Otimizado Ex-ovo A cultura de Chick embriões para estágio avançado de desenvolvimento

O objetivo geral deste método é apresentar uma técnica otimizada de cultura X ovo para embriões de galinha, que permite a observação do desenvolvimento embrionário desde o estágio 19 de hambúrguer e Hamilton até os estágios finais de desenvolvimento até o estágio 40. Este método é útil para estudantes em um ambiente de laboratório de biologia do desenvolvimento, bem como pesquisadores que desejam usar o embrião de galinha como organismo modelo para configurar este método de cultura X ovo. Primeiro, os ovos são preparados.

Os ovos foram incubados a 37 graus Celsius com 40% de umidade por aproximadamente três dias e meio, o que se correlaciona aproximadamente com o hambúrguer e o estágio 19 de Hamilton. Os ovos são preparados pulverizando-os com etanol 70% para que, quando a casca for rachada, o embrião não seja contaminado. Depois que os ovos são pulverizados, eles são deixados momentaneamente para secar.

Enquanto a câmara de umidade é preparada, a câmara de umidade é feita de um recipiente Ziploc. O primeiro passo na construção da câmara de umidade é adicionar uma camada de um a dois centímetros de enchimento absorvente. Nesse caso, o lenço Kim, embora camadas de acolchoamento de algodão também possam ser usadas.

Esta camada de acolchoamento absorvente se encaixa na base do recipiente Ziploc mostrado aqui. Uma vez que a camada absorvente está no lugar, aproximadamente 150 mililitros de água destilada são despejados na base do recipiente. A maior parte dessa água deve ser absorvida pelo Padding.

A câmara de umidade agora está completa e pode ser colocada de lado. Um barco pequeno e estéril é usado para embalar o embrião quando ele é removido da casca. O caminho barco mede 8,8 centímetros quadrados devido à orientação dos ovos na incubadora, o embrião está localizado na superfície superior do ovo e, portanto, a casca deve ser rachada no lado oposto.

A casca é então quebrada suavemente e o ovo é colocado muito perto do barco de passagem. Em um movimento suave, o ovo é separado, liberando o embrião suavemente no caminho Barco. O embrião é então inspecionado para garantir que o jugo ainda esteja intacto e que o embrião seja viável, como mostrado aqui com batimentos cardíacos visíveis e sem anormalidades óbvias.

Em seguida, adicionamos um antibiótico ao embrião para ajudar a combater a infecção. A estreptomicina de penicilina a uma concentração de 5.000 unidades de penicilina e cinco miligramas de estreptomicina por mil é alocada para minimizar a frequência de congelamento e descongelamento. Eventos. 40 microlitros são retirados da alíquota e adicionados à albumina circundante usando uma pipeta.

Agora o embrião está pronto para ser cuidadosamente colocado na câmara de umidade. Uma vez na câmara de umidade, o embrião recebe uma tampa para ajudar a prevenir a contaminação. Uma tampa quadrada de placa de Petri medindo nove centímetros e meio quadrados é colocada sobre o barco de caminho.

É importante garantir que não haja umidade na borda do barco de referência para que não se forme uma vedação entre a placa de Petri e o barco de passagem, o que restringiria o oxigênio ao embrião. Em seguida, para completar a câmara de umidade, uma tampa é colocada no recipiente Ziploc. No entanto, apenas dois cantos da tampa são pressionados no lugar, deixando os outros cantos abertos e permitindo que o fluxo de ar alcance o embrião.

Uma vez concluída a câmara de umidade, ela é colocada em uma incubadora de 37 graus para que o embrião possa continuar se desenvolvendo após quatro dias e meio. A câmara de umidade pode ser removida da incubadora e o embrião pode ser observado aproximadamente no estágio 34. Neste ponto, os alunos podem observar facilmente o embrião, incluindo a vasculatura, o olho grande e os botões dos membros.

O embrião pode ser observado posteriormente sob um microscópio de dissecação, e pesquisas mais avançadas podem ser realizadas, como manipulações embrionárias. Depois de observar o embrião nesta fase, ele pode ser devolvido a uma incubadora de 37 graus e continuaria a se desenvolver até pelo menos o estágio 40, que é de 14 dias de incubação. Em conclusão, este método mostra a otimização do cultivo de embriões de pintinhos fora da casca do ovo.

Ele oferece uma oportunidade para os alunos observarem o desenvolvimento de embriões de galinha em um ambiente de laboratório movimentado e, além disso, fornece aos pesquisadores acesso a embriões se estiverem fazendo manipulações.