Detecção de splicing alternativo Durante epitelial-mesenquimal Transição

O objetivo geral do experimento a seguir é detectar mudanças no splicing alternativo durante a EMT. Isso é obtido utilizando um modelo EMT induzível no qual a expressão da proteína de fusão torce. Nas células epiteliais mamárias humanas, as células são submetidas a EMT após o tratamento com tamoxifeno como um segundo passo.

A expressão de isoformas de splice é analisada por RTPCR quantitativo usando conjuntos de primers específicos de isoformas, que revelam mudanças alternativas de splicing no nível de RNA. Em seguida, a abundância de proteína correspondente a cada isoforma é determinada por immuno blotting para confirmar a expressão de isoformas de splice no nível da proteína, são obtidos resultados que mostram mudanças no splicing alternativo em genes de interesse durante a EMT, com base em análises quantitativas de R-T-P-C-R e immuno blotting, Este método pode ajudar a responder questões-chave no campo do splicing alternativo de RN e EMT, como a forma como o splicing alternativo é regulado durante a EMT e como essa regulação afeta a EMT e os processos patológicos relacionados à EMT. As implicações desta técnica são para a terapia do câncer, pois a EMT desempenha um papel importante na promoção da invasão tumoral e metástase.