Técnicas de coleta de sangue não terminal em cobaias
11 de outubro de 2014
Apesar de ser um modelo conhecido, a cobaia representa atualmente um nicho em ciências experimentais em animais e dados limitada disponível sobre a execução da maioria dos procedimentos. Apresentamos aqui quatro abordagens diferentes para não-terminal em técnicas de amostragem de sangue vivo em qualquer cobaias conscientes ou anestesiados.
O objetivo geral deste vídeo é ilustrar a metodologia de quatro técnicas diferentes de amostragem de sangue em cobaias. Os procedimentos mostrados não são terminais, a menos que os volumes de amostra ou o número de amostras excedam as diretrizes para coleta de sangue. Em animais de laboratório, aqui vemos a causa da veia lateral e da veia tarsal.
A veia ous corre dorsal e lateralmente sobre a articulação do tarso. Um máximo de três amostras devem ser coletadas de cada pata traseira, e aproximadamente 100 a 400 microlitros de sangue podem ser coletados por amostra. O equipamento necessário inclui um barbeador elétrico, banho-maria morna, uma toalha limpa, um pouco de algodão, um desinfetante como álcool 70%, agulhas estéreis, 21 gorge ou tubos de coleta menores.
E se o objetivo for medir a glicose no sangue e o amostrador AccuCheck, a amostragem de sangue do cefeus ou da veia do tarso pode ser feita em porquinhos-da-índia sem anestesia. A cobaia é contida por um assistente treinado e uma técnica séptica deve ser usada. O cabelo que cobre a área do tarso é raspado com um barbeador elétrico e a perna traseira lavada e aquecida em banho-maria morno.
Além de limpar a perna, isso faz com que as veias se dilatem e se tornem mais visíveis. A perna traseira é estendida e a estase é alcançada aplicando uma leve pressão para baixo logo acima do joelho, permitindo que a veia se torne visível imediatamente antes da amostragem. A área raspada é limpa com um desinfetante.
A veia é perfurada com uma agulha ou lanceta, e o sangue pode ser coletado em um tubo capilar ou microt. Quando o sangue é coletado, a estase é aliviada e uma leve pressão é aplicada com um pedaço de algodão Para facilitar a hemostasia, as artérias e veias superficiais na superfície dorsal da orelha do porquinho-da-índia podem ser vistas aqui. Esses vasos podem ser usados para amostragem de sangue quando apenas um volume muito pequeno é necessário.
Um exemplo pode ser para medições de glicose no sangue. O porquinho-da-índia é suavemente contido, deixando o ouvido acessível. O local da punção deve ser preparado septicamente antes da amostragem, mas não é necessário raspar.
Uma leve pressão pode ser aplicada na base da orelha para tornar as veias mais visíveis. A veia é perfurada com uma agulha ou lanceta e o sangue é coletado em um tubo capilar ou imediatamente analisado quanto aos níveis de glicose no sangue usando o sistema de amostra AccuCheck. Quando o sangue for coletado, uma leve pressão deve ser aplicada no local da punção para facilitar a hemostasia.
Esta imagem ilustra a posição da cobaia para amostragem de sangue jugular e a causa da veia jugular. O procedimento é realizado exclusivamente em um animal anestesiado. O equipamento necessário inclui medicamentos para anestesia e barbeador elétrico, um desinfetante como estetoscópio com álcool 70%, pomada ocular neutra, seringas de um mililitro, agulhas estéreis, geralmente 23 ou 25.
A heparina gorgue e o EDTA podem ser usados para lavar as seringas antes da amostragem, a fim de evitar a coagulação. Existe uma variedade de protocolos anestésicos para porquinhos-da-índia. Nesse caso, os animais são anestesiados por anestesia balanceada com uma mistura de seno solitário e butif injetado por via subcutânea no pescoço.
Esta mistura pode ser diluída com solução salina para tornar a dosagem mais precisa. Após a injeção, o porquinho-da-índia deve ser devolvido à gaiola e deixado em silêncio. O efeito circundante geralmente é observado após aproximadamente 10 minutos e dura de 30 a 40 minutos antes da amostragem.
A profundidade da anestesia é avaliada pela verificação dos reflexos e pomada ocular neutra é administrada para proteger os olhos. A veia jugular é abordada com a cobaia colocada de costas e as patas dianteiras retraídas trimestralmente. A área é raspada e preparada assepticamente, a clavícula é palpada e uma agulha de 23 gorge montada em uma seringa de um mililitro é inserida aproximadamente um centímetro lateral à linha média, apenas cranio dorsalmente à clavícula.
A seringa deve ser mantida em um leve ângulo para cima e medialmente. Assim que a pele é penetrada, uma leve pressão negativa é aplicada à seringa, pois a jugular está situada superficialmente e a profundidade de inserção de cerca de três a quatro milímetros é suficiente. Quando a amostra tiver sido coletada, libere a tensão das patas dianteiras e aplique uma leve pressão no lado da punção.
O animal pode então ser devolvido a uma gaiola de recuperação, mas deve ser monitorado para garantir a hemostasia e a recuperação da anestesia. Quando a cobaia estiver totalmente recuperada da anestesia, ela poderá retornar ao curral. As características anatómicas da cobaia são ligeiramente diferentes das de outros modelos de roedores, sendo necessária a modulação das técnicas de amostragem para ter em conta as diferenças específicas das espécies e obter amostras de qualidade suficiente no mais curto espaço de tempo possível.
Tanto a longo quanto a curto prazo. In vivo, os estudos geralmente exigem amostras de sangue repetidas. A escolha da técnica deve ser cuidadosamente considerada para reduzir o estresse e o desconforto e garantir a sobrevida, bem como o cumprimento dos requisitos de tamanho da amostra e acessibilidade.
Todos os métodos descritos foram exaustivamente testados e aplicados com sucesso para amostragem de sangue in vivo repetida. Em estudos em nosso centro de pesquisa, a cobaia representa um nicho nas ciências animais experimentais, mas há dados limitados disponíveis sobre a execução de procedimentos básicos. Neste artigo em vídeo, apresentamos quatro abordagens diferentes para amostragem de sangue in vivo não terminal em animais conscientes ou anestesiados, desde que os volumes e o número de amostras não excedam as diretrizes para coleta de sangue em animais de laboratório.
Esses procedimentos são recomendados para uso em cobaias quando são necessárias amostras repetidas de sangue. Em seu protocolo de estudo.
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Visão Geral
Este vídeo demonstra quatro técnicas de coleta de sangue não terminal em cobaias, tanto em estado consciente quanto anestesiado. Esses métodos são cruciais para pesquisadores que trabalham com este organismo modelo, para o qual há dados procedimentais limitados disponíveis.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Ciências experimentais com animais
- Técnicas veterinárias
- Metodologias de coleta de sangue
Antecedentes
- Os porquinhos-da-índia são um modelo especializado na pesquisa experimental.
- Existem poucos dados sobre procedimentos de coleta de sangue nesta espécie.
- Técnicas não terminais são essenciais para práticas éticas de pesquisa.
- Compreender as diretrizes de coleta de sangue é fundamental para o bem-estar animal.
Objetivo do Estudo
- Ilustrar técnicas seguras e eficazes de coleta de sangue.
- Fornecer diretrizes sobre volumes máximos de amostra e frequência.
- Ampliar a base de conhecimento para pesquisadores que utilizam cobaias.
Métodos Utilizados
- Demonstração da coleta de sangue nas veias lateral ous e tarsal.
- Uso de equipamentos específicos, como agulhas estéreis e tubos de coleta.
- Recomendações sobre o volume máximo de sangue por amostra.
- Procedimentos para animais tanto conscientes quanto anestesiados.
Resultados Principais
- Demonstração bem-sucedida de quatro técnicas de coleta de sangue.
- Estabelecimento de limites seguros de volume de amostra.
- Instruções claras sobre os equipamentos e preparações necessários.
- Ênfase nas considerações éticas na coleta de sangue.
Conclusões
- As técnicas apresentadas são essenciais para pesquisas que envolvem cobaias.
- A capacitação adequada e o cumprimento das diretrizes garantem o bem-estar animal.
- Pesquisas futuras podem expandir essas metodologias.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A coleta de amostras de sangue não terminal em cobaias apoia estudos longitudinais in vivo ao permitir a coleta repetida de amostras de alta qualidade, mantendo o bem-estar animal. Essa capacidade é fundamental para avaliações pré-clínicas de farmacocinética e farmacodinâmica, nas quais a coleta seriada fornece informações sobre o engajamento do alvo e a redução de riscos mecanicistas. As técnicas abordam uma lacuna metodológica em um modelo nichado, mas clinicamente relevante, aumentando a confiabilidade dos dados em fluxos de trabalho de descoberta precoce.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite o teste de hipóteses por meio da medição serial de biomarcadores in vivo.
- Valor Operacional: Fornece acesso reprodutível a dados de exposição sistêmica para estudos de modulação de alvo.
- Valor Preditivo: Apoia a caracterização da relação dose-resposta e o fortalecimento da confiança no alvo.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Valor Científico: Gera amostras quantificáveis de plasma ou soro para leitura de ensaios.
- Valor Operacional: Padroniza o momento da coleta e o manuseio das amostras em campanhas de triagem.
- Prontidão para Ensaios: Garante volume e qualidade suficientes para fluxos de trabalho analíticos posteriores.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Continuidade Translacional: Conecta a validação de alvos na fase de descoberta com o perfil de segurança pré-clínico.
- Mitigação de Riscos: Reduz a variabilidade nas métricas de exposição por meio de amostragem padronizada.
- Relevância do Modelo: Aproveita as semelhanças fisiológicas entre o porquinho-da-índia e os seres humanos para desvio preditivo de riscos.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Esses métodos de amostragem se integram aos fluxos de trabalho da biologia de descoberta ao fornecer matrizes biológicas confiáveis para análise de vias-alvo e avaliação de compostos líderes.
- Biologia da Descoberta: Facilita a elucidação de vias por meio da medição seriada de marcadores farmacodinâmicos.
- Triagem: Permite a avaliação consistente de compostos por meio da aquisição padronizada e repetível de amostras.
- Análises: Fornece resultados quantificáveis (por exemplo, concentração, níveis de biomarcadores) para análise comparativa entre condições.
- Pesquisa Translacional: Apoia a continuidade com estudos pré-clínicos ao manter a integridade das amostras e a conformidade ética.
- Reutilização Corporativa: Estabelece uma capacidade reutilizável para estudos longitudinais com cobaias em diversos projetos.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva por meio da redução da variabilidade induzida pela amostragem e de artefatos de estresse.
- Valor Operacional: Aprimora a padronização e a escalabilidade da coleta de amostras in vivo entre diferentes instalações.
- Valor Estratégico: Melhora a qualidade das decisões de prosseguimento ou interrupção com base em dados longitudinais confiáveis.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco com base em métricas consistentes de engajamento do alvo.
Considerações sobre a Implementação
- Exige treinamento em técnica asséptica e manejo de animais para procedimentos conscientes ou anestesiados.
- Depende de equipamentos como barbeadores elétricos, banhos aquecidos e ferramentas estéreis de coleta.
- Necessita aderência às diretrizes específicas por espécie quanto ao volume sanguíneo (máximo de 100–400 µL/amostra, ≤3 amostras/pata traseira).
- Envolve considerações de adaptação quanto à acessibilidade da veia com base na linhagem, idade ou estado de saúde do animal.
- Inclui limitações práticas, como dificuldades de visualização em animais pigmentados ou obesos e a necessidade de habilidade do operador para prevenir hematoma.
