Name: Aproveitando-se de Redução Interação gota-superfície para otimizar o transporte de Bioanalytes em microfluídica Digital (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Aprenda a fabricar dispositivos de desumidificação por campo para transporte de bioanálitos sem aditivos em microfluídica digital. Este método utiliza fuligem de vela e polímeros fluorados para otimizar a manipulação de gotículas.

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Agradecemos à Fundação Lindback de apoio financeiro, e Dr. Alexandre Sidorenko e Elza Chu para discussões frutíferas e assistência técnica, eo professor Robert Smith para a assistência com o C. Os ensaios de elegans.

NOTA: Nos procedimentos descritos a seguir, as diretrizes de segurança do laboratório deve ser sempre seguido. De particular importância é a segurança quando se lida com alta voltagem (&gt; 500 V) e de manuseamento de produtos químicos. 1. revestimento de um substrato condutor com vela Fuligem <ol><li> Cobre corte de metal em retângulos (75 x 43 mm, 0,5 mm de espessura). Limpe cada substrato de cobre por imersão em etchant cobre por cerca de 30 segundos, lavar com água corrente por cerca de 20 segundos, e seque com papel. NOTA: Se estiver usando o método 1 a seguir, alterar as dimensões de 75 x 25 mm para caber na máquina. </li><li> Varrer uma vela de parafina iluminada sob o substrato de cobre durante 30-45 segundos, para se obter um revestimento de fuligem aproximadamente uniforme (cerca de 40 um de espessura). Mantenha o substrato em ~ 1 cm para dentro da chama. Não toque na superfície fuligem frágil. </li></ol> 2. Proteger a camada de fuligem com Revestimento NOTA: A camada de fuligem é muito frágil, E devem ser revestidos para protecção. Duas alternativas simples (métodos 1 e 2 abaixo) são sugeridos aqui, mas protocolos mais robustos estão atualmente em desenvolvimento. <ol><li> Método 1 <ol><li> Coloque a amostra para o evaporador de metal ou de sistema de pulverização. Seguindo os procedimentos de funcionamento do sistema, evacuar a câmara, e começar a deposição controlada de ouro sobre a camada de fuligem (150-200 nm). Deixe o dispositivo de arrefecer até à temperatura ambiente. </li><li> Dip-revestir o substrato metalizado em uma solução de 1-dodecanotiol (1% v / v, em etanol a 95%, ACS / grau USP), durante 10 minutos dentro de uma capa química. Então, segurando o aparelho em um ângulo perto de 60 °, lavar cuidadosamente a superfície com várias gotas de etanol só. Deixe os dispositivos seca, durante a noite. </li></ol></li><li> Método 2 <ol><li> Em uma capa de química, imediatamente depois do revestimento do substrato com a fuligem e ao mesmo tempo o substrato ainda está quente da chama da vela, depositar algumas gotas de líquido fluorado sobre um lado dosubstrato, e inclinar o substrato a um ângulo próximo de 90 °. Deposite mais gotas, e deixá-los rolar sobre a superfície inteira fuligem. NOTA: Quando a gota cai em um ponto, a fuligem serão lavados daquela área. Deixe as gotículas de líquido propagação fluorado, tanto quanto possível. </li><li> Asse o substrato sobre uma placa quente (160 ° C durante 15 min) no interior de uma capa química. </li><li> Deixe o substrato se sentar durante a noite à temperatura ambiente antes do uso. Armazenar indefinidamente. </li></ol></li></ol> (12 Adaptado de Abdelgawad et al.) 3. Fabricação de Top Eletrodos <ol><li> Desenhe os eletrodos utilizando software de design gráfico. Cada eletrodo é de 2 mm de comprimento, 0,3 mm de largura, ea diferença entre os eletrodos é de 0,3 mm. A diferença entre contatos (para encaixar no conector, veja abaixo) é de 2,3 mm (Figura 1). </li><li> Apare um laminado de cobre flexível (35 mm de espessura) para o formato Monarch (3,87 x 7,5 polegadas). Use outros tamanhos if compatível com a impressora. Coloque o laminado na bandeja de alimentação manual de uma impressora colorida. </li><li> Certifique-se de usar o &quot;preto rico&quot;, ou &quot;Registro de preto&quot;, ao imprimir na folha de cobre (ver 12 Abdelgawad et al. Para mais detalhes) para permitir que uma camada mais densa de tinta preta sobre o substrato de cobre, protegendo o padrão impresso durante gravura . Deixe o substrato seco impresso completamente, durante a noite. </li><li> Dentro de uma capa química, aquecer (40 ° C) num copo com 50 ml de produto corrosivo de cobre. Mergulhe o laminado impresso no copo e agite-o na solução por cerca de 10 min. Tempo de condicionamento depende da solução de produto corrosivo de cobre. A cada poucos minutos, verifique a corrosão e ver se o padrão está intacta. </li><li> Cuidadosamente lavar o laminado com água, e remover o revestimento com acetona e etanol na capa química. Lavar uma vez, e seca suavemente com a toalha de papel laminado. </li><li> Cuidadosamente anexar o laminado com eletrodos a uma ABLslides ss (75 x 25 mm, ~ 1 mm de espessura), usando fita dupla face. Evite bolsas de ar. </li><li> Anexar um filme de perfluoroalcoxi PFA aos eletrodos utilizando fita. Isso serve para evitar o contato acidental dos eletrodos com a gota, o que prejudica top eletrodos devido a curto-circuito. </li></ol> 4. A interface eletrônica (circuito na Figura 2) <ol><li> Soldar os relés e os capacitores C a uma placa de circuito universal. </li><li> Monte o restante dos 10 pilotos de revezamento em uma placa de ensaio sem solda para circuitos eletrônicos. </li><li> Fio de entrada de cada motorista relé para um canal na placa de controle. </li><li> Tirar com cuidado os melhores eletrodos em um conector (Figura 3). Fio condutor de saída de cada retransmissão a um eléctrodo de topo, como mostrado na figura. Note que existe um contato do conector aterrado entre um par de fios de relés, para minimizar o ruído elétrico. NOTA: O conector fica em uma plataforma ajustável para controlar tele distância (0,1-0,5 mm) entre o substrato superior e inferior (fuligem-revestido). </li><li> Utilizar um programa para controlar a temporização para a aplicação de alta voltagem (HV) (cerca de 0,8 seg) para quatro eléctrodos, ao mesmo tempo, deslocando um eléctrodo na direcção de movimento (ou seja, durante 0,8 seg, accionar 1234; em seguida, 2345, 3456, etc. ., 0,8 segundos para cada grupo, e depois para trás, move-se de forma de gotículas na direcção oposta, como bem). </li></ol> 5. Visualização Gota e Manuseio <ol><li> Para gravar gotícula de movimento, utilizar o sistema de visualização, o qual é composto por uma 24X - montagem de ampliação 96X combinado com uma câmara CCD. Ligue o gravador de vídeo para a câmera usando S-video. </li><li> Pipetar uma gota de 4 ul contendo C. elegans em meios na parte inferior do substrato revestido de fuligem. </li><li> Trazer os melhores eletrodos para ~ 0,3 milímetros acima da gota. A gota deve ser próximo ao centro, logo abaixo do quinto eletrodo, para facilitar a operação. </li><li> Ligue a interface eletrônica e alta tensão (500 V RMS), e ajustar a distância do eléctrodo superior à gota, até que começa a se mover. Não deixe que os melhores eletrodos tocar a gota. </li><li> Recolha de dados de registo do número de transferências de gotículas de sucesso no dispositivo em resposta a impulsos eléctricos. Uma experiência de sucesso é caracterizado por, pelo menos, 700 transferências de gotículas, ou seja, uma transferência após cada pulso eléctrico. </li><li> Recolha de dados continuamente, até que a gotícula não mais mover-se em resposta a 5 a 10 pulsos. NOTA: Quando a superfície começa a degradar-se, o movimento pode ser restaurado, trazendo os melhores eléctrodos mais perto da gotícula. </li></ol>

<ol><li>Fair, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+microfluidics%3A+is+a+true+lab-on-a-chip+possible%5BTitle%5D)+AND+%22Microfluid+Nanofluid%22%5BJournal%5D)">Digital microfluidics: is a true lab-on-a-chip possible.</a> Microfluid Nanofluid. 3 (3), 245-281 (2007).</li>
<li>Gupta, S., Alargova, R. G., Kilpatrick, P. K., Velev, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On-Chip+Dielectrophoretic+Coassembly+of+Live+Cells+and+Particles+into+Responsive+Biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">On-Chip Dielectrophoretic Coassembly of Live Cells and Particles into Responsive Biomaterials.</a> Langmuir. 26 (5), 3441-3452 (2009).</li>
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<li>Perry, G., Thomy, V., Das, M. R., Coffinier, Y., Boukherroub, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+protein+biofouling+using+graphene+oxide+in+droplet-based+microfluidic+microsystems%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Inhibiting protein biofouling using graphene oxide in droplet-based microfluidic microsystems.</a> Lab Chip. 12 (9), 1601-1604 (2012).</li>
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<li>Deng, X., Mammen, L., Butt, H. -J., Vollmer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candle+Soot+as+a+Template+for+a+Transparent+Robust+Superamphiphobic+Coating%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Candle Soot as a Template for a Transparent Robust Superamphiphobic Coating.</a> Science. 335, 67-70 (2011).</li>
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<li>Barbulovic-Nad, I., Yang, H., Park, P. S., Wheeler, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+microfluidics+for+cell-based+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Digital microfluidics for cell-based assays.</a> Lab Chip. 8 (4), 519-526 (2008).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

A etapa mais crítica do protocolo é a proteção da camada de fuligem, diretamente associado ao sucesso em gotas em movimento. Metalização da camada de fuligem (método 1 acima) permite que perto de 100% de sucesso de fabricação. No entanto, o tempo máximo de operação é de cerca de 10 min; possivelmente, fracções de gotículas são molhar a fuligem através de furos na camada de metal. Revestimento da camada de fuligem com o líquido fluorado é a alternativa mais fácil e rápida, e exige o mínimo de recursos, mas apenas 40-50% ...

A miniaturização dos dispositivos que funcionam com líquidos é de suma importância para o desenvolvimento de plataformas &quot;lab-on-a-chip&quot;. Nesse sentido, as duas últimas décadas têm testemunhado um progresso significativo na área da microfluídica, com uma variedade de aplicações. 1-5 Contrastando com o transporte de fluidos em canais fechados (canal microfluídicos), DMF manipula gotas em matrizes de eletrodos. Um dos méritos mais atraentes desta técnica é a ausência de partes móveis para o transporte de fluidos, e movimento é imediatamente interrompida ao desligar sinais elétricos. No entanto, o movimento das gotículas é dependente de conteúdos das gotículas, certamente uma característica indesejável para uma plataforma universal &quot;lab-on-a-chip&quot;. Gotículas contendo proteínas e outros analitos aderir a superfícies do dispositivo, tornando-se inabalável. Indiscutivelmente, esta tem sido a principal limitação para o alargamento do âmbito de aplicações DMF; 6-8alternativas para minimizar a proliferação indesejada superfície envolvem a adição de espécies químicas extras para a gota ou seus arredores, o que poderia afetar o conteúdo da gota. Anteriormente, o nosso grupo desenvolveu um dispositivo para permitir o transporte de células e proteínas em DMF, sem aditivos adicionais (dispositivos Campo-DW). 9 Isto foi conseguido através da combinação de uma superfície com base na fuligem vela, 10 com uma geometria do dispositivo que favorece a gotícula de rolamento e leva a uma força ascendente sobre a gotícula, diminuindo ainda mais a interacção gotícula-superfície. Nesta abordagem, gota movimento não está associado a molhar a superfície 11. O objectivo do método descrito abaixo é detalhado para produzir um dispositivo de DMF capaz de transportar gotas contendo proteínas, células e organismos inteiros, sem aditivos adicionais. Os dispositivos de campo-DW pavimentar o caminho para as plataformas totalmente controlados que trabalham em grande parte de forma independente da gota de químicory. Aqui, nós também apresentam simulações mostra que, apesar da alta tensão necessária para o funcionamento do dispositivo, a queda de tensão através da gotícula é uma pequena fracção da tensão aplicada, indicando efeitos insignificantes sobre bioanalytes no interior da gotícula. Na verdade, os testes preliminares com Caenorhabditis elegans (C. elegans), um nemátodo usado para uma variedade de estudos em biologia, mostram que os vermes nadar sem perturbações como as tensões são aplicadas.

<table><tbody><tr><td>Vela</td><td></td><td></td> de parafina <td>Qualquer vela de parafina</td></tr><tr><td>Sistema de pulverização catódica</td><td>Denton Vacuum, Moorestown, NJ</td><td></td><td>Revestidor de pulverização catódica Mesa V HP equipado com um alvo Au.&nbsp;</td></tr><tr><td>1-dodecanetiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>471364</td><td></td></tr><tr><td>Teflon</td><td>Dupont</td><td>AF-1600</td><td></td></tr><tr><td>Fluorinert FC-40</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9755</td><td>Líquido fluorado: Prepare a resina Teflon-AF em Fluorinert FC-40, 1:100 (p/p), para criar o revestimento hidrofóbico.</td></tr><tr><td>Software de design gráfico -Adobe Illustrator</td><td>Adobe Systems</td><td></td><td>Outros softwares também podem ser usados.</td></tr><tr><td>Laminado de cobre</td> Impressora a laser <td>Dupont</td><td>LF9110</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Xerox</td><td>Phaser 6360 ou similar</td><td>Verifique a compatibilidade com "preto rico" ou "preto de registro" (veja o texto).</td></tr><tr><td>Filme de Perfluoroalcoxi (PFA)</td> Transene CE-100 <td></td> de Cobre Etchant McMaster-Carr <td>84955K22</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> Breadboard Allied Electronics 70012450 ou similar Grande o suficiente para permitir a montagem de 10 drivers.<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de circuito universal</td><td>Allied Electronics</td><td>70219535 ou similar</td><td></td></tr><tr><td>Conector</td><td>Allied Electronics</td><td>5145154-8 ou similar</td><td></td></tr><tr><td>Placa de controle e programa de controle (software LabView)</td><td>National Instruments</td><td>NI-6229 ou similar</td><td></td></tr><tr><td>Amplificador de alta tensão</td><td>Trek</td><td>PZD700</td><td></td></tr><tr><td>Capacitores C e C1, 100 nF, 60 V</td><td>Allied&nbsp;</td><td></td><td></td>8817183</tr><tr><td>Transistor T, NPN</td><td>Aliado&nbsp;</td><td></td><td></td>9350289</tr><tr><td>Diodo D, 1N4007</td><td>Aliado&nbsp;</td><td></td><td></td>2660007</tr><tr><td>Relé&nbsp;</td><td>Aliados&nbsp;</td><td></td><td></td>8862527</tr><tr><td>Sistema de visualização</td><td>Edmund Optics</td><td>VZM 200i ou similar</td><td>Ampliação do sistema 24X &#8211; 96X. É combinado com uma câmera colorida Hitachi KP-D20B 1/2 pol.</td></tr><tr><td>Gravador</td><td>Sony</td><td>GV-D1000 NTSC ou similar</td><td>Ele é conectado à câmera por um cabo S-video.</td></tr><tr><td>Simulações</td><td>COMSOL Multiphysics</td><td>V. 4.4</td><td></td></tr></tbody></table>

aproveitando-se de redução interação gota-superfície para otimizar o transporte de bioanalytes em microfluídica digital

Taking Advantage of Reduced Droplet-surface Interaction to Optimize Transport of Bioanalytes in Digital Microfluidics

A microfluídica digital (DMF), uma técnica de manipulação de gotículas, é uma alternativa promissora para o desenvolvimento de plataformas "lab-on-a-chip". Freqüentemente, o movimento das gotículas depende do umedecimento de uma superfície, diretamente associado à aplicação de um campo elétrico; As interações de superfície, no entanto, tornam o movimento dependente do conteúdo das gotículas, limitando a amplitude das aplicações da técnica.
Algumas alternativas têm sido apresentadas para minimizar essa dependência. No entanto, eles dependem da adição de espécies químicas extras à gotícula ou seus arredores, o que poderia interagir com as porções das gotículas. Enfrentando esse desafio, nosso grupo desenvolveu recentemente dispositivos Field-DW para permitir o transporte de células e proteínas em DMF, sem aditivos extras.
Aqui, o protocolo para fabricação e operação do dispositivo é fornecido, incluindo a interface eletrônica para controle de movimento. Também continuamos os estudos com os dispositivos, mostrando que organismos modelo multicelulares, relativamente grandes, também podem ser transportados, sem dúvida não afetados pelos campos elétricos necessários para a operação do dispositivo.

Anteriormente, foram utilizados dispositivos Campo-DW para permitir o movimento de proteínas em DMF. Em particular, as gotas com albumina de soro bovino (BSA) pode ser movido a uma concentração 2000 vezes mais elevada do que o relatado anteriormente por outros autores (sem aditivos). Isto era devido à interacção reduzida entre as gotículas e a superfície; A Figura 4 mostra uma gota contendo fluorescentemente marcado com BSA (ver Freire et al 9 para obter mais informação sobre os ...

O protocolo para fabricação e operação de dispositivos de desumidificação em campo (Field-DW) é descrito, bem como os estudos preliminares dos efeitos dos campos elétricos no conteúdo das gotículas.

Aproveitando-se de Redução Interação gota-superfície para otimizar o transporte de Bioanalytes em microfluídica Digital

Digital microfluidics (DMF), a technique for manipulation of droplets, is a promising alternative for the development of &#8220;lab-on-a-chip&#8221; ...

O objetivo geral deste procedimento é fabricar um dispositivo de umedecimento de campo capaz de transportar gotículas com bioanalitos sem aditivos. Isso é feito primeiro revestindo um substrato condutor com fuligem de vela. O substrato servirá como eletrodo inferior do dispositivo.O segundo passo é proteger a camada de fuligem aplicando polímeros de flúor líquido. Em seguida, fabrique os eletrodos superiores do dispositivo. Em seguida, conecte os eletrodos superior e inferior aos componentes eletrônicos do experimento.A etapa final é colocar uma amostra entre os eletrodos para testar o dispositivo. Em última análise, os resultados mostram que os dispositivos de umedecimento de campo podem suportar a transferência contínua de gotículas em resposta a cada pulso elétrico por pelo menos 700 pulsos. As principais vantagens dessa técnica em relação aos métodos existentes, como a eletroumectação, é que o campo elétrico não leva à umectação e não há necessidade de aditivos extras para o transporte de gotículas.A implicação desta técnica se estende para o desenvolvimento de um laboratório totalmente automatizado em uma plataforma de chip que funciona independentemente da química de gotículas, Demonstrando os procedimentos serão Michael Kowski e Selena fazer pesquisadores de graduação do meu laboratório. O primeiro passo é preparar o substrato condutor para o eletrodo de aterramento. Para isso, uma folha de cobre foi cortada em retângulos.Os retângulos têm 75 milímetros por 43 milímetros com uma espessura de 0,5 milímetros. Pronto, Um recipiente de gravura a água-forte de cobre para limpar os substratos. Este vídeo seguirá o protocolo usando apenas um substrato.Mergulhe o substrato na corrosão por cerca de 30 segundos. Após a imersão, recupere o substrato e lave-o correndo. Passe água sobre ele, seque-o com papel e, antes de prosseguir, coloque-o horizontalmente sobre um suporte que permita o acesso à sua superfície voltada para baixo.Para este vídeo, um anel aberto montado é usado. Tenha uma mistura de fluoropolímero líquido e um conta-gotas para sua aplicação pronta. Obtenha uma vela de parafina para fornecer a fuligem que será aplicada.Acenda-o e continue varrendo a vela sob o substrato de cobre. Mantenha a parte superior da chama aproximadamente um centímetro abaixo da parte inferior do substrato. Continue varrendo a vela por 30 a 45 segundos.Tomando cuidado para não tocar na superfície da fuligem. Depois de revestir o substrato com fuligem, remova e apague a vela imediatamente. Use uma pinça para segurar o substrato e gire-o para expor o lado coberto de fuligem.Enquanto ainda estiver quente, use um conta-gotas para depositar gotículas do polímero de flúor líquido nas bordas para localizar a perturbação da camada de fuligem. Uma vez aplicadas as gotas, incline o substrato de forma que fique quase vertical. Em seguida, deposite mais gotículas e deixe-as rolar por toda a superfície de fuligem, espalhando-se.Tanto quanto possível. Continue levando o substrato para uma placa quente mantida a 160 graus Celsius. Também dentro da coifa química, coloque o lado da fuligem do substrato voltado para cima em uma chapa quente para assar por 15 minutos.Após 15 minutos, retire o substrato da placa quente e deixe-o descansar durante a noite em temperatura ambiente antes de usá-lo como eletrodo inferior. O substrato pode ser armazenado indefinidamente quando o eletrodo de aterramento estiver pronto para uso. O próximo passo é preparar os eletrodos superiores.Este vídeo utiliza eletrodos fabricados seguindo um protocolo da literatura. O design do eletrodo foi impresso em um laminado de cobre fino gravado e limpo para chegar a este ponto. Cada um dos 10 eletrodos tem dois milímetros de largura e 0,3 milímetros de largura.Os eletrodos serão montados em uma lâmina de vidro de 75 milímetros por 25 milímetros e cerca de um milímetro de espessura. Aplique fita dupla-face em uma extremidade do slide e evite introduzir bolsas de ar. Em seguida, prenda cuidadosamente o laminado à lâmina para que os eletrodos fiquem próximos à borda.Em seguida, corte um pedaço de filme tímido por flúor ou mais ou menos da largura do slide. Coloque o filme sobre os eletrodos para evitar curtos-circuitos acidentais. Prenda-o com fita adesiva.Os eletrodos agora podem ser usados com a interface eletrônica. Leve os eletrodos superior e inferior para a configuração experimental para completar o dispositivo de umedecimento de campo. Na configuração experimental, o eletrodo inferior é aterrado eletricamente.Acima dele, os eletrodos superiores são conectados aos relés por meio de um conector de altura ajustável. Controle o dispositivo microfluídico com um programa de computador que move uma gota entre eletrodos adjacentes. Neste experimento, o movimento das gotículas no dispositivo microfluídico será visualizado.Use um conjunto de ampliação de 24 96 combinado com uma câmera CCD. Conecte um gravador de vídeo à câmera usando o vídeo S. Neste ponto, obtenha uma amostra para o experimento, neste caso, C elegância e pipeta média de gotículas de quatro microlitros.Coloque a gota no eletrodo inferior revestido de fuligem de forma que fique no centro dos eletrodos superiores. Em seguida, ajuste a posição dos eletrodos superiores, de modo que fiquem cerca de 0,3 milímetros acima da gota. Com a interface eletrônica e o alto voltage ligado, ajuste a altura do eletrodo superior até que a gota comece a se mover.Não deixe o eletrodo tocar na gota. Quando o movimento da gota estiver estável, comece a gravar com a câmera até que a gota não se mova em resposta a cinco a 10 pulsos. Este vídeo mostra a transferência bem-sucedida de C elgan em meio entre os eletrodos de um dispositivo de dueto de campo.Trabalhos anteriores com albumina de soro bovino marcada com fluorescência ou BSA ajudam a demonstrar a interação entre as amostras e o substrato à esquerda. O BSA fica em uma superfície revestida de fuligem em contraste à direita em uma superfície usando apenas um líquido fluorado. A amostra BSA mostra uma forte interação de superfície.Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como fabricar, sentir os dispositivos de casamento. Não se esqueça de seguir as diretrizes de segurança do laboratório.

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A microfluídica Digital é uma técnica caracterizada pela manipulação de gotículas discretas (~ nL - mL) em uma matriz de eletrodos pela aplicação de campos elétricos. É bem adequado para a realização rápida, seqüencial, miniaturizados automatizado ensaios bioquímicos. Aqui, nós relatamos uma plataforma capaz de automatizar várias etapas de processamento proteômica.

A microfluídica digital para processamento automatizado Proteômica

Gota plataformas baseadas microfluídicos são candidatos promissores para a experimentação de alto rendimento, uma vez que são capazes de gerar picolitros, auto-compartimentada vasos barata a taxas kHz. Através da integração com rápido, sensível e de alta resolução de fluorescência métodos espectroscópicos, a grande quantidade de informações geradas nesses sistemas podem ser eficientemente extraído, aproveitada e utilizada.

Métodos de detecção de fluorescência para as plataformas de gotículas microfluídicos

Nós desenvolvemos uma cultura de células automatizado e uma plataforma de interrogação para experiências de estimulação de células micro-escala. A plataforma oferece um controle simples, versátil e preciso para cultivar e estimular pequenas populações de células e recuperar lisados ​​para análises moleculares. A plataforma é bem adequado para os estudos que utilizam células preciosos e / ou reagentes.

A plataforma automatizada versátil para experiências de estimulação Micro escala celulares

Nós apresentamos um sistema de introdução de amostras de gotículas discreto para espectrometria de massas com plasma (ICPMS). Baseia-se um chip de microfluidos barato e descartável, que gera gotículas altamente monodispersas numa gama de tamanhos de 40-60 mm a frequências de 90 a 7.000 Hz.

Um chip microfluídico para ICPMS Amostra Introdução

Descrevemos um ensaio digital de ponto final para quantificar ácidos nucléicos com uma leitura simplificada (analógica). Medimos a fluorescência em massa de ensaios digitais baseados em gotículas usando uma máquina de qPCR padrão em vez de instrumentação especializada e confirmamos nossos resultados por microscopia.

Simples massa de Leitura Digital de Ácido Nucleico Quantificação Assays

Uma plataforma de biosensor microfluidic foi projetada e fabricado usando a tecnologia de fotorresiste de película seca de baixo custo para a quantificação rápida e sensível de vários analitos. Este sistema de uso único permite a leitura eletroquímica de ensaios de enzima-lig na-microplaqueta-imobilizado mediante a técnica de stop-fluxo.

Película seca baseada em fotorresiste eletroquímica Microfluidic Biosensor plataforma: Fabricação de dispositivo, ensaio em-microplaqueta preparação e operação de sistema

Este artigo apresenta um protocolo para semeadura escassa população de células usando pontas de pipetas para dispositivos microfluídicos de gotículas, a fim de proporcionar maior eficiência de encapsulação de células em gotículas.

Método baseado em uma ponta da pipeta para semeadura pilhas Droplet Microfluidic plataformas

Microfluido digital à base de eletrowetting é uma técnica que utiliza uma mudança impulsionada por tensão no ângulo de contato aparente de uma gotícula de volume de microlitros para facilitar sua manipulação. Combinar isso com contas magnéticas funcionais permite a integração de múltiplas operações de unidades laboratoriais para preparação e identificação de patógenos usando Oensaio Imunosorbent ligado à enzima (ELISA).

Plataforma de Microfluidos Digitais baseada em eletrowetting para ensaio imunosorbent automatizado ligado à enzima

Descrevemos um kit educacional que permite aos usuários executar vários experimentos e ganhar experiência prática em microfluidos digitais.

Um Kit Versátil baseado em atuação de gotículas de microfluídicas digitais para educação científica

Ensaios de gotículas de água em óleo são úteis para química analítica, evolução enzimático e análise de células únicas, mas normalmente requerem microfluidos para formar as gotículas. Aqui, descrevemos a emulsificação de modelos de partículas, uma abordagem microfluida livre para realizar ensaios de gotículas.

Emulsificação de modelos de partículas permite ensaios de gotículas livres de microfluídicos

A fabricação de um dispositivo de bicamada à base de polidimetilsiloxano (PDMS) para a produção de bibliotecas combinatórias em emulsões de água em óleo (plugs) é apresentada aqui. O hardware e o software necessários para automatizar a produção de plugues são detalhados no protocolo, e a produção de uma biblioteca quantitativa de plugues fluorescentes também é demonstrada.

Dispositivo microfluídico bicamada para produção de plugue combinatório

Aprenda a fabricar dispositivos de desumidificação por campo para transporte de bioanálitos sem aditivos em microfluídica digital. Este método utiliza fuligem de vela e polímeros fluorados para otimizar a manipulação de gotículas.

Aproveitando-se de Redução Interação gota-superfície para otimizar o transporte de Bioanalytes em microfluídica Digital

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