O Sistema Swimmeret de lagosta: Um Guia Prático para a dissecção da medula nervosa e extracelulares Recordings do padrão motor

O objetivo geral deste procedimento é dissecar o cordão nervoso abdominal do lagostim para usá-lo em estudos eletrofisiológicos. Isso é feito anestesiando primeiro o lagostim. Em seguida, uma dissecção macroscópica é realizada para isolar a placa ventral do lagostim.

Em seguida, uma dissecção fina é realizada para isolar completamente o sistema nervoso central dos gânglios raicos para os gânglios abdominais. Um seis. Finalmente, a bainha ganglionar é removida de todos os gânglios para facilitar os experimentos eletrofisiológicos.

Em última análise, a cadeia de gânglios abdominais é usada para registros extras ou intracelulares. Estudar a coordenação de geradores de padrões centrais ou investigar a morfologia e o contexto sináptico dos neurônios identificados. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da neurociência, como fornecer experiência prática sobre a função da rede nervosa para poder registrar a comoção fic FLA no sistema nervoso isolado ou caracterizar a morfologia dos gânglios abdominais ou de neurônios específicos.

Embora este método possa fornecer informações sobre o sistema de taxa de natação dos lagostins. Também pode ser aplicado a outros sistemas, como uma rede neuronal que impulsiona o comportamento de virar a cauda em lagostins Trabalhando com o lagostim Pacific Stacia Linea Guus. Depois de anestesiar um animal de acordo com o protocolo de texto, segure o lado ventral para cima e use uma tesoura forte para cortar ambas as garras em suas bases perto do tórax.

Em seguida, remova os europods esquerdo e direito. Coloque o lado ventral do animal para cima em uma placa de dissecação forrada com sardinha preta antes de usar solução salina fria para perfundir através da abertura da garra. Em seguida, use uma tesoura forte para fazer um único corte transversal logo posterior aos olhos do lagostim para decapitá-lo.

Em seguida, remova todas as pernas de caminhada perto das articulações da base para isolar o abdômen junto com os últimos segmentos torácicos do resto do tórax. Insira a ponta da tesoura na abertura da segunda perna de caminhada e corte para o lado oposto. Depois de estender o corte para ambos os lados através do tórax e expor alguns dos órgãos internos conforme descrito no protocolo de texto, remova a parte anterior do tórax.

Agora remova os órgãos internos e enxágue o animal com solução salina fria. Continue a dissecção com um corte em uma posição lateral máxima entre o lumon e os ratos nadadores em todo o comprimento da placa esternal. Faça o mesmo corte do outro lado.

Coloque o abdômen do lagostim com o lado ventral para cima na placa de dissecação. Use alfinetes de insetos para fixar a amostra posteriormente no tellson e anteriormente nos restos do carabase. Encha o prato com soro fisiológico de lagostim para cobrir o espécime.

Use uma pinça grossa na mão esquerda para agarrar através de uma abertura de perna e puxe a amostra para abri-la. Identifique as duas grandes fitas musculares flexoras dorsais. Fixe-os e corte suas bases ventrais, bem como a artéria esternal.

Exponha os primeiros gânglios abdominais A um e os nervos associados N um N dois. Agora passando para o segundo segmento abdominal. Remova a base dos fios musculares perto da base ventral.

O gânglio abdominal A dois agora é visível com os nervos associados N um, N dois e N três. Atravessar os nervos N três na posição mais distante do cordão nervoso. Repita essas etapas para os próximos três segmentos abdominais com os gânglios abdominais.

Um três a cinco. Ao atingir o gânglio abdominal, um seis. Corte a placa esternal posterior aos nervos de um seis.

Mantenha a parte ventral e prenda-a. Lado dorsal para cima no prato cheio de solução salina ao microscópio. Use uma pinça para remover as partes mais anteriores da popa torácica do cefalon.

Em seguida, corte os músculos entre as estruturas exoesqueléticas restantes. Depois de levantar cuidadosamente a extremidade anterior do cordão nervoso ventral, corte os nervos torácicos lateralmente. Concentre-se em um e corte os nervos N um e N dois de um com no máximo um centímetro de comprimento para prendê-los.

Em seguida, vá para A dois e identifique os nervos N um, N dois e N três deste segmento. Os nervos n um dos gânglios abdominais, um dois a cinco. Residem entre dois cuticulares esternais em desdobramentos em cada segmento e são cobertos por musculatura.

Em seguida, começando na borda lateral do abdômen, faça um corte ao longo da dobra cuticular esternal posterior e prossiga em direção à linha média Depois de descobrir N um de acordo com o protocolo de texto. Se necessário, corte o nervo o mais distalmente possível. Prossiga para o lado contralateral e comece a isolar o nervo N um da linha média perto do gânglio em direção à borda lateral, cortando ao longo do envoltório cuticular esternal posterior.

Agora corte os nervos N dois deste gânglio em um comprimento adequado para fixação. Em seguida, repita as etapas mostradas para os gânglios abdominais. Um dois para um três para um cinco o mais distalmente possível.

Corte os nervos do gânglio a seis. Use uma pinça para agarrar vários nervos de um seis para levantar o gânglio e começar a isolar a cadeia de gânglios da placa esternal. Depois de isolar completamente o cordão nervoso, transfira a cadeia de gânglios para uma placa de Petri forrada com proteção de peitoril transparente e preenchida com solução salina usando pequenos pinos cortados de fio de aço inoxidável enquanto aplica um toque suave de alongamento.

Prenda a cadeia de gânglios em linha reta com o cordão nervoso disposto com o lado dorsal para cima. Mantenha apenas os dois últimos gânglios torácicos e prenda os nervos torácicos ao lado. Prenda os nervos de um em um ângulo de 90 graus em relação ao cordão nervoso.

Em seguida, prossiga para um dois e fixe os nervos N dois em um ângulo de 35 a 45 graus em relação ao cordão nervoso. Uma vez que os nervos N um são separados e fixados de acordo com o protocolo de texto, fixe o ramo anterior do nervo N um em um ângulo de 90 graus em relação ao cordão nervoso. Em seguida, fixe o ramo posterior do nervo N um entre o ramo anterior N um e o nervo N dois.

Como todos os gânglios abdominais devem ser desembainhados, use uma tesoura de mola fina para fazer um pequeno corte lateral na bainha do gânglio posterior ao gânglio e entre os nervos N dois e N três. Corte transversalmente na bainha acima do conectivo. Em seguida, continue a cortá-lo ao longo das bordas laterais do gânglio antes de remover a bainha.

Se necessário, use uma pinça fina para levantar a bainha para realizar gravações extracelulares. Após a configuração das ferramentas e reagentes listados no protocolo de texto, coloque a cadeia de gânglios na mesa do microscópio e ilumine por baixo. Insira o eletrodo de gravação na proteção do sílaba próximo ao nervo alvo e o eletrodo de referência em uma posição próxima, mas lateral aos gânglios.

Em seguida, dobre o nervo alvo ao redor da gravação. Depois de esticar e prender o nervo, use uma seringa cheia de vaselina e uma agulha de ponta arredondada de calibre 20 para isolar o nervo alvo da solução de banho. Repita isso para todos os nervos cuja atividade precisa ser registrada.

Finalmente, comece a registrar como mostrado aqui, a atividade extracelular do PS dois a PS cinco neurônios motores ipsilaterais começa com uma explosão de PS em cinco e a onda de excitação se propaga na direção anterior. Além disso, o tempo medido desde o início de uma explosão até o início da próxima explosão em cada segmento permanece constante e é definido como o período dos períodos de ritmo e explosão. As durações podem variar entre diferentes preparações, mas o atraso de fase entre os segmentos permanece constante em aproximadamente um quarto do ciclo, independentemente da frequência do ritmo.

Esses padrões de coordenação podem ser melhor vistos nos histogramas de fase vistos aqui. Aqui, usando microeletrodos afiados, gravações intracelulares dos dendritos dos neurônios motores Ps mostram oscilações de enfase de neurônios individuais com a atividade extracelular registrada de todos os neurônios motores PS do mesmo hemigânglio. Para identificar neurônios registrados intracelularmente, as células podem ser preenchidas usando microeletrodos afiados e iontoforese.

Nesta figura, a soda ventral de dois neurônios motores PS preenchidos com di estão localizados posteriormente à base do nervo N um. O neurite primário se projeta anteriormente e se ramifica dentro da neuropílula lateral. O axônio se projeta através do ramo posterior do nervo N um para a musculatura.

Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em 45 minutos a uma hora se for executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de trocar a solução salina em intervalos regulares para manter o tecido nervoso saudável. Após este procedimento, outros métodos, como o registro intracelular de neurônios motores ou interneurônios, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como analisar o mecanismo celular de coordenação, medir correntes iônicas ou estudar o efeito de neuromoduladores na atividade rítmica de células específicas.