Name: Diferenciação de alta eficiência de pluripotentes humanas células-tronco para Cardiomyocytes e Caracterização por citometria de fluxo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 13 s
Description: Aprenda a diferenciar células-tronco pluripotentes humanas em cardiomiocitos com alta eficiência via modulação da via Wnt. Caracterize as populações celulares por citometria de fluxo usando marcadores específicos como TNNI3 e IRX4.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Esta pesquisa foi financiado pelo NIH 4R00HL094708-03, Assuntos MCW Pesquisa Comitê Nova Faculdade Award, ea fundação Kern (fundos de inicialização) no Medical College of Wisconsin (RLG); Conselho bolsas de investigação de base-Tema Hong Kong Esquema Research T13-706 / 11 (KRB); U01 HL099776, CIRM TR3-05556, CIRM Dr2a-05394, e AHA Fundada Investigator Award (JCW); AHA pós-doutorado 12POST12050254 (PWB). Agradecemos a esperança Campbell no Citometria de Fluxo Núcleo do Instituto de Wisconsin Research sangue para obter assistência com a coleta de dados e análise criteriosa do manuscrito.

Os autores não têm nada a revelar.

Crítico para o sucesso do protocolo de diferenciação é a utilização de culturas de elevada qualidade de hPSCs que foram passadas a nível da célula individual durante pelo menos cinco passagens antes do início da diferenciação. Diferenciação eficiências semelhantes são habitualmente observado entre as várias linhas de HPSC se forem 100% confluentes no início da diferenciação, independente da linha de células. Eficácia subóptima é observado se a confluência de células no início de diferenciação é ≤95% ou&gt; 100%. Portant...

A geração de cardiomiócitos de hPSCs, incluindo células estaminais embrionárias humanas e hiPSC, pode funcionar como um modelo in vitro de processos de desenvolvimento cardíacos humanos muito antigos, fornecendo informações sobre as fases de outra forma não acessíveis para estudos mecanicistas. Este modelo de sistema fornece uma oportunidade única para estudar as vias moleculares que controlam o compromisso linhagem cardíaca e especificação destino celular. Nos últimos anos, a capacidade de gerar de forma eficiente as células cardiomiogênica de hPSCs tem melhorado muito 1-15. No entanto, entre os protocolos há uma variação de linha de células no que respeita à eficiência na geração de células cardiomiogênica e tempo em que as células expressam marcadores específicos de câmara (por exemplo, átrios e ventrículo). Idealmente, para aplicações futuras deste sistema modelo, as populações mais homogêneas de células funcionalmente definidos são desejados. Em contraste com os métodos anteriores, a diferenciação de cardiomiócitos protocolo aqui descrito não necessita cell agregação ou a adição de Activin A ou proteína morfogenética óssea 4 (BMP4) e robusta gera culturas altamente positivo para TNNI3, TNNT2, IRX4, MLC2v e MLC2a por dia 10 células em todas as linhas hESC e hiPSC testadas até o momento. A estratégia é tecnicamente simples de implementar, especialmente em comparação com culturas tridimensionais, cultura de massa, ou estratégias baseadas corpo embrióide 4-9, e recentemente foi definido em um estudo que descreve uma pequena molécula com toxicidade seletiva para hPSCs (Boheler et al. ) 65. Características deste protocolo incluem a diferenciação hPSCs em cultura em monocamada, utilizando uma única camada de uma matriz qualificado hESC (Matrigel), meios totalmente definidos, utilizando pequenas moléculas para modular a sinalização Wnt (similar, mas distinto do 1,2,7,13), e fluxo optimizado citometria de métodos de coloração para avaliação da eficiência da diferenciação e da identidade da célula. Em resumo, as vantagens deste protocolo em relação a relatórios anteriores incluem o seu custo-effectiveness, reprodutibilidade e sua alta eficiência para a geração de cardiomiócitos entre várias linhas HPSC, incluindo células estaminais embrionárias humanas e hiPSC linhas. A citometria de fluxo é uma poderosa ferramenta analítica para avaliar a qualidade das células em cultura e determinação subpopulação homogeneidade e com design experimental adequada, pode fornecer medições quantitativas. Tal como acontece com todas as estratégias baseadas em anticorpos, a interpretação precisa dos resultados experimentais exige que os elementos do desenho do ensaio, incluindo concentração de anticorpos e fixação e condições de permeabilização (quando segmentação antígenos intracelulares) são cuidadosamente testados para cada anticorpo como condições sub-ótimas afetar significativamente a eficiência de anticorpo ligação, e portanto, a interpretação dos resultados. É importante notar que se a quantificação é necessária, os anticorpos monoclonais são essenciais, tal como anticorpos policlonais podem reconhecer epitopos múltiplos e são propensos a variação de lote para lote. Actualmente, uma variedade de anticorpos (poprotocolos lyclonal e monoclonais) e de coloração têm sido descritos para a avaliação da diferenciação in vitro, o que torna difícil comparar a eficiência de cardiomyogenesis entre protocolos 1,2,9,11. Por essa razão, os anticorpos monoclonais são utilizados quando disponíveis para todas as análises de citometria de fluxo. Para o futuro, espera-se que a padronização destes protocolos de coloração, especialmente com relação à quantificação, deve permitir uma melhor comparação entre estratégias de diferenciação. A escolha dos marcadores, e os seus anticorpos correspondentes, utilizados para avaliar a pureza de cardiomyogenesis in vitro varia entre os relatórios. TNNT2 tem sido considerado um indicador das células comprometidas com o destino cardiomiogênica e é rotineiramente utilizado para avaliar a eficiência de protocolos de diferenciação cardíacos. No entanto, também é TNNT2 expresso no músculo esquelético durante o início de pinto de rato e o desenvolvimento 16,17 e está presente no músculo liso humano 18 </sup&gt;. Assim, TNNT2 não é, necessariamente, um marcador específico de cardiomyogenesis humana in vitro. MLC2v e MLC2a são rotineiramente utilizados como marcadores substitutos de subtipos ventriculares e atriais, respectivamente. No entanto, os desafios com contando com MLC2v e MLC2a para determinar o subtipo de cardiomiócitos no contexto de diferenciação in vitro surgem do fato de que estes produtos de genes não pode ser restrito a uma câmara específica ao longo do desenvolvimento cardíaco, tubo de coração através de um adulto. No roedor loop coração, MLC2a mRNA é predominante na zona do átrio / entrada trato e MLC2v mRNA é predominante nas regiões do trato ventricular / descarga. No coração loop, co-expressão de MLC2a e MLC2v mRNAs são observados na via de entrada, canal atrioventricular, e via de saída 19,20. Aos 3 dias após o nascimento, MLC2v mRNA é restrito para o ventrículo e, aos 10 dias após o nascimento, MLC2a é restrita às aurículas do coração de rato neonatal 19. Portanto, a interpretaçãode dados sobre a eficiência cardiomyogenesis e subtipo identidade não só deve considerar a presença ea quantidade de níveis de marcadores de referência, mas deve considerar o estágio (s) de desenvolvimento a que os instantes de diferenciação que são analisados ​​correspondem. Isto é especialmente importante considerando-se que a fase de maturação das células cardiomiogênica gerados pela diferenciação in vitro de hPSCs mais se assemelha aqueles do desenvolvimento embrionário / fetal 21-25. Assim, com base na expressão espacial de um marcador no coração pós-natal pode não ser apropriado para a avaliação de células HPSC derivados, pelo menos em alguns casos. Em um esforço para facilitar o desenvolvimento de critérios mais específicos para a definição da identidade de cardiomiócitos in vitro, TNNI3 é considerada um marcador importante na avaliação de cardiomyogenesis in vitro, uma vez que é restrito no músculo cardíaco durante toda a embriogênese em garota e peixe-zebra 15,20e está ausente no músculo esquelético humano fetal 26. Enquanto TNNI1 está presente no coração fetal humano, TNNI3 é a única isoforma presente TNNI no coração adulto normal 27,28. Quanto cardiomiócitos subtipo identidade, IRX4 29-31 é um marcador informativo de células com um destino ventricular. Ao nível da proteína, IRX4 foi recentemente mostrado para ser restringida ao ventrículo do coração do tubo linear através de estágios neonatais do rato 32. Por conseguinte, os protocolos de coloração optimizados para a análise de TNNI3 IRX4 e por citometria de fluxo encontram-se descritos. Para nosso conhecimento, esta é a primeira descrição de um método para a coloração com anticorpos e análise eficiente dos níveis IRX4 em cardiomiócitos humanos, por citometria de fluxo.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Cell Culture</td></tr><tr><td>BD Matrigel, matriz qualificada por hESC</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>Solução de descolamento de células Accutase</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS), sem cálcio, sem magnésio</td><td>Life Technologies</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO, Hybri-Max, filtrado estéril)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>53817</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2404-100G</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 dicloridrato seletivo p160ROCK inibidor</td><td>R & D Systems</td><td>1254</td><td></td></tr><tr><td>Ácido L-ascórbico-2-fosfato sesquimagnésio sal hidratado</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A8960-5G</td><td></td></tr><tr><td>Selenito de sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5261-10G</td><td></td></tr><tr><td>Transferrina (Optiferrin &ndash; Definido, sem animais, humano recombinante)</td><td>Invitria</td><td>777TRF029</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento de fibroblastos 2 (FGF2)</td><td>R& D Systems</td><td>4144-TC-01M</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento transformador beta 1 (TGF&beta; 1)</td> <td>Peprotech</td><td>100-21</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12 com L-Glutamina e 15 mM HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>11330-032</td><td></td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>CHIR-99021 HCl</td><td>Sellekchem</td><td>S2924</td><td></td></tr><tr><td>IWR-1</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I0161</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 com L-Glutamina</td><td>Life Technologies</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento B-27 Menos Insulina</td><td>Life Technologies</td><td>A1895601</td><td></td></tr><tr><td>Suplemento B-27 (com Insulina)</td><td>Life Technologies</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino</td><td>Life Technologies</td><td>10437</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Reagentes de Citometria de Fluxo</td></tr><tr><td>Phosphate tampoed salino (10x)</td><td>Quality Biological Inc.</td><td>119-069-151</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina balanceada de Hank sem Ca2+ e Mg2+</td><td>Life Technologies</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>BD Cytofix</td><td>BD Biosciences</td><td>554655</td><td></td></tr><tr><td>BD Tampão de perm de fluxo de fosso III</td><td>BD Biosciences</td><td>558050</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldeído</td><td>Thermo Scientific</td><td>28906</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>179957-4L</td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td>Mallenckrodt Chemicals&nbsp;</td><td>2440-16</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Amresco</td><td>M236-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Soro de cabra</td><td>Life Technologies</td><td>16210-064</td><td></td></tr><tr><td>Solução azul de tripano, 0,4%</td><td>Life Technologies</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Materiais</td></tr><tr><td>5 ml Tubo de poliestireno de fundo redondo (sem tampa)</td><td>Corning</td><td>352008</td><td>Para preparação de para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>5 ml Tubo de poliestireno de fundo redondo (com 35 &micro; Tampa de pressão do filtro de células M)</td><td>Corning</td><td>352235</td><td>Para preparação de células para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Bulbos de borracha de 2 ml</td><td>Fischer Scientific</td><td>03-448-24</td><td></td></tr> 9<tr><td>" borosilicato de vidro desconectado Pasteur pipetas</td><td>BioExpress</td><td>P-2904-2</td><td></td></tr><tr><td>0,65 ml Tubos de microcentrífuga, graduados, verdes</td><td>GeneMate</td><td>C-3259-G</td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Tubos de microcentrífuga, graduados, vermelho</td><td>GeneMate</td><td>C-3260-R</td><td></td></tr><tr><td>TC20 contador de células automatizado</td><td>BioRad</td><td>145-0102</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de contagem para TC20</td><td>BioRad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>6 poços de fundo plano placa tratada para cultura de tecidos</td><td>Corning</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Seringas</td><td>BD Plastipak</td><td>300613</td><td>Para esterilização por filtro de alíquotas</td></tr><tr><td>Filtros de seringa estéreis, 0,2 &micro; m polietersulfona</td><td>VWR</td><td>28145-501</td><td>Para esterilização por filtro de alíquotas</td></tr><tr><td>250 ml Sistema de filtro, 0,22 &micro; m polietersulfona, esterilizante, baixa ligação</td><td>Corning</td><td>431096</td><td>Para esterilização por filtro de mídia a granel&nbsp;</td></tr><tr><td>Sistema de filtro de 500 ml, 0,22 &micro; m polietersulfona, esterilizante, de baixa ligação</td><td>Corning</td><td>431097</td><td>Para esterilização por filtro de meios</td></tr><tr> a granel<td colspan="4">Anticorpos e controles de isotipo</td></tr><tr><td>Anti-TNNI3 (clone: 284 (19C7))Abcam</td><td></td> <td>ab19615</td><td>Anticorpo primário</td></tr><tr><td>Anti-TNNT2 (clone: 1C11)</td><td>Thermo Scientific</td><td>MA1-16687</td><td>Anticorpo primário</td></tr><tr><td>Anti-MYL2 (MLC2v, clone: 330G5)</td><td>Sistemas Sinápticos</td><td>310111</td><td>Anticorpo primário</td></tr><tr><td>Anti-MYL7 (MLC2a, clone: 4E7)</td><td>Abcam</td><td>AB131661</td><td>Anticorpo primário</td></tr><tr><td>Anti-IRX4&nbsp; &nbsp;</td><td>Bioss</td><td>BS-9464R</td><td>Anticorpo primário</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Cabra anti-camundongo IgG1&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>A21121</td><td>Anticorpo secundário</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Cabra anti-camundongo IgG2a</td><td>Life Technologies</td><td>A21241</td><td>Anticorpo secundário</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Cabra anti-camundongo IgG2b</td><td>Life Technologies</td><td>A21141</td><td>Anticorpo secundário</td></tr><tr><td>Ficoeritrina (PE) Cabra anti-coelho IgG R</td><td>& D Systems</td><td>F0110</td><td>Anticorpo secundário</td></tr><tr><td>Camundongo IgG1</td><td>BD Biosciences</td><td>557273</td><td>Controle de Isotipo</td></tr><tr><td>Camundongo IgG2a</td><td>eBiosciences</td><td>16-4724-81</td><td>Controle de Isotipo</td></tr><tr><td>Coelho IgG-PE</td><td>R& D Systems</td><td>IC105P</td><td>Controle de</td></tr><tr> Isotipo<td colspan="4">TaqMan Probesets para qRT-PCR</td></tr><tr><td>ACTB</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01060665</td><td></td></tr><tr><td>Brachyury T</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00610080</td><td></td></tr><tr><td>CASQ2</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00154286</td><td></td></tr><tr><td>IRX4</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01100809</td><td></td></tr><tr><td>ISL1</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00158126</td><td></td></tr><tr><td>MESP1</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01001283</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (SMMHC)</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00224610</td><td></td></tr><tr><td>MYH6</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01101425</td><td></td></tr><tr><td>MYL2 (MLC2v)</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00166405</td><td></td></tr><tr><td>MYL7 (MLC2a)</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01085598</td><td></td></tr><tr><td>MYOG</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01072232</td><td></td></tr><tr><td>NKX2.5</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00231763</td><td></td></tr><tr><td>NPPA</td><td>Life Technologies</td><td>Hs01081097</td><td></td></tr><tr><td>POU5F1</td><td>Life Technologies</td><td>Hs04260367</td><td></td></tr><tr><td>SOX17</td><td>Life Technologies</td><td>HS00751752</td><td></td></tr><tr><td>TNNI1</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00913333</td><td></td></tr><tr><td>TNNI2</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00268536</td><td></td></tr><tr><td>TNNI3</td><td>Life Technologies</td><td>HS00165957</td><td></td></tr><tr><td>TNNT2</td><td>Life Technologies</td><td>Hs00165960</td><td></td></tr></tbody></table>

diferenciação de alta eficiência de pluripotentes humanas células-tronco para cardiomyocytes e caracterização por citometria de fluxo

High Efficiency Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells to Cardiomyocytes and Characterization by Flow Cytometry

Há uma necessidade urgente de desenvolver abordagens para reparar o coração danificado, descobrir novas drogas terapêuticas que não têm efeitos tóxicos no coração, e melhorar as estratégias de modelar com precisão a doença cardíaca. O potencial de exploração da tecnologia humana célula-tronco pluripotentes induzidas (hiPSC) para gerar músculo cardíaco &quot;em um prato&quot; para estas aplicações continua a gerar grande entusiasmo. Nos últimos anos, a capacidade de gerar de forma eficiente as células cardiomiogênica a partir de células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) tem melhorado muito, nos oferecendo novas oportunidades para modelar estágios muito iniciais de desenvolvimento cardíaco humano não acessíveis de outra forma. Em contraste com muitos métodos anteriores, o protocolo de diferenciação de cardiomiócitos aqui descrito não requer a agregação de células, ou a adição de Activina A ou BMP4 e robustamente gera culturas de células que são altamente positivo para a troponina I cardíaca e T (TNNI3, TNNT2), iroquois- proteína classe homeodomínioIRX-4 (IRX4), miosina regulatória de cadeia leve 2, isoforma muscular ventricular / cardíaco (MLC2v) e miosina regulatória de cadeia leve 2, isoforma atrial (MLC2a) por 10 dias em todas células estaminais embrionárias humanas (hESC) e linhas hiPSC testado para data. As células podem ser passadas e mantida por mais de 90 dias em cultura. A estratégia é tecnicamente simples de implementar e de baixo custo. Caracterização de cardiomiócitos derivados de células pluripotentes inclui muitas vezes a análise de marcadores de referência, tanto ao nível do mRNA e de proteínas. Para a análise de proteínas, a citometria de fluxo é uma poderosa ferramenta analítica para avaliar a qualidade das células na cultura e a determinação subpopulação homogeneidade. No entanto, a variação técnica na preparação da amostra pode afetar significativamente a qualidade de citometria de fluxo de dados. Assim, a padronização de protocolos de coloração deve facilitar as comparações entre as várias estratégias de diferenciação. Deste modo, optimizado para protocolos de coloração para a análise de IRX4, MLC2v, MLC2a, TNNI3, e TNNT2 por citometria de fluxo encontram-se descritos.

No dia 0, as células são 100% confluentes com morfologia compacta e os detritos celulares mínima. Nos dias 1-2, é comum observar-se morte celular significativa (40-50%), mas as células anexadas reterá morfologia compacto (Figura 1A). Durante este tempo, a mídia é laranja e turva. Meios-de-rosa indica morte excessiva de células, e, neste caso, confirmar com azul de tripan e interromper se a morte celular superior a 70%. As células irão recuperar durante 3-4 dias e vai aumentar a densidade. Durante os dia...

O artigo descreve a metodologia detalhada para diferenciar de forma eficiente as células estaminais pluripotentes em cardiomiócitos de modular selectivamente a via Wnt, seguido por análise de citometria de fluxo de marcadores de referência para avaliar a homogeneidade e a identidade da população.

Diferenciação de alta eficiência de pluripotentes humanas células-tronco para Cardiomyocytes e Caracterização por citometria de fluxo

There is an urgent need to develop approaches for repairing the damaged heart, discovering new therapeutic drugs that do not have toxic effects on the ...

O objetivo geral deste procedimento é gerar culturas de cardiomiócitos de alta qualidade a partir de células-tronco pluripotentes e caracterizar adequadamente o produto final usando citometria de fluxo. Para conseguir isso, são geradas culturas de monocamada de alta qualidade de células-tronco pluripotentes indiferenciadas. A cardiomiogênese é então induzida pela modulação da via do vento usando pequenas moléculas.Em seguida, os cardiomiócitos são fixados, permeados e corados usando condições especificamente otimizadas para cada anticorpo. Finalmente, as células são analisadas por citometria de fluxo. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram culturas altamente positivas para marcadores cardíacos, TNNI três e IRX quatro e demonstram potenciais de ação ventriculares.A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como os de funcionários e corpos de tranças, é que ela é relativamente simples de implementar e econômica. Além disso, a técnica gera culturas de células altamente positivas por troponina cardíaca I. Sem a variação subjacente interna e a eficiência observada por outros protocolos, a demonstração visual do método é crítica, pois a qualidade

high-efficiency-differentiation-human-pluripotent-stem-cells-to

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Nós estabelecemos um protocolo para indução de cardioblasts direta de pluripotentes células estaminais embrionárias humanas mantidas sob condições definidas com pequenas moléculas, que permite a derivação de uma grande oferta de recursos humanos progenitores cardíaca e funcional cardiovascular cardiomiócitos para reparação.

Derivação eficiente dos recursos humanos Precursores cardíaca e Cardiomyocytes pluripotentes a partir de células estaminais embrionárias humanas com a indução de moléculas pequenas

Células-tronco pluripotentes, tanto as células-tronco embrionárias ou pluripotentes induzidas (iPS), constituem uma valiosa fonte de células diferenciadas humanos, incluindo os cardiomiócitos. Aqui, vamos nos concentrar na indução cardíaco de células iPS, mostrando como usá-los para obter os cardiomiócitos humanos funcionais através de um protocolo de corpos baseada embryoid.

Geração de cardiomiócitos Humanos: Um Protocolo de Diferenciação de Feeder livres Humanos células-tronco pluripotentes induzidas

Aqui, descrevemos um protocolo robusto para derivação de cardiomiócitos humanos que combina diferenciação cardíaca modulada por pequenas moléculas e purificação de cardiomiócitos mediada por privação de glicose, permitindo a produção de cardiomiócitos purificados para fins de modelagem de doenças cardiovasculares e triagem de drogas.

Derivação de Cardiomyocytes altamente purificada de induzidas pelo homem pluripotentes células estaminais usando pequenos Diferenciação modulada-Molecule e Subsequente Glucose Fome

Aqui, apresentamos um protocolo robusto, rápido e escalável de diferenciação de cardiomiócitos para células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs). Os cardiomiócitos derivados usando este método em larga escala podem fornecer números de células suficientes para seu uso efetivo na modelagem de doenças cardiovasculares humanas, triagem de medicamentos de alto rendimento e aplicações potencialmente clínicas.

Produção em larga escala de cardiomiócitos a partir de células-tronco pluripotentes humanas utilizando um altamente reprodutível pequeno-Based Molecule Protocolo de Diferenciação

Apresentamos três protocolos de novos e mais eficientes para a diferenciação de células estaminais pluripotentes humanas induzida em cardiomiócitos, células endoteliais, e células do músculo liso e um método de entrega que melhora o enxerto de células transplantadas através da combinação de injecção das células com citocinas entrega mediada por remendo.

Pluripotentes Stem Cell Derivado células cardíacas para reparo do miocárdio

A caracterização eletrofisiológica de cardiomiócitos derivados de células-tronco pluripotentes humanas (hPSC-CMs) é crucial para a modelagem de doenças cardíacas e para a determinação de respostas de fármacos. Este protocolo fornece as informações necessárias para dissociar e plaquear hPSC-CMs em matrizes de múltiplos eléctrodos, medir o seu potencial de campo e um método para analisar os intervalos QT e RR.

Análise eletrofisiológica de cardiomiócitos humanos derivados de células-tronco pluripotentes (hPSC-CMs) usando matrizes de múltiplos eletrodos (MEAs)

Aqui, apresentamos um método para eficientemente aproveitar o potencial de diferenciação cardíaca da jovens fontes de células-tronco mesenquimais humanas a fim de gerar células funcionais, contratantes, casos, como in vitro.

In Vitro Diferenciação de células-tronco mesenquimais humanas em células casos funcionais

Este artigo contem um jogo dos protocolos para o desenvolvimento de redes pluripotentes induzidas humanas do cardiomiócito (hipsc-cm) cultivadas em placas de de mea para electroporate reversivelmente a membrana de pilha para medidas do potencial da ação. Gravações de alta taxa de transferência são obtidas dos mesmos sites de célula repetidamente ao longo dos dias.

Redes humanas de cardiomiócitos derivadas de iPSC em matrizes de microeletrodos Multipoços para gravações em potencial de ação recorrente

Aqui descrevemos e validamos um método para gerar consistentemente cardiomiócitos pluripotentes derivados de células-tronco induzidas por humanos robustos e caracterizar sua função. Essas técnicas podem ajudar no desenvolvimento de insights mecanicistas sobre as vias de sinalização, fornecer uma plataforma para o rastreamento de medicamentos em larga escala e doenças cardíacas de modelo confiável.

Geração de cardiomiócitos derivados de HiPSC semelhantes ao Ventricular e preparações celulares de alta qualidade para caracterização de manuseio de cálcio

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar e expandir robustamente os cardiomiócitos humanos a partir de células mononucleares de sangue periféricos do paciente.

Geração e Expansão de Cardiomiócitos Humanos a partir de células mononucleares de sangue periféricos do paciente

Um método reprodutível é apresentado para gerar tecidos miocárdicos 3D combinando scaffolds de escrita eletrospinning (MEW), policaprolactona (PCL) e hidrogéis de fibrina com cardiomiócitos e fibroblastos derivados de hiPSC. Essa técnica oferece controle preciso sobre a arquitetura do andaime e pode ser aplicada em testes pré-clínicos de medicamentos e modelagem de doenças cardíacas.

Geração de tecido miocárdico humano 3D usando escrita eletrogiratória por fusão de andaimes de policaprolactona e células cardíacas derivadas de hiPSC

Aprenda a diferenciar células-tronco pluripotentes humanas em cardiomiocitos com alta eficiência via modulação da via Wnt. Caracterize as populações celulares por citometria de fluxo usando marcadores específicos como TNNI3 e IRX4.

Diferenciação de alta eficiência de pluripotentes humanas células-tronco para Cardiomyocytes e Caracterização por citometria de fluxo (Vídeo) | JoVE Journal

Diferenciação de alta eficiência de pluripotentes humanas células-tronco para Cardiomyocytes e Caracterização por citometria de fluxo

Explorar mais vídeos