Isolando e com cortes de bovinos artéria e veia mesentérica como Bioassay teste para vasoactividade no intestino delgado

O objetivo geral deste procedimento é isolar seções transversais de artérias e veias mesentéricas bovinas em um gráfico multim para permitir a triagem de compostos experimentais quanto à sua atividade vaso. Isso é feito coletando primeiro uma amostra de tecido mesentérico do animal. Na segunda etapa, a amostra é limpa e os vasos são seccionados.

Em seguida, as seções são montadas e equilibradas no mioenxerto. Na etapa final, os vasos isolados são expostos aos compostos de interesse. Em última análise, este bioensaio de artéria e veia pode ser usado para avaliar a atividade vaso dos compostos e os efeitos que eles têm no fluxo sanguíneo dentro dos vasos sanguíneos mesentéricos bovinos.

A principal vantagem dessa técnica em comparação com os métodos existentes, como medir o fluxo sanguíneo in vivo, é que, com essa técnica, o tecido de um único animal pode ser exposto a vários compostos simultaneamente. Embora este método possa fornecer informações sobre síndromes animais muito específicas que podem causar vasoconstrição, como festuca, toxicose ou ergotismo, ele também pode ser aplicado a outros cenários que podem ser de interesse para os pesquisadores, como produtos farmacêuticos que estão sendo desenvolvidos ou produtos naturais. Além disso, também pode ser aplicado não apenas à vasculatura do gado, mas também à vasculatura de qualquer outra espécie de mamífero.

Depois de remover os vasos sanguíneos do tecido mesentérico, use uma pinça para colocar a amostra de tecido em uma superfície de corte e mergulhe-a parcialmente em tampão aite de galinhas henzel crebs geladas. Em seguida, usando joalheiros número cinco, fórceps e ruído, a tesoura Iris disseca cuidadosamente a gordura e os tecidos conjuntivos ao redor dos vasos. Depois de separar a artéria e a veia, identifique a abertura do vaso em uma extremidade da seção e segure cuidadosamente a fáscia ao redor do vaso com a pinça.

Em seguida, deslize a ponta da tesoura por baixo da fáscia elevada para fazer um corte com a tesoura paralela ao vaso. Após a incisão inicial, corte os dois lados do vaso para separar ainda mais a gordura e os tecidos conjuntivos e limpar o vaso. Coloque os vasos sanguíneos limpos em um tubo novo de tampão leve Krebs Henzel e armazene o tubo a quatro graus Celsius por até 24 horas.

Quando estiver pronto, use um cortador de tecido para obter seções transversais consistentes do vaso de interesse no número desejado de seções de dois milímetros e, em seguida, examine cada seção com uma ampliação de 12,5 x para garantir que cada amostra não tenha anormalidades, ramificações, válvulas ou danos superficiais adquiridos durante o processo de dissecção e limpeza. Armazene as seções aceitáveis do recipiente fatiado submersas em tampão de luz Krebs Henzel a quatro graus Celsius por até 30 minutos. Em seguida, insira suavemente os suportes através do lúmen de cada amostra e use o micro posicionador no mioenxerto para aumentar gradualmente a tensão para montar o vaso no mioenxerto.

Tomando cuidado para não esticar os vasos acima de uma leitura de dois a três gramas. Quando todas as câmaras estiverem cobertas, aspire o tampão de cada câmara e encha-as novamente com cinco mililitros de tampão novo. Depois que todas as seções do vaso se equilibraram por 1,5 horas para atingir uma tensão de repouso estável de um grama a 500 microlitros de cloreto de potássio 1,32 molar até uma concentração final de 0,12 molar para a solução de 5,5 mililitros, banhando o vaso.

Não ajuste a tensão manualmente, pois a resposta máxima ao cloreto de potássio será usada para normalizar os dados do tratamento, substitua a solução por tampão leve Krebs Henzel fresco em intervalos de 15 minutos até que a tensão retorne ao valor basal de um grama. Uma vez que a tensão tenha retornado à linha de base, adicione os padrões em alíquotas de 25 microlitros a cada câmara de acordo com o protocolo experimental. Quando o último padrão for adicionado, inicie um cronômetro de nove minutos.

No final da incubação, remova o tratamento contendo tampão das câmaras e adicione cinco mililitros de tampão fresco a cada câmara. Em seguida, inicie um cronômetro de 2,5 minutos após a conclusão, repita este enxágue de 2,5 minutos. Uma segunda vez no final do segundo enxágue, aspire as câmaras.

Então, depois de adicionar um novo buffer mais uma vez, inicie um cronômetro de um minuto para fazer a contagem regressiva para o início da segunda edição padrão. Como observado nos períodos de incubação de nove minutos ilustrados aqui, há aumentos incrementais na resposta aos padrões que, com o aumento das concentrações do tratamento, a adição de cloreto de potássio na conclusão do experimento é essencial, pois confirma a viabilidade do tecido. Este bioensaio pode ser usado para avaliar a atividade vaso dos compostos experimentais nos vasos sanguíneos que fornecem nutrientes ao intestino delgado, bem como nos vasos sanguíneos que transportam os nutrientes absorvidos.

Por exemplo, neste experimento, não foi observada diferença nas respostas contráteis arteriais ou venosas após o tratamento com cinco hidroxitriptaminas. Por outro lado, a resposta contrátil da veia mesentérica ao aumento das concentrações de norepinefrina foi maior do que a da artéria mesentérica. Seguindo esse procedimento, o método pode ser modificado para incluir agonistas ou antagonistas no tampão que sejam de interesse específico para o pesquisador.

Isso permitiria ao pesquisador entender melhor o envolvimento de receptores muito específicos e os mecanismos por trás das respostas vasculares observadas durante o experimento myo. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter um bom entendimento sobre como coletar, processar e isolar vasos sanguíneos. Para um meu experimento.