Baseada Reporter ensaio de crescimento para análise sistemática de degradação de proteínas

O objetivo geral deste procedimento é determinar as variações nas taxas de degradação de proteínas de forma sistemática, acoplando-as à cinética de crescimento de leveduras em cultura líquida. Isso é feito primeiro cultivando células expressando uma proteína repórter composta por um sinal de degradação acoplado a um marcador metabólico durante a noite até a fase estacionária em um meio seletivo adequado. Em seguida, a densidade óptica das células é medida para determinar a cinética de crescimento das células e, em seguida, o tempo mínimo de duplicação das células durante a fase logarítmica é calculado a partir da cinética de crescimento usando um programa de software designado.

Em última análise, o tempo mínimo de duplicação calculado pode ser usado para definir variações na cinética de degradação da proteína. As principais vantagens desta técnica sobre os métodos existentes, como ciclamato ou ensaios de degradação de perseguição de pulso, acrescentaram que nossa técnica é simples de configurar. A aquisição e análise de dados são diretas e o design do ensaio é extremamente modular.