Name: Aquisição de Vídeo de Alta Qualidade Digital de Drosophila Larvais e adultas Comportamentos de uma perspectiva lateral (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprenda a capturar vídeos digitais de alta qualidade de fenótipos mutantes de Drosophila em perspectiva lateral usando microscópio estéreo e câmera digital. Esta técnica simples melhora a comunicação de dados visuais em pesquisas de genética e neurociência.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Os autores gostariam de agradecer Alexandra Opie para assistência técnica e apoio, James Barton para fornecer vídeo narração e Ramona Flatz e Joellen Sweeney para aparecer no vídeo em anexo. Este trabalho foi financiado pela Fundação de Caridade MJ Murdock (Grant n º 2012205 para JED).

1 O sistema de microscópio estéreo Nota: Apesar de este protocolo é facilmente adaptável a praticamente qualquer sistema de microscópio estéreo acoplado a uma câmera digital com a capacidade de adquirir vídeo, são fornecidos detalhes sobre o sistema utilizado em nosso laboratório (Tabela de Materiais / Equipamentos). <ol><li> Adquirir vídeo digital utilizando um microscópio estéreo trinocular acoplado a uma câmera digital comercial. </li><li> A fim de acoplar a câmera digital comercial à porta trinocular do microscópio estéreo, remova o ½x C-mount do porto fototubo do microscópio estéreo e substituí-lo por um 1X C-mount. </li><li> Montar um acoplador câmera digital (43 mm Rosca) ao 1X C-mount. </li><li> Monte dois anéis abaixadoras, 58 mm a 48 mm, e 48 mm a 43 mm, para o acoplador câmera para colmatar a conexão da câmera digital a um acoplador kit adaptador de lente para a câmera digital. </li><li> Monte a câmera digital para o kit adaptador de lente. </li><li> Adquirir vídeo com a ampliação do microscópio e zoom óptico da câmera digital definida para uma ampliação combinada de cerca de 12X (30 quadros por segundo, 640 x 480 pixels). Nota: A ampliação do microscópio estéreo deve ser compensado de acordo com o recém-reconfigurado 1X C-mount da porta trinocular. </li></ol> 2 Imagem Drosophila terceiro instar Larvas <ol><li> Tape um marcador permanente para a placa preta palco de um microscópio estéreo acoplado a uma câmera digital, de modo que o lado da tampa marcador ocupa cerca de ⅓ a ¼ do campo de visão vertical observado no monitor LCD da câmera. Use tops de marcadores como o palco para realizar imagem larval porque eles vêm em uma variedade de cores que pode ser usado para código de cor e diferenciar os genótipos de larvas sendo fotografada. </li><li> Delimitar o campo de visão observada no monitor LCD da câmara digital na superfície do topo do marcador com uma ponta finamarcador. </li><li> Selecione uma terceira larva instar a imagem. Os critérios para a selecção de larvas de terceiro instar é o comprimento do corpo, a emergência da fonte de alimentação durante a fase larval do ciclo de vida, a presença dos anteriores e posteriores espiráculos, e a estrutura dos ganchos inferiores do aparelho de boca 11. Garantir a larva está limpo, lavando-o bem em água. </li><li> Iluminar o palco marcador permanente topo a partir de cima com a luz a partir de um sistema de iluminação de fibra óptica. Ajuste o ângulo da luz incidente para proporcionar a iluminação ideal. </li><li> Concentre o microscópio sobre a borda de topo marcador permanente. Comece a aquisição de vídeo digital. </li><li> Coloque a larva do lado da tampa de marcador de aproximadamente 75 ° a partir do eixo vertical, fora do campo de visão, sendo o anterior da larva virado para o campo de visão (figura 1). Observação: Colocação da larva no lado da tampa de marcador permite que a câmara da ficha movimento the larva de uma perspectiva lateral. Ela ajuda a manter a larva úmido com água, para que não caia do lado da tampa do marcador. Deve ser tomado cuidado, porém, para não usar muita água, como quantidades excessivas vai aderir à larva como rasteja em todo o campo. </li><li> Gentilmente cutucar a larva com um pequeno pincel para forçá-lo a engatinhar em todo o campo de visão. Seja paciente como as larvas raramente cooperam e muitas vezes tem que ser devolvido ao ponto de partida muitas vezes antes que rastejar em frente do campo. </li><li> Grave aproximadamente 10-15 min de vídeo ininterrupto e cultura digital e remover todas as filmagens desnecessária pós-aquisição com software de edição de vídeo digital. </li></ol> 3 Imagens Adulto Drosophila <ol><li> Coloque um único adulto Drosophila num descartável 1,5 ml tina espectroscópica de poliestireno. Nota: CO 2 para anestesia de adulto Drosophila imediatamente antes de uma behavprotocolo de análise ioral pode comprometer os resultados 12. É recomendado que adultos Drosophila dispor de um prazo de 24 horas para se recuperar de CO 2 para anestesia antes de executar em um teste comportamental 13. </li><li> Ligue o final da cuvete com uma pequena bola de algodão. Garantir a bola de algodão é embalado apertado o suficiente para ocupar o espaço grande boné e limita a voar para o compartimento volume reduzido da tina. </li><li> Coloque a tina na placa de fase branca de um microscópio estéreo e alinhar adequadamente o compartimento de volume reduzido da tina com o campo de visão observada no monitor LCD da câmara digital. </li><li> Iluminar o cadinho a partir de cima com a luz a partir de um sistema de iluminação de fibra óptica. Ajuste o ângulo da luz incidente para proporcionar a iluminação ideal. </li><li> Concentre-se o microscópio e começar a adquirir vídeo digital. </li><li> Grave aproximadamente 30-45 min de vídeo ininterrupto e cultura digital e remover todos os desnecessárioscenas pós-aquisição com software de edição de vídeo digital. </li></ol>

<ol><li>Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aZhang%2C+B+%22Drosophila+neurobiology%3A+a+laboratory+manual%22">Drosophila neurobiology: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2010).</li>
<li>Frank, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+approaches+for+studying+synaptic+development%2C+function%2C+and+plasticity+using+Drosophila+as+a+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system.</a> J Neurosci. 33, 17560-17568 (2013).</li>
<li>Mudher, A., Newman, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMudher%2C+A+%22Drosophila+%3A+a+toolbox+for+the+study+of+neurodegenerative+disease%22">Drosophila : a toolbox for the study of neurodegenerative disease</a>. , Taylor & Francis Group. (2008).</li>
<li>Bilen, J., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+human+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for human neurodegenerative disease.</a> Annu Rev Genet. 39, 153-171 (2005).</li>
<li>Jakubowski, B. R., Longoria, R. A., Shubeita, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+throughput+and+sensitive+method+correlates+neuronal+disorder+genotypes+to+Drosophila+larvae+crawling+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Fly+%28Austin%29%22%5BJournal%5D)">A high throughput and sensitive method correlates neuronal disorder genotypes to Drosophila larvae crawling phenotypes.</a> Fly (Austin). 6, 303-308 (2012).</li>
<li>Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+analysis+of+larval+locomotion+in+Drosophila+chordotonal+organ+mutants%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic analysis of larval locomotion in Drosophila chordotonal organ mutants).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 16053-16058 (2003).</li>
<li>Jahn, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+early+locomotor+abnormalities+in+a+Drosophila+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of early locomotor abnormalities in a Drosophila model of Alzheimer's disease.</a> J Neurosci Methods. 197, 186-189 (2011).</li>
<li>Donelson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%26%2334%3Btracker%26%2334%3B+program%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the &#34;tracker&#34; program.</a> PLoS ONE. 7, e37250(2012).</li>
<li>Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+video+tracking+of+locomotion+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. (24), (2009).</li>
<li>Colomb, J., Reiter, L., Blaszkiewicz, J., Wessnitzer, J., Brembs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+source+tracking+and+analysis+of+adult+Drosophila+locomotion+in+Buridan%27s+paradigm+with+and+without+visual+targets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Open source tracking and analysis of adult Drosophila locomotion in Buridan's paradigm with and without visual targets.</a> PLoS ONE. 7, e42247(2012).</li>
<li>Demerec, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDemerec%2C+M+%22Biology+of+Drosophila%22">Biology of Drosophila</a>. , Hafner Pub. Co. (1965).</li>
<li>Barron, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthetising+Drosophila+for+behavioural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Anaesthetising Drosophila for behavioural studies.</a> J Insect Physiol. 46, 439-442 (2000).</li>
<li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreenspan%2C+RJ+%22Fly+pushing+%3A+the+theory+and+practice+of+Drosophila+genetics.%22">Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics.</a>. , 2nd edn, Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2004).</li>
<li>Duncan, J. E., Lytle, N. K., Zuniga, A., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Microtubule+Regulatory+Protein+Stathmin+Is+Required+to+Maintain+the+Integrity+of+Axonal+Microtubules+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The Microtubule Regulatory Protein Stathmin Is Required to Maintain the Integrity of Axonal Microtubules in Drosophila.</a> 8, e683244(2013).</li>
<li>Belmont, L. D., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+protein+that+interacts+with+tubulin+dimers+and+increases+the+catastrophe+rate+of+microtubules%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a protein that interacts with tubulin dimers and increases the catastrophe rate of microtubules.</a> Cell. 84, 623-631 (1996).</li>
<li>Cassimeris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oncoprotein+18%2Fstathmin+family+of+microtubule+destabilizers%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The oncoprotein 18/stathmin family of microtubule destabilizers.</a> Curr Opin Cell Biol. 14, 18-24 (2002).</li>
</ol>

Os autores declaram que não existem interesses conflitantes.

Força Drosophila melanogaster &#39;s como um sistema modelo para estudar a função do sistema nervoso deriva em grande parte da convergência das poderosas ferramentas genéticas disponíveis e da ampla gama de ensaios comportamentais robustos desenvolvidos. Aqui apresentamos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos locomotiva larvais de uma perspectiva lateral. Temos utilizado com sucesso esta abordagem p...

A fruta comum mosca Drosophila melanogaster é um poderoso sistema de modelo experimental para o estudo da função do sistema nervoso 1-3. Conservação evolutiva da estrutura e função do sistema nervoso, com os seres humanos, assim como a facilidade da manipulação genética e uma vasta variedade de ferramentas genéticas torna o organismo Drosophila estreia para modelar doenças neurodegenerativas humano 4. As mutações genéticas que causam disfunção do sistema nervoso, muitas vezes resultam em larvas mutante viável e adulto de Drosophila com locomoção diminuída. Fenótipos observados no sistema nervoso mutantes defeituosos incluem taxa de locomoção, coordenação aberrante, e os movimentos espásticas em adultos, assim como os défices de contracção peristáltica da musculatura da parede do corpo, e paralisia parcial de larvas reduzida. Estes fenótipos foram explorados no desenvolvimento de telas genéticas de alto rendimento e ensaios de locomoção das larvas 5 mutante, 6 e adulto de Drosophila 7-10 destina-se a quantificar a disfunção locomoção e a identificação de genes necessários para a função do sistema nervoso. Embora essas abordagens são extremamente úteis para quantificar comportamentos locomotiva larvas e adultos, eles não conseguem transmitir informações qualitativas sobre cada comportamento aberrante específico. Por exemplo, enquanto as larvas de terceiro estádio mutante pode apresentar parâmetros de locomoção alterados em um ensaio comportamental, pode não ser claro se este é o resultado de alterações nas contrações peristálticas rítmicas durante o ciclo de rastreamento, em geral falta de coordenação ou paralisia parcial do corpo posterior musculatura da parede. Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos locomotiva larvais de uma perspectiva lateral. O vídeo digital adquirido de uma perspectiva lateral, permite a observação direta e análise de distinções sutis em locomotive comportamentos de uma orientação mais informativa visão lateral.

<table><tbody><tr><td>Microscópio Trinocular Stereozoom Olympus</td><td>Corporation</td><td>SZ6145TR</td><td>&frac12; A montagem C foi removida e substituída por 1X C-mount</td></tr><tr><td>1X C-mount</td><td>Leeds Precision Instruments</td><td>LSZ-1XCMT2</td><td></td></tr><tr><td>Acoplador de câmera digital (rosca de 43 mm)</td><td>Qioptiq Imaging Solutions</td><td>25-70-10-02</td><td></td></tr><tr><td>58 mm a 48 mm Anel Abaixador</td><td>B& H Video</td><td>GBSDR5848</td><td></td></tr><tr><td>Anel Abaixador de 48 mm a 43 mm</td><td>B& H Video</td><td>GBSDR4843</td><td></td></tr><tr><td>Lensmate Adapter Kit para Canon G10</td><td>LensMateOnline.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Canon PowerShot G10 Câmera Digital</td><td>Canon U.S.A., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cubeta Espectroscópica de Poliestereno de 1,5 ml</td><td>Denville Scientific</td><td>U8650-4</td><td></td></tr></tbody></table>

aquisição de vídeo de alta qualidade digital de drosophila larvais e adultas comportamentos de uma perspectiva lateral

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Drosophila melanogaster é um poderoso sistema de modelo experimental para o estudo da função do sistema nervoso. As mutações genéticas que causam a disfunção do sistema nervoso muitas vezes produzem larvas viáveis ​​e adultos que têm locomoção fenótipos defeituosos que são difíceis de descrever adequadamente com texto ou representar completamente com uma imagem fotográfica única. Atuais modos de publicação científica, no entanto, apoiar a apresentação de mídia de vídeo digital como material suplementar para acompanhar um manuscrito. Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de ambos os fenótipos de Drosophila larvas e adultos a partir de uma perspectiva lateral. Vídeo de locomoção das larvas e adultos a partir de uma visão lateral é vantajosa porque permite a observação e análise das distinções sutis e variações nos comportamentos aberrantes de locomotivas. Temos utilizado com sucesso a técnica de visualizar e quantificar aberrant rastejando comportamentos em larvas de terceiro estádio, além de fenótipos e comportamentos mutantes adultos incluindo o grooming.

Nós utilizamos com sucesso desta técnica para adquirir e quantificar o fenótipo comportamental larval associada com a perda de função do gene stathmin (Figura 2) 14. O gene codifica uma proteína stathmin regulamentar microtúbulos que particiona dímeros de tubulina de piscinas de tubulina solúvel, e liga os microtúbulos e promove a sua desmontagem 15,16. Stathmin função é necessária para manter a integridade dos microtúbulos nos axónios dos nervos periféricos ...

Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos mutantes larvais de uma perspectiva lateral.

Aquisição de Vídeo de Alta Qualidade Digital de Drosophila Larvais e adultas Comportamentos de uma perspectiva lateral

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

Os modos atuais de publicação científica suportam a submissão de arquivos de mídia de vídeo digital como material suplementar a um manuscrito. Esses arquivos de mídia de vídeo são frequentemente usados para transmitir informações qualitativas ao leitor que são mais fáceis de observar do que descritas em texto ou por uma única fotografia. Aqui descrevemos uma metodologia simples para adquirir vídeo digital de alta qualidade de fenótipos mutantes de drosófila de uma perspectiva lateral, Embora este protocolo seja facilmente adaptável a praticamente qualquer sistema de microscópio estéreo acoplado a uma câmera digital, com a capacidade de adquirir vídeo, são fornecidos detalhes sobre o sistema que usamos em nosso laboratório.Adquirimos nosso vídeo usando um microscópio estéreo ocular Olympus SZ 61, acoplado a uma câmera digital comercial Canon G 10. A meia montagem XC da porta do tubo fotográfico do microscópio estéreo foi reconfigurada com uma montagem XC. Um acoplador de câmera digital foi montado em uma montagem XC.Dois anéis abaixadores de 58 milímetros a 48 milímetros e 48 milímetros a 43 milímetros foram montados no acoplador da câmera. Um kit adaptador para uma câmera Canon G 1

acquisition-high-quality-digital-video-drosophila-larval-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O estudo do comportamento locomotor complexos...

De alta resolução de vídeo de Rastreamento Locomotion em Adult Drosophila melanogaster

Este trabalho demonstra o uso de um microscópio confocal de varredura rápida para o comportamento das células de imagem diretamente através do pupário. Ao deixar o caso de pupa intacto, este método permite a observação e medição de processos celulares dinâmicos numa fase de desenvolvimento de Drosophila que é difícil de estudar directamente.

Imagem Através do Pupal Caso de<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Este protocolo apresenta um método eficiente para obter imagens do neuroepitélio do olho pupal de Drosophila vivo. Este método compensa o movimento do tecido e a topologia irregular, melhora a visualização dos limites celulares por meio do uso de várias proteínas de junção marcadas com GFP e usa um equipamento de imagem facilmente montado.

Vivo-imaging da Drosophila Pupal Eye

Aqui, nós apresentamos um método para registrar contrações embrionárias do músculo em embriões da Drosophila em uma maneira não invasora e detalhe-orientada.

Imagens ao vivo e análise de contrações musculares no embrião de Drosophila

Este protocolo é projetado para a imagem e análise da dinâmica da orientação celular e crescimento tecidual na epitélia abdominal Drosophila à medida que a mosca-das-frutas sofre metamorfose. A metodologia aqui descrita pode ser aplicada ao estudo de diferentes estágios de desenvolvimento, tecidos e estruturas subcelulares em Drosophila ou outros organismos modelo.

Imagem e Análise da Dinâmica de Orientação e Crescimento tecidual na Epitélia Drosophila em Desenvolvimento durante os estágios pupal

Este protocolo descreve um método para montar larvas drosophila para alcançar mais de 10 h de imagens ininterruptas de lapso de tempo em animais vivos intactos. Este método pode ser usado para visualizar muitos processos biológicos próximos à parede do corpo larval.

LarvaSPA, um método para montagem de larva drosophila para imagem de lapso de tempo de longo prazo

Apresentado aqui é um protocolo para microinjetar e simultaneamente imaginar múltiplos embriões de Drosophila durante o desenvolvimento embrionário usando um imager de alto teor baseado em placas.

Preparação e microinjeção de embriões Drosophila para Microscopia de Células Vivas Realizadas usando um Analisador automatizado de alto teor

Este protocolo descreve como fazer uma simples câmara de observação de comportamento drosophila adulto, e como tirar fotografias/vídeos de alta definição da morfologia ou comportamento de diferentes tipos de moscas de frutas na câmara de observação através de métodos relativamente simples e acessíveis.

Um sistema de imagem de alta definição ajustável para estudos comportamentais de adultos drosophila

Aqui, um protocolo é apresentado para imagens ao vivo de longo prazo da perna de Drosophila durante o estágio de pupa, envolvendo a remoção completa do pupário. Este protocolo também pode ser aplicado a outros tecidos.

Imagem ao vivo de longo prazo do desenvolvimento da perna de pupa de Drosophila após a remoção do pupário

Drosophila melanogaster larvas fornecer um modelo de sistema ideal para investigar os mecanismos de transporte axonal dentro larval nervos segmentares. Usando este procedimento, 3 de larvas portadores de mutações diferentes podem ser comparadas às larvas do tipo selvagem.

Visualização de Larval Nervos segmentar em 3 Rd Instar Drosophila Preparações larval

Aprenda a capturar vídeos digitais de alta qualidade de fenótipos mutantes de Drosophila em perspectiva lateral usando microscópio estéreo e câmera digital. Esta técnica simples melhora a comunicação de dados visuais em pesquisas de genética e neurociência.

Aquisição de Vídeo de Alta Qualidade Digital de Drosophila Larvais e adultas Comportamentos de uma perspectiva lateral

Explorar mais vídeos