte superior, inferior, frontal, traseira, laterais e a porta. Essas dimensões construirão uma câmara de 32 polegadas de largura, 22 polegadas de profundidade e 14 polegadas de altura. Uma câmara desse tamanho caberá adequadamente seis gaiolas de camundongos padrão medindo 11 polegadas e meia por sete polegadas e meia por cinco polegadas e meia de altura.É importante lembrar que isso fornece apenas uma única câmara, e esse processo precisará ser repetido para terminar com duas câmaras idênticas, uma câmara para exposição ao álcool e uma câmara para exposições controladas apenas ao ar. As chapas de policarbonato podem ser cortadas com uma serra circular equipada com uma lâmina de 80 dentes ou uma serra tico-tico equipada com uma lâmina específica de plástico ou plexiglass. Corte as folhas de policarbonato nas dimensões medidas, tendo o máximo cuidado possível para garantir cortes retos.Isso reduzirá as folgas durante o processo de montagem, uma vez que todas as peças sejam cortadas. Meça um retângulo de oito polegadas por 16 polegadas no centro do painel frontal para criar uma abertura para a porta. Usando uma broca de três de oito polegadas, faça um furo na parte interna de cada canto.Os orifícios são usados para inserir a sublâmina do gabarito através da folha de policarbonato e cortar a abertura. Se estiver usando uma serra circular, um corte de imersão pode ser executado. Alguns cortes traseiros podem ser necessários para limpar as bordas perto dos cantos.Depois que todas as bordas forem cortadas, a peça central pode ser removida e você fica com uma abertura no painel frontal. Para iniciar a montagem da porta, marque os orifícios necessários para prender a dobradiça do piano à porta. Usando uma broca de cinco de 16 polegadas, faça furos de escareador nas marcas, esses furos de escareador aceitarão a cabeça do parafuso e só devem ser perfurados na metade da folha de policarbonato.Com uma broca de três 16 polegadas, complete os furos através da folha usando os furos do contra-coletor como guia antes da montagem. Remova aproximadamente duas polegadas da cobertura protetora das folhas de policarbonato para permitir a soldagem das peças. O processo de montagem pode ser rápido, por isso pode ser útil dispor a parte inferior, traseira, frontal e laterais antes de soldar as peças.Para soldar o policarbonato, use a solda de ajuste rápido em 16 cimento solvente. Para iniciar a montagem, adicione um cordão generoso de solda na borda inferior da peça lateral. Limpe imediatamente quaisquer gotas de solda com uma toalha de papel.Coloque o lado na parte inferior com ajuda. Monte o resto das paredes no fundo da câmara. Lembre-se de que, para as dimensões fornecidas, as peças laterais se encaixam entre o painel frontal e traseiro.Depois que as paredes estiverem montadas, preencha as lacunas entre as juntas por dentro com o Weldon. Para prender o topo da câmara, adicione uma quantidade generosa de Weldon no topo de cada parede. Coloque o painel superior no topo das paredes e alinhe as bordas.Use braçadeiras de barra para manter tudo no lugar enquanto a solda cura. Alternativamente, livros pesados podem ser usados durante o processo de cura para garantir que a porta fique nivelada do lado de fora da câmara. Um pedaço de policarbonato de uma polegada por 12 polegadas precisa ser soldado ao painel frontal uma polegada abaixo do aberto.A dobradiça será fixada a este espaçador e permitirá que a porta vede a câmara. Para construir a tubulação de entrada, corte dois pedaços de tubo de polietileno de meia polegada com 12 polegadas de comprimento. Corte também um pedaço de uma polegada de tubo de polietileno de meia polegada para fornecer o álcool vaporizado ou a broca pneumática.Um orifício de cinco 16 polegadas a aproximadamente uma polegada da extremidade de cada um dos pedaços de tubo de polietileno de 12 polegadas. Monte o sistema de fornecimento de ar usando dois plugues de três oitavos de polegada e um conector T de três oitavos de polegada. Certifique-se de que os orifícios perfurados na tubulação de polietileno estejam mais distantes do conector T.Prenda a dobradiça do piano na porta, certificando-se de que os orifícios da pia do balcão estejam voltados para cima. Usando quatro parafusos e porcas de máquina 40, prenda a dobradiça do piano na porta. Use a porta como guia e marque os orifícios para o piano Dobre o espaçador de uma polegada no painel frontal com uma broca de três de 16 polegadas.Faça os furos no painel frontal para prender a porta com quatro parafusos e porcas de máquina 40. Prenda a porta e a dobradiça do piano ao painel frontal. Aperte com uma chave inglesa.Monte o hold. Alterne clamp como mostrado. Marque os orifícios do grampo de alternância no painel frontal usando a porta como guia.Repita isso para dois grampos de alternância ao longo da parte superior e um de cada lado da porta com três brocas de 16 polegadas. Faça os furos para os grampos de alternância. Prenda os grampos de alternância com quatro parafusos e porcas de 40 máquinas.Com as porcas no interior da câmara, aperte com uma chave inglesa para garantir uma câmara hermética. Corte e prenda a vedação de borracha de três oitavos de polegada de largura ao longo da borda da porta. Quando a porta é fechada, o bulbo forma uma vedação hermética entre a porta e o painel frontal da câmara.Marque o centro do painel superior para criar uma porta de entrada para a câmara com uma broca de mandrilar de cinco e oito polegadas. Faça o furo para a porta de entrada. Crie uma porta de saída fazendo um orifício de meia polegada no centro inferior do painel traseiro.Insira um adaptador de parede de três oito polegadas na porta de saída e conecte por dentro da câmara. Nesta fase, a cobertura protetora pode ser removida. Instale o sistema de fornecimento de ar através do orifício no painel superior do lado de fora.Insira um cotovelo de três oito polegadas e 90 graus Faça um furo de meia polegada na frente da porta. Em seguida, insira um septo de vedação de meia polegada no orifício. Isso servirá como uma porta para medir o vapor de etanol.Neste ponto, o corte e a perfuração estão completos e as câmaras podem ser limpas. Monte o rack e coloque as duas câmaras e o air pub no rack. Para ajudar a organizar o sistema de fluxo de ar, prenda um pedaço de sucata de policarbonato na carcaça inferior e que pode ser usado para ajudar a montar a marca dos reguladores de fluxo de ar e perfurar a broca de três quartos de polegada para os três reguladores de fluxo de ar no pedaço de sucata de policarbonato.Conecte os reguladores de fluxo de ar ao policarbonato com as porcas fornecidas. Conecte um adaptador de parede de três oito polegadas a cada porta do regulador para a câmara de vapor de etanol. Um regulador de fluxo de ar controlará a quantidade de ar que está sendo borbulhada através do álcool líquido e outro controlará a quantidade de ar que está sendo misturada com o álcool vaporizado.O último controlará a quantidade de ar para a segunda câmara somente de ar. Monte o frasco de álcool conforme mostrado. Usando tubos de três oito polegadas.Monte o sistema de fornecimento de ar conforme ilustrado no diagrama usando conectores T ou Y para dividir as linhas. Uma única bomba fornece fluxo de ar suficiente para as câmaras de controle somente de ar e as câmaras de álcool. Conecte a tubulação de três oito polegadas às portas de saída.Adicione 600 mils de um etanol de 90 provas ao frasco e conecte-o ao sistema. Para testar o nível de vapor de etanol, use uma seringa e uma agulha para retirar cinco mils de ar através da septina. Remova a agulha e dilua a amostra de ar de um a 12 puxando a seringa até 60 mls.Com o ar ambiente, empurre lentamente o ar através do bafômetro para medir os vapores de etanol. Os níveis de etanol vaporizado devem ser correlacionados com os níveis de álcool no sangue animal para cada sistema individual. Uma vez que as câmaras estejam localizadas na instalação de animais, lembre-se de exaurir as câmaras diretamente no sistema de ventilação da sala.Camundongos fêmeas de dois a três meses de idade foram alojados em grupo por pelo menos uma semana, enquanto camundongos machos de dois a cinco meses foram alojados individualmente por duas semanas. Camundongos fêmeas foram emparelhados com machos alojados individualmente por cinco dias para permitir o acasalamento. Após o acasalamento, as fêmeas foram removidas dos machos alojados individualmente em uma nova gaiola e colocados dentro das câmaras de vapor.Os animais foram expostos ao etanol por quatro horas por dia. Durante o ciclo de luz de G cinco a G 20. As fêmeas foram pesadas periodicamente para monitorar a gravidez.Os animais não foram expostos no dia do nascimento para evitar a morte dos filhotes. No primeiro dia pós-natal, filhotes e mães são recolocados nas câmaras e expostos até o pós-natal. Os filhotes do dia 12 foram pesados periodicamente para monitorar o crescimento.Para iniciar o local de inalação de vapor. As barragens grávidas alojadas individualmente apenas no álcool e no ar. As câmaras fecham e selam as portas.Adicione o frasco de etanol líquido, conecte-o ao sistema e ligue a bomba. Os reguladores de fluxo de ar controlam a quantidade de ar que entra no etanol líquido e quanto ar está sendo misturado com o vapor de etanol. A proporção de vapor de etanol e ar controla os níveis finais de vapor de etanol nas câmaras.O ar controla apenas o fluxo de ar é definido para o fluxo de ar combinado do etanol e do ar. Após a exposição ao vapor de etanol, o alimento é trocado para eliminar a ração que pode ter absorvido o etanol vaporizado. As portas das câmaras de álcool e ar são rachadas para permitir a troca de ar com a sala.Neste vídeo, demonstramos como montar câmaras de vapor de etanol e descrevemos um paradigma de inalação de vapor de álcool em camundongos que expõe animais durante todos os três trimestres humanos equivalentes. O nível de vapor de álcool pode ser facilmente ajustado para modelar níveis baixos ou altos de álcool no sangue. Uma das vantagens dessas câmaras é como as câmaras são grandes o suficiente para abrigar várias gaiolas em um determinado ponto.Isso permite que os animais sejam alojados dentro das câmaras durante toda a exposição. Isso minimiza qualquer estresse causado ao animal pelo manuseio ou transporte. Além disso, este paradigma pode ser personalizado para qualquer trimestre de interesse e ou nível de exposição durante a construção.É fundamental que todos os cortes sejam retos e quadrados para garantir uma câmara hermética ao soldar as peças de policarbonato. É importante mover-se com rapidez e eficiência porque as soldas secam rapidamente. Depois de assistir a este vídeo, você poderá construir suas próprias câmaras de inalação de vapor.

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Research

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Medicine

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