Name: Localização, identificação e excisão de Depots Murino adiposo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprenda a identificar e excisar depósitos de tecido adiposo em camundongos adultos com mínima dissecação e contaminação. Este método permite análises histológicas, de expressão proteica e de atividade enzimática.

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Os autores não têm agradecimentos.

NOTA: Todos os procedimentos com animais foram realizados com a aprovação do Comitê de Cuidados e Uso Animal Institucional (IACUC) da Universidade de Cincinnati, e de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do National Institutes of Health (NIH Publication Nenhum . 85-23, revista em 1996). 1. Eutanásia e esterilizar o mouse <ol><li> Posicione o mouse em um dropbox contendo uma dose supratheraputic de isoflurano e permitir a inalar para o efeito. Uma vez que o rato é sacrificado, retirar da caixa. </li><li> Cervicalmente deslocar como um segundo meio de eutanásia. </li><li> Esteriliza-se a superfície externa do rato, pela limpeza do animal com etanol a 70%. </li></ol> 2. Identificação e isolamento de três Depots adiposo Diferentes <ol><li> Brown tecido adiposo (BAT) Isolamento: <ol><li> Certifique-se que a pele está molhada do álcool de limpeza para ajudar na corte através da epiderme e da derme Layers. </li><li> Posicione o mouse em decúbito dorsal, com as costas contra a mesa. </li><li> Agarre a pele logo abaixo do diafragma com uma pinça, elevador e inciso com uma tesoura. </li><li> Cortado transversalmente em torno da circunferência do rato para expor o peritoneu. </li><li> Revele a BAT depósito em forma de borboleta por degloving a metade superior do mouse. Segure os apêndices inferiores e abdômen em uma mão e puxar a pele para cima em direção à cabeça. </li><li> Orientar o rato, de modo que fique posicionado em pronação na tabela. Tenha cuidado para não contaminar o depósito exposto com o cabelo. </li><li> Instrumentos cirúrgicos limpos e mudança para um novo par de luvas. </li><li> Localize as escápulas e depósito correspondente. Remova cuidadosamente qualquer adiposo branco superficial sobre a borboleta e depois dissecar a borboleta da gordura marrom interescapular. Tenha cuidado para evitar o músculo intimamente associada com a gordura marrom. NOTA: O uso de um microscópio de dissecação é recomendado para a remoção do white adiposo, bem como na separação do tecido adiposo castanho de as escápulas. </li><li> Remover depósito de gordura e transferir para um tubo de microcentrífuga de 2 ml. </li><li> Se o ARN ou proteína está a ser extraída, congelar o tecido por imersão em azoto líquido e armazenar a -80 ° C. Congelar a amostra ao mesmo tempo para evitar a degradação. Se a cultura, cobrir o tecido em DMEF-12 e definir sobre o gelo até que todas as amostras são coletadas para a cultura (informação suplementar). </li></ol></li><li> Isolamento de tecido adiposo subcutâneo (SQ), um branco tecido adiposo Depot (WAT): <ol><li> Coloque em um novo par de luvas para não contaminar entre depósitos de gordura. </li><li> Revelar o inguinal, depósitos SQ triangulares por De-gloving a metade inferior do mouse. Segure os apêndices superiores e tórax em uma mão e puxar a pele para baixo em direção aos pés com a outra mão. </li><li> Orientar o mouse em decúbito dorsal, tomando cuidado para não contaminar o depósito exposto com o cabelo. </li><li> Limpe surgicainstrumentos L e mudança para um novo par de luvas. </li><li> Dissecar cuidadosamente os triângulos de gordura SQ. Tenha cuidado para não contaminar a amostra com o músculo, vizinha de gordura, glândulas mamárias ou cortando os navios e contaminar a amostra de sangue. NOTA: O uso de um microscópio de dissecção é recomendado se as fronteiras não estão claramente definidos. </li><li> Remover os depósitos de gordura e transferir para tubos de microcentrífuga de 2 ml. </li><li> Se o ARN ou proteína está a ser extraída, congelar o tecido por imersão em azoto líquido e armazenar a -80 ° C. Congelar a amostra ao mesmo tempo para evitar a degradação. </li><li> Para a coloração, corrigir ou incorporar em outubro Se a cultura, cobrir o tecido em DMEF-12 e definir sobre o gelo até que todas as amostras são coletadas para a cultura (informação suplementar). </li></ol></li><li> Isolamento de gonadal Fat um Tissue Visceral adiposo (IVA) e branco tecido adiposo (WAT) Depot: <ol><li> Coloque em um novo par de luvas para não contaminar entre depósitos de gordura. </li><li> Com scissors, cortar transversalmente o peritoneu, directamente abaixo do diafragma. Corte o peritônio do diafragma até meados reto coronally para expor órgãos abdominais. </li><li> Localizar os testículos ou ovários e identificar o tecido adiposo branco em anexo, conhecido como o adiposo epididimal em machos ou fêmeas em adiposo gonadal. </li><li> Instrumentos cirúrgicos limpos e mudar para um novo par de luvas </li><li> Dissecar cuidadosamente ambos os depósitos de gordura do epidídimo dos testículos, epidídimos, e canais deferentes. Ou, se do sexo feminino, dissecar cuidadosamente ambas as pastilhas de gordura gonadal dos ovários. </li><li> Remover depósitos de gordura e transferi-los para 2 tubos ml de microcentrífuga. </li><li> Se o ARN ou proteína está a ser extraída, congelar o tecido por imersão em azoto líquido e armazenar a -80 ° C. Congelar a amostra ao mesmo tempo para evitar a degradação. </li><li> Para a coloração, corrigir ou incorporar em outubro Se a cultura, cobrir o tecido em DMEF-12 e definir sobre o gelo até que todas as amostras são coletadas para a cultura (informação suplementar). </li&gt; </ol></li></ol> 3. Isolamento de tecido adiposo perivascular (PVAT) <ol><li> O isolamento do coração: <ol><li> Coloque o mouse em uma posição supina com apêndices superiores e inferiores estendidos para fora. </li><li> Apêndices seguros usando fita cirúrgica. </li><li> Depois de posicionar o mouse como listado acima, criar tensão, levantando-se no apêndice xifóide com uma pinça. Corte horizontal através do diafragma, expondo a porção inferior da cavidade torácica. </li><li> Apesar de manter a tensão, levantando-a do apêndice xifóide, cortar a caixa torácica superiormente para a cabeça, apenas para o lado do esterno. </li><li> Pegue a caixa torácica apenas inferior à clavícula, e corte ao longo do comprimento inferior da clavícula em direção a axila em ambas as direções. A cavidade torácica e seu conteúdo (coração, pulmões, etc.) agora deve ser claramente visível. </li><li> Limpe a cavidade torácica do sangue alheio e fluido usando ga estérilUze para absorver o fluido. Se coleta órgãos ou vasos não se esqueça de profusa (informação suplementar). </li><li> Uma vez que a área está limpa de fluido, o corte dos vasos e brônquios correspondentes a remoção dos pulmões, o que permite uma melhor exposição do coração. </li></ol></li><li> Localização e Excisão da aorta perivascular tecido adiposo (PVAT): <ol><li> Remova os seguintes órgãos para melhor identificar as partes inferiores da aorta: fígado, estômago, baço, pâncreas, intestinos e cólon. </li><li> Primeiro começa com a identificação do estômago e do esôfago. Cortar o esófago na junção gastro-esofágica para libertar o estômago do corpo. </li><li> Em seguida, identificar os intestinos e do mesentério circundante. Cortar superficialmente através de mesentério, já que fica muito perto da porção renal da aorta, em seguida, &quot;executar o intestino.&quot; </li><li> Cortar o cólon libertar o mais próximo do recto quanto possível. Deste modo, libertando o estômago, intestino e cólon do rato. </li><li> Remover-se o estômago, intestino, cólon, pâncreas e baço, cortando através do mesentério de fixação e navios. O pâncreas e baço deve vir livre com o estômago, intestino e cólon. </li><li> Retire o fígado cortando as veias hepáticas e anexando mesentério, remova todos os lobos. </li><li> Cortar a camada visceral e gordura cercam os rins. Deixar os rins ligados à aorta in vivo para servir como marcadores geográficos para diferentes segmentos da aorta. </li><li> Lavar a área com 1x PBS estéril e remover todo o fluido por absorção com uma gaze estéril. </li><li> Usando micro-tesouras e micro-fórceps, separar a aorta do seu apego à espinha dorsal e ventral a sua fixação para o esôfago. </li><li> Isolar a aorta, seguindo e destacando a aorta do comprimento da aorta descendente a partir da origem no coração até a bifurcação na região ilíaca. </li><li> Identificar e isolar os vasos subclávia. Isolar esses naviosdesde o pescoço até a raiz aórtica para melhor expor a junção da raiz aórtica e no coração. </li><li> Remover o timo, em seguida, cortado a artéria inominada, a artéria carótida comum esquerda, e a artéria subclávia esquerda, permitindo o movimento do coração. </li><li> Com o auxílio de um microscópio de dissecação, visualizar o tecido adiposo (PVAT) camada perivascular ao redor da aorta. </li><li> Tomar muito cuidado para não beliscar ou apertar o PVAT, retire com cuidado o caminho PVAT da aorta com micro-fórceps. Suavemente cortar a ligação do PVAT à aorta com micro-tesouras começando na região torácica logo acima, onde o diafragma está localizado. NOTA: Um microscópio de dissecção é recomendada. </li><li> Repetir este processo de todo o comprimento da aorta, terminando na região da aorta infra-renal, a qual está localizada logo acima da bifurcação ilíaca do vaso aórtico. </li><li> Se arco aórtico PVAT é desejada, usou o mesmo método para remover o PVAT do menor curvature do arco. </li><li> Coloque as amostras PVAT em 2 ml de tubo (s) de microcentrífuga. </li><li> Se o ARN ou proteína está a ser extraída, congelar o tecido por imersão em azoto líquido e armazenar a -80 ° C. Congelar a amostra ao mesmo tempo para evitar a degradação. Se a cultura, cobrir o tecido em DMEF-12 e definir sobre o gelo até que todas as amostras são coletadas para a cultura (informação suplementar). NOTA: depósitos adiposos adicionais a considerar se estiver interessado em uma análise abrangente depósito adiposo incluem: retroperitoneal, mesentérica, omental, pericárdio e poplítea. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults%2C+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+medical+care+costs+of+obesity%3A+an+instrumental+variables+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Health+Economics%22%5BJournal%5D)">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li>
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</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes ou outros conflitos de interesse.

A obesidade pode levar a uma grande série de morbidades e o pleno entendimento do papel que desempenha adiposo não é totalmente compreendido; Por conseguinte, continua a pesquisa no campo da adiposo é necessário. Os modelos animais, especificamente modelos murinos são ideais para a pesquisa inicial na progressão de doenças e ensaios de tratamentos farmacêuticos potenciais. Na utilização destes modelos, o isolamento e a excisão precisa de depósitos de tecido adiposo é uma ferramenta extremamente importante e necessário n...

Adiposo fez uma aparição notável nos holofotes da mídia, devido ao aumento dramático da obesidade durante as últimas décadas do século 20. Obesidade afeta atualmente mais de um terço dos adultos e 17% das crianças e adolescentes nos Estados Unidos (EUA) 1. Abrangendo todos os grupos étnicos, a pesquisa estatística em torno da epidemia de obesidade tem mostrado que os negros não-hispânicos têm a maior taxa ajustada por idade de obesidade (49,5%) em comparação com os mexicanos-americanos (40,4%), todos os hispânicos (39,1%) e não- hispânicos (34,3%) 2. O efeito econômico da obesidade também é uma preocupação crescente para o sistema de saúde. Em 2012, estima-se que o custo médico anual de cuidados para a obesidade em os EUA em 2005 foi de 190,2 bilhões dólares, quase 21% do orçamento global da despesa médica. Infelizmente, a obesidade infantil foi estimada a ser responsável por US $ 14 bilhões em custos médicos diretos sozinho. Estatisticamente, determinou-se que a média de custo médico deindivíduos com obesidade foi de $ 2741 mais elevado de um ano do que aqueles sem esta morbidade 3-5. A obesidade é um importante fator de risco para uma variedade de condições, tais como: diabetes tipo 2, dislipidemia, doenças cardiovasculares, câncer, distúrbios osteo-musculares e inflamação crônica. A obesidade está profundamente ligada à patogênese da síndrome metabólica e outras doenças crônicas 6-8. Com tais conexões drásticas e negativas entre a obesidade e outras comorbidades, a investigação científica tem concentrado a atenção para entender melhor a atual epidemia e os papéis diversos e central desempenhado pelas adiposo. Historicamente, o tecido adiposo foi considerada irrelevante e foi visto apenas como um tecido de enchimento simples. Atualmente, adiposo foi mostrado para desempenhar vários papéis essenciais em função do corpo em: metabolismo, a regulação hormonal, inflamação, proteção e isolamento 9. O tecido adiposo é composto principalmente deadipócitos, mas também contém pericitos, células endoteliais, macrófagos e monócitos, células estaminais pluripotentes 8. O tecido adiposo é distribuído por todo o corpo em depósitos distintos. Os principais depósitos podem ser encontrados subdermicamente, por via subcutânea, intramuscular, e visceral 10. Depósitos adiposos demonstraram possuir perfis metabólicos específicos de depósito, os quais mostraram uma susceptibilidade específica depósito de obesidade e distúrbios relacionados 8. Tradicionalmente, o tecido adiposo foi classificado em dois tipos principais: o tecido adiposo branco (WAT) e tecido adiposo marrom (BAT); embora a literatura recente indica as presenças de um terceiro grupo batizado brite ou bege adiposo 11. O tecido adiposo foi mostrado para ter cores diferentes, as morfologias, funções metabólicas, características bioquímicas e padrões de expressão genética 10. Os adipócitos em WAT ter um único, grande gota lipídica e quantidades variáveis ​​de mitocôndrias. WATé predominantemente encontrado em localidades subcutâneas e viscerais do corpo. Funções WAT principalmente como um local de armazenamento de energia e proteção de órgãos. Os adipócitos em BAT têm uma morfologia multilocular e mitocôndrias abundantes. MTD está localizada principalmente no pescoço e grandes vasos sanguíneos do tórax, bem como as escápulas 12. MTD principalmente funções em comportamentos de gasto de energia que regulam a termogênese 7. Brite adiposo ou bege foi mostrado para partilhar uma morfologia e expressão análoga à MTD, mas foi encontrado para ser originado a partir de adipócitos brancos 11. O método cirúrgico descrito neste manuscrito fornece aos pesquisadores com a capacidade de analisar os diferentes efeitos que os fatores tais como: ambiente, produtos farmacêuticos, e genética, têm no tecido adiposo; bem como o adiposo papel benéfico ou prejudicial desempenha na doença e na saúde em geral. Além disso, proporcionar uma forma de identificar e isolar diferentes tipos de tecido adiposo parapermitir uma melhor compreensão das relações bioquímicas e diferenças entre depósitos. Isto pode ajudar a determinar a relação entre a localização, a função, e tipos de gordura dentro do corpo. Este método descrito faz isso, fornecendo os meios para visualização bruta, a análise de expressão gênica, análise de expressão de proteínas, exame histológico, e isolamento de linhas de células primárias para estudos in vitro. Atualmente, existem muitos artigos que fornecem insights sobre o comportamento metabólico dos diferentes depósitos adiposos, bem como suas localizações anatômicas; mas não fornecem um método em profundidade sobre como localizar especificamente, identificar e isolar esses depósitos. Este método fornece uma técnica cirúrgica precisa que permite o isolamento de vários depósitos, com uma quantidade mínima de dissecção e a contaminação em comparação com outros métodos concebidos para o isolado de um ou dois depósitos 13-14. O objetivo deste protocolo é o de proporcionarum método de precisão para a identificação e isolamento de diferentes tipos de depósitos de gordura a partir de várias localizações anatómicas.

<table><tbody><tr><td>Isoflurano</td><td>Med-Vet International</td><td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td>Fisher</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>Aqueça em banho-maria antes de colocar o lenço de papel.</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 2 ml</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-CS</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

localização, identificação e excisão de depots murino adiposo

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

A obesidade aumentou dramaticamente nas últimas décadas e afeta mais de um terço da população adulta dos EUA. O efeito econômico da obesidade em 2005 atingiu uma soma impressionante de US $ 190,2 bilhões apenas em custos médicos diretos. A obesidade é um importante fator de risco para uma ampla gama de doenças. Historicamente, pouco se sabia sobre o tecido adiposo e suas principais e essenciais funções no organismo. O tecido adiposo marrom e branco são os dois principais tipos de tecido adiposo, mas a literatura atual identificou um novo tipo de gordura chamada gordura brite ou bege. A pesquisa mostrou que os depósitos adiposos têm perfis metabólicos específicos e certos depósitos permitem uma propensão à obesidade e outros distúrbios relacionados. O objetivo deste protocolo é fornecer aos pesquisadores a capacidade de identificar e extirpar depósitos adiposos que permitirão a análise de diferentes efeitos fatoriais sobre o tecido adiposo; bem como o papel benéfico ou prejudicial que o tecido adiposo desempenha na doença e na saúde geral. O isolamento e a excisão dos depósitos adiposos permitem que os investigadores observem as alterações morfológicas macroscópicas, bem como as alterações histológicas. O isolado adiposo também pode ser usado para estudos moleculares para avaliar alterações transcricionais e translacionais ou para experimentação in vitro para descobrir alvos de interesse e mecanismos de ação. Esta técnica é superior a outras técnicas publicadas devido ao design que permite o isolamento de vários depósitos com simplicidade e contaminação mínima.

Identificação e localização de tecido adiposo subcutâneo inguinal, adiposo castanho interescapular, adiposo epididimal visceral (Figura 1), bem como o tecido adiposo arco aórtico perivascular, adiposo da aorta torácica, adiposo supra-renal da aorta e do tecido adiposo da aorta infra-renal (Figura 2) foi alcançada com sucesso usando o método cirúrgico descrito. O exame histológico e diferenciação entre amostras MTD e Wat foram avaliados positivamente com Hematoxilina e Eosina (H &amp; E)...

Devido à conexão drástica e negativa entre a obesidade e outras comorbidades, a investigação sobre o papel adiposo desempenha na doença e na saúde global é garantido. Apresenta-se um protocolo para o isolamento e a excisão de depósitos adiposos que permitam o estudo de tecido adiposo usando in situ e in vitro.

Localização, identificação e excisão de Depots Murino adiposo

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar a identificação e excisão do depor adiposo para a análise de diferentes efeitos fatoriais sobre e por adiposo. Isso é feito expondo primeiro os órgãos internos e depósitos adiposos de um camundongo adulto. Na segunda etapa, os órgãos e tecidos supérfluos são removidos para melhor expor os depósitos, permitindo a identificação dos depósitos em seus locais correspondentes.Na etapa final, o tecido adiposo é então extraído com cuidado especial para evitar contaminação. Em última análise, o isolamento e a excisão desses depósitos fornecem tecido para análise histológica, expressão proteica, atividade enzimática e análise de expressão gênica, bem como para estudos in vitro. A principal vantagem deste protocolo específico sobre as metodologias existentes é que ele permite o isolamento de múltiplos depósitos com dissecção mínima, bem como contaminação mínima.Portanto, esse procedimento pode ajudar a responder a perguntas sobre o campo da obesidade. Por exemplo, os efeitos prejudiciais ou mesmo benéficos do tecido adiposo nas doenças humanas. Para isolar o tecido adiposo marrom, comece colocando um camundongo adulto com etanol, limpo e sacrificado na posição supina com as costas contra a mesa.Em seguida, use uma pinça para levantar a pele logo abaixo do diafragma e faça uma incisão na pele com uma tesoura. Corte transversalmente ao redor da circunferência do mouse para expor o peritônio. Em seguida, segurando os apêndices inferiores e o abdômen em uma mão, puxe a pele em direção à cabeça com a outra mão para desenluvar a metade superior do camundongo, revelando o depósito adiposo marrom em forma de borboleta ou morcego.Em seguida, localize o escapo e o depósito de morcegos correspondente. Em seguida, use um microscópio de dissecção para remover cuidadosamente qualquer tecido adiposo branco superficial sobre a borboleta e dissecar a gordura marrom interescapular, tomando cuidado para evitar qualquer músculo associado. Para isolar o tecido adiposo subcutâneo ou subq, segure os apêndices superiores e o tórax com uma mão e puxe a pele para baixo em direção aos pés com a outra mão para desenluvar a metade inferior do camundongo e revelar os depósitos triangulares inguinais subq.Em seguida, coloque o mouse de volta na posição supina e disseque cuidadosamente os triângulos de gordura subq para isolar a gordura gonadal da cavidade abdominal. Use uma tesoura para cortar o peritônio transversalmente diretamente abaixo do diafragma. Em seguida, corte o peritônio do diafragma ao reto, no meio do coronal, para expor os órgãos abdominais e dissecar cuidadosamente os dois depósitos de gordura epidérmica dos testículos epi e vasa deia.Para isolar o tecido adiposo perivascular, mantenha o animal em decúbito dorsal e estenda os apêndices superior e inferior para fora. Em seguida, levante o processo xifóide com uma pinça para criar tensão na parte superior do corpo e corte horizontalmente o diafragma, expondo a parte inferior da cavidade torácica. Corte a caixa torácica superiormente em direção à cabeça, ao lado do esterno e, em seguida, pegue a caixa torácica logo abaixo da clavícula.Corte ao longo do comprimento inferior da clavícula em direção à axila em ambas as direções. A cavidade torácica e seu conteúdo agora devem estar claramente visíveis. Assim que a área estiver limpa de fluido, corte os brônquios e os vasos de fixação para remover os pulmões e expor o coração.Depois de identificar o estômago e o esôfago, corte o esôfago na junção gastroesofágica para liberar o estômago. Em seguida, identifique os intestinos e o mesentério circundante. Corte superficialmente o mesentério e, em seguida, corte o cólon o mais próximo possível do reto para liberar o estômago, intestino, cólon, pâncreas e baço.Quando os órgãos forem removidos, corte as veias hepáticas e o mesentério de conexão e remova todos os lobos do fígado. Corte a camada visceral e a gordura ao redor dos rins, deixando os rins ligados à aorta in vivo para servir como marcadores geográficos para os diferentes segmentos da aorta. Então, quando a área ao redor dos rins estiver limpa, use microtesouras e microfórceps para separar a aorta de sua fixação dorsal à coluna vertebral e sua fixação ventral ao esôfago.No tórax, siga e desprenda a aorta desde sua origem no coração até a bifurcação na região ilíaca. Para isolar o tecido adiposo aórtico, neste ponto, os vasos subclávios podem ser identificados. Isole esses vasos do pescoço até a raiz da aorta para expor melhor a junção aórtica e a raiz no coração.Em seguida, remova o timo e corte as artérias braquiocefálica, carótida comum esquerda e subclávia esquerda para permitir o movimento do coração. Finalmente, use um microscópio de dissecação para visualizar o tecido adiposo perivascular ou a camada P VVA T ao redor da aorta. Em seguida, use micro fórceps para puxar suavemente o tecido para longe da aorta e micro tesoura para cortar suavemente a fixação do PVAT à aorta começando na região torácica, logo acima de onde o diafragma está localizado.Em seguida, use micro fórceps para puxar suavemente o tecido para longe da aorta e micro tesouras para cortar suavemente a fixação do PVAT à aorta, começando na região torácica logo acima de onde o diafragma está localizado. Repita esse processo em toda a extensão da aorta, terminando na região aórtica infrarrenal, localizada logo acima da bifurcação ilíaca do vaso aórtico e inferior aos ramos renais do morcego. E as amostras de wat podem ser diferenciadas por análise histológica com coloração h e e linhagens celulares primárias de adipócitos subcutâneos e perivasculares.Os adipócitos podem então ser cultivados e diferenciados de pré-adipócitos para adipócitos para análise de microarray. Nessas imagens representativas, por exemplo, a conversão de pré-adipócitos cultivados em adipócitos foi confirmada com adipócitos de coloração com vermelho de óleo, isolados, cultivados e diferenciados por este método podem ser usados para análises in vitro posteriores. Neste experimento representativo, observou-se que a atividade enzimática do MM P dois diminuiu em adipócitos perivasculares isolados em resposta a um tratamento experimental em comparação com controles não tratados.Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de trocar as luvas e limpar os instrumentos com frequência para minimizar a contaminação. Portanto, depois que esses tecidos são coletados, uma variedade de procedimentos pode ser realizada neles. Por exemplo, cultura de células, análise histológica, medição de proteínas e até expressão gênica.E então esses resultados podem ser usados para ajudar a entender a relação e as semelhanças e diferenças entre os diferentes depósitos.

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Medicine

Medicina

Neste vídeo, demonstramos o procedimento cirúrgico para isolar o tecido adiposo branco subcutâneo e o tecido adiposo marrom interescapular de um camundongo recém-nascido.

Coleção de depósito adiposo branco e marrom do filhote de rato: um procedimento cirúrgico para colher o tecido adiposo branco e o tecido adiposo marrom do filhote de camundongo

O tecido adiposo (TA) pode influenciar a homeostase de todo o corpo, portanto, entender os mecanismos moleculares de diferenciação e função dos adipócitos é importante. Fornecemos um protocolo para obter novos insights sobre esses processos, analisando a homeostase, diferenciação e exposição à hipóxia dos adipócitos como um modelo para a apoptose induzida de adipócitos.

Mecanismo do Regulamento de Números de adipócitos em adultos Organismos através da diferenciação e apoptose homeostase

Apresentamos as técnicas necessárias para isolar a fração vascular estromal (SVF) de depósitos de tecido adiposo inguinal (subcutâneo) e perigonadal (visceral) de camundongos para avaliar sua expressão gênica e atividade colagenolítica. Este método inclui o enriquecimento de células-tronco derivadas de alto teor adiposo (ASCs) Sca1 usando separação celular imunomagnética.

A separação imunomagnética Sca1 de gordura Depot-específica<sup&gt; alta</sup&gt; células-tronco derivadas de tecido adiposo (ASC)

Os adipocytes existem em depósitos discretos e têm papéis diversos dentro de seus microambientes originais. Como as diferenças regionais no caráter e na função do adipócitos são descobertas, a identificação estandardizada e a isolação dos depósitos são cruciais para o avanço do campo. Nisto, nós apresentamos um protocolo detalhado para a excisão de vários depósitos adiposos do rato.

Identificação e dissecção de diversos depósitos de Adipose de camundongo

O objetivo deste protocolo é sintetizar lipossomas fluorescentemente marcados e usar citometria de fluxo para identificar a localização in vivo de lipossomas em nível celular.

Preparação, Administração e Avaliação da Captação Celular Tecido-Específica In Vivo de Lipossomas Marcados com Corante Fluorescente

Este protocolo descreve a abordagem técnica para isolar subpopulações de células estromais adipogênicas e fibroinflamatórias de depósitos de tecido adiposo branco intra-abdominal murino (WAT) por classificação de células ativadas por fluorescência ou separação de esferas imunomagnéticas.

Isolamento de Subpopulações de Células Estromais Adipogênicas e Fibro-Inflamatórias de Depósitos Adiposos Intra-Abdominais Murinos

Este protocolo detalha um método para a dissecção de depósitos adiposos de camundongos e o isolamento e digestão das respectivas artérias para liberar e, em seguida, identificar a população de células endoteliais. Células recém-isoladas usadas em aplicações a jusante avançarão na compreensão da biologia celular vascular e dos mecanismos de disfunção vascular.

Isolamento e Identificação de Células Endoteliais Vasculares de Depósitos Adiposos Distintos para Aplicações a Jusante

Este protocolo descreve o isolamento semi-automatizado da fração vascular estromal (FVS) do tecido adiposo murino para obtenção de pré-adipócitos e diferenciação de adipócitos in vitro. O uso de um dissociador tecidual para digestão da colagenase reduz a variação experimental e aumenta a reprodutibilidade.

Isolamento Semi-Automatizado da Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Branco Murino Usando um Dissociador de Tecido

Aqui, fornecemos um procedimento prático para dissecar e realizar análises histológicas e de expressão gênica do tecido adiposo marrom supraclavicular murino.

Dissecção, processamento histológico e análise da expressão gênica do tecido adiposo marrom supraclavicular murino

O tamanho e a fragilidade dos adipócitos maduros limitaram as técnicas e ferramentas disponíveis para seu estudo e isolamento. Aqui, é descrito um protocolo para o isolamento de adipócitos murinos maduros, que pode ser facilmente adaptado para diferentes depósitos adiposos e dietas de camundongos.

Isolamento e cultura de adipócitos murinos primários de camundongos magros e obesos

Aprenda a identificar e excisar depósitos de tecido adiposo em camundongos adultos com mínima dissecação e contaminação. Este método permite análises histológicas, de expressão proteica e de atividade enzimática.

Localização, identificação e excisão de Depots Murino adiposo

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