Ensaio simples para Quantificação de Prevenção Social Drosophila melanogaster

O objetivo deste procedimento é quantificar a resposta das moscas ao sinal social emitido por indivíduos estressados. Isso é feito pela primeira coleta, resposta e emissão de moscas não mais do que dois dias antes do experimento. O segundo passo é transferir as moscas emissoras e respondedoras para frascos novos duas horas antes do experimento e deixá-las se habituar à sala ambientalmente controlada onde o ensaio será realizado.

Em seguida, as moscas respondedoras são colocadas nos TMAs e dada a escolha entre um frasco no qual as moscas foram previamente estressadas, contendo assim o odorante de estresse da drosófila e um frasco fresco, a etapa final é contar o número de moscas respondedoras no frasco fresco no frasco DSO e no elevador para quantificar sua resposta ao DSO. Em última análise, o labirinto em T é usado para medir a evitação por moscas de um sinal de estresse social, especificamente o odorante de estresse gilo. Tive a ideia desse método pela primeira vez quando era pós-doutorado na Caltech.

Naquela época, Greg Sue e seu orientador de pós-doutorado David Anderson estavam estudando o medo ou a evitação social em Phyla, mas não havia nenhum ensaio existente para isso. Eles se aproximaram de mim porque eu estava realizando muitos ensaios de comportamento no laboratório da S brands e, enquanto realizava experimentos de fototáxi e aprendizado olfativo, notei que as moscas eram atraídas por frascos nos quais outras moscas haviam passado algum tempo sem serem perturbadas, evitando frascos nos quais as moscas haviam sido estressadas naquele momento com um choque elétrico. Bispo. A demonstração desse método é crítica, pois o processo experimental do ensaio de evitação social requer alguma prática para ser rápido e eficiente na transferência do bios sem perder moscas ou DSL.

A principal vantagem dessa técnica para examinar as interações sociais em relação aos métodos existentes, como rastreamento de vídeo assistido por computador, é que este é um ensaio fácil de dominar e implementar, mas é muito poderoso para quantificar a evitação social de indivíduos estressados. Para iniciar o experimento, corte uma folha de polietileno poroso para cobrir uma caixa de 12,7 centímetros por 10,2 centímetros. Encha a caixa com gelo picado e cubra-a com a folha para completar o aparelho de anestesia fria da drosófila.

Realize o experimento em uma bancada coberta com uma capa de bancada branca e um quadro branco na frente para garantir condições de iluminação homogêneas. Em seguida, prepare o aparelho de aspiradores de vórtice, o termômetro e o cronômetro. Um a dois dias antes do experimento, o cólon anestesia as moscas.

Transfira as moscas com um funil para um tubo de 50 mililitros e coloque o tubo em um balde de gelo isolado sob o nível do gelo. Espere cinco minutos para que as moscas entrem em coma frio. Em seguida, transfira as moscas para a folha de polietileno poroso à temperatura ambiente e separe as moscas respondedoras sob um microscópio estéreo.

Separe as moscas machos de três a sete dias das moscas fêmeas e mantenha essas moscas em um grupo de 40 moscas emissoras de Canton de sexo misto. Usando um aspirador de boca, permita que as moscas. Uma noite de recuperação para minimizar qualquer efeito de confusão da coleta no comportamento.

Em seguida, abra o saco de frascos de teste para substituir o ar com cheiro de plástico velho no saco por ar fresco. Antes do experimento, certifique-se de que a temperatura da sala de teste esteja em 25 graus Celsius, que a sala tenha luz uniforme e que a umidade seja superior a 30%Duas horas antes do experimento, transfira as moscas respondentes e emissoras para frascos de alimentos frescos e permita que as moscas se ajustem ao ambiente na bancada onde o experimento será realizado. Coloque o labirinto de chá na almofada de martelar e aperte o clipe do parafuso para que o elevador fique estável.

Em seguida, transfira as moscas respondedoras para um frasco de teste novo e encaixe o frasco contendo as moscas respondedoras em cima do labirinto de chá. Em seguida, incline o aparelho do labirinto de chá e bata-o no tapete para que as moscas da fruta caiam no elevador. Mova a parte superior do elevador para baixo para colocar as moscas entre as seções superior e inferior dos TMAs e certifique-se de que o elevador esteja acima do ponto de escolha para evitar que as moscas escapem enquanto as moscas respondentes estão se ajustando ao novo ambiente.

Coloque as moscas emissoras em um frasco de teste novo e cubra-o com um pedaço de algodão. Agite o frasco para injetáveis num mini vórtice desta forma. As moscas emitirão DSO, transferirão as moscas para um frasco de comida e colocarão rapidamente o frasco cheio de DSO em um dos dois lados da equipe.

Um lado alternativo de colocação para o frasco cheio de DSO. Em cada nova corrida, coloque um frasco de teste fresco do outro lado da equipe A e, em seguida, abaixe completamente o elevador para que as moscas da fruta possam escolher entre o frasco de teste fresco e o frasco cheio de DSO. Inicie imediatamente o cronômetro.

Após um minuto, mova o elevador para cima para separar as moscas no frasco fresco e o frasco DSO das moscas presas no elevador. Conte o número de moscas em cada frasco e no elevador. Repita isso.

Para cada genótipo e/ou grupo de condições, o tamanho das moscas respondedoras não influencia sua evitação de DSO. Depois de realizar o experimento em uma faixa de 10 a 80 moscas, um teste T não mostrou significância estatística entre os índices de desempenho ou PIs das moscas respondedoras. O número de moscas emissoras afeta a evitação de moscas de DSO, conforme demonstrado por este gráfico, que representa diferentes ensaios.

Usando 10 a 160 moscas emissoras cada. Uma evitação substancial ainda foi detectada com apenas 10 moscas estressadas. A escolha, o tempo e o histórico genético das moscas-das-frutas afetam a resposta ao DSO, conforme demonstrado por este gráfico, que ilustra a resposta das cepas de Canton e Elwood.

Ambos os genótipos exibem uma evitação mais forte do DSO do que Oregon e algumas cepas de markin após seu desenvolvimento. Essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da neurociência identificarem o circuito neurológico subjacente à percepção e evitação do CO2, um dos componentes do DSO. Também tem sido usado para estudar o papel dos genes candidatos ao autismo em afetar o comportamento social.

Em Joseph Ano Gaster. Uma vez dominada, essa técnica pode ser executada em menos de cinco minutos por repetição. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como conduzir um ensaio de evitação social desde a preparação do emissor e das moscas respondentes antes de testá-las até a geração dos BIOS de campo DSL e a manipulação dos companheiros de equipe para fornecer aos respondentes uma escolha binária.