Membro Remoto Pré-Condicionamento Isquêmico: A Técnica neuroprotetor em roedores

O objetivo geral deste procedimento é fornecer isquemia no membro posterior que condiciona os tecidos remotos contra o estresse subsequente. Por exemplo, a retina contra lesões leves. Isso é feito calibrando primeiro o manômetro manual Ingle mom.

Em seguida, o animal é anestesiado e colocado em uma almofada de aquecimento. Em seguida, a pata traseira do animal é estendida e o manguito é colocado na posição. Finalmente, a isquemia remota é realizada inflando o manguito com a bomba, desinflando o balonete e repetindo o processo uma segunda vez.

Em última análise, quando aplicada antes da lesão leve, a isquemia remota é usada para mostrar uma melhora na função retiniana e no número de fotorreceptores submetidos à apoptose. Este método pode responder a questões-chave no campo da neurociência, como a forma como a autoproteção é induzida com pré-condicionamento isquêmico remoto para realizar o rastreamento da temperatura da pele em tempo real. Abra o software de registro de temperatura, ajuste a configuração de temperatura para entre 30 a 35 graus Celsius e a frequência de amostragem a cada 100 milissegundos usando uma braçadeira neonatal tamanho dois para um rato de 250 a 550 gramas, conecte a braçadeira ao manômetro fome usando um adaptador, se necessário.

Em seguida, esvazie o manguito afrouxando a válvula de liberação de ar ou desconectando o tubo do manguito do adaptador. Certifique-se de que nenhuma pressão permaneça no tubo e que a agulha do manômetro esteja em zero dentro do retângulo oval. Em seguida, verifique a pressão entre a tubulação, o manômetro e a tosse.

Use bombas suaves do bulbo de inflação para inflar o manguito até que o manômetro leia 100 miligramas de mercúrio. Depois de garantir que a pressão permaneça constante, esvazie o manguito abrindo lentamente a válvula de liberação de ar após o anoitecer, adaptando o animal de acordo com o protocolo de texto. Confirme se ele tem um bom tônus muscular beliscando o membro posterior superior para confirmar que há músculo adequado presente.

Depois de sedar o animal de acordo com o protocolo de texto, verifique a profundidade da anestesia estendendo a perna e beliscando a pele na parte inferior do pé. Em seguida, aplique lágrimas artificiais. Coloque o rato em uma almofada de aquecimento ou tubo de aquecimento de água circulante em uma posição de bruços com as almofadas dos pés dos membros inferiores voltadas para cima.

Para aplicar a sonda de temperatura da pele, estenda a perna do rato que sofrerá isquemia e coloque firmemente a sonda de pele na almofada do pé, posicionando-a para maximizar o contato entre a sonda de temperatura e a pele. Em seguida, use fita de papel para fixar a sonda. Verifique o posicionamento da sonda de pele rastreando a temperatura no software de registro de temperatura por um a dois minutos.

Certifique-se de que a temperatura da pele esteja entre 30 a 34 graus Celsius e permaneça estável. Caso contrário, ajuste a sonda para realizar isquemia remota. Comece com um manguito vazio e certifique-se de que a válvula de pressão de ar esteja fechada.

Estenda a perna e envolva frouxamente o manguito no membro posterior superior. Use o indicador e o polegar para estender a perna e os dedos inferiores para manter o manguito solto na posição. Agora, aumente a pressão do manguito para 160 milímetros de mercúrio.

Assim que a pressão correta for atingida, inicie o cronômetro e os registros de temperatura do pé. A temperatura do pé deve cair dois graus Celsius após cinco minutos de pressão constante, bombear repetidamente o bulbo de insuflação em rajadas curtas para manter a pressão desejada do manguito e manter a posição do manguito acima do joelho do animal durante a isquemia. Forneça isquemia remota continuamente por cinco minutos.

Em seguida, solte a válvula de pressão de ar para uma reperfusão de cinco minutos antes de repetir a isquemia remota. Quando o procedimento estiver concluído, esvazie a pressão do manguito afrouxando a válvula de pressão de ar. Verifique a mudança de temperatura ao longo do protocolo de isquemia.

Em seguida, solte o manguito. Coloque o animal em uma almofada de aquecimento e continue monitorando até o ambulatório. Quando o animal estiver andando, devolva-o ao alojamento.

Por fim, realizar ferimentos leves e realizar o ensaio em túnel. De acordo com o protocolo de texto, como visto claramente aqui, um manguito de pressão arterial colocado acima do joelho elevado a mais de 160 milímetros de mercúrio interrompe o fluxo sanguíneo para o membro posterior. A falta de fluxo sanguíneo resultou em uma redução na temperatura do pé que era menor do que a temperatura central do animal, e que aumentou depois que o manguito foi desinflado, consistente com a condição necessária para o RIP.

Nesta figura, o eletrorretinograma adaptado ao escuro ou ERG de um rato normal e escuro mostrou um grande fotorreceptor e resposta retiniana interna a um flash brilhante uma semana após a lesão leve. Os registros do ERG mostraram uma redução severa na amplitude em relação aos controles, refletindo a perda de fotorreceptores, no entanto, o pré-condicionamento do membro posterior com isquemia usando um protocolo de reperfusão de dois a cinco minutos imediatamente antes da isquemia protegeu os fotorreceptores de lesões leves. Este painel mostra que as amplitudes R-I-P-E-R-G foram maiores do que a lesão leve isoladamente, com uma ligeira redução na onda A.

Finalmente, um manguito colocado abaixo do joelho não protege os fotorreceptores de lesões leves, conforme refletido nas amplitudes reduzidas do ERG vistas aqui. Métodos como o pré-condicionamento isquêmico remoto podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como quais são os mecanismos de neuroproteção endógena e como a isquemia remota pode ser aplicada para melhorar a função da lesão e degeneração do SNC.