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DOI: 10.3791/51995-v
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Compreender as conformações dos antígenos de superfície viral é necessário para avaliar a neutralização de anticorpos e orientar o projeto de imunógenos vacinais eficazes. Aqui descrevemos um ensaio ELISA baseado em células que permite o estudo do reconhecimento do Env trimérico do HIV-1 expresso na superfície das células transfectadas por anticorpos anti-Env específicos.
O objetivo geral do experimento a seguir é interrogar as glicoproteínas de um envelope do HIV RIC ou a confirmação de ENV com anticorpos monoclonais. Isso é conseguido primeiro transeccionando células de adesão para expressar proteínas quiméricas HIV one E NV na superfície celular. Como segunda etapa, as células são incubadas com anticorpos monoclonais anti-ENV, que se ligam ao ENV dependendo da exposição ao epítopo.
Em seguida, um anticorpo secundário conjugado com HRP é adicionado para quantificar a interação do anticorpo por um ensaio de quimioluminescência. São obtidos resultados que mostram níveis relativos de anticorpos ligados ao VNV com base nas unidades de luz relativas adquiridas para cada um. Bem, a principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como a vinculação baseada em fatos, é que essa técnica pode ser feita com baixa quantidade de anticorpos e com alto rendimento, um pós-doutorado no laboratório realizará essa técnica.
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