TIRFM e GFP-sondas sensíveis ao pH para avaliar Neurotransmitter Vesicle Dynamics em SH-SY5Y Neuroblastoma Cells: imagens de células e Análise de Dados

O objetivo geral deste procedimento é investigar a dinâmica da vesícula do neurotransmissor em células de neuroblastoma usando sondas sensíveis ao pH e microscopia de fluorescência de reflexão interna total ou terra de grama. Isso é feito primeiro colocando células em lamínulas de vidro e seccionando-as com sondas fluorescentes sensíveis ao pH geneticamente codificadas de fusão e reciclagem de vesículas, que são direcionadas seletivamente para vesículas sinápticas. A expressão da proteína é esperada dentro de 24 a 48 horas.

O segundo passo é registrar a dinâmica das vesículas por microscopia de reflexão interna total. Esta etapa é particularmente crítica para o sucesso do experimento e uma descrição passo a passo sobre como obter a configuração do gramado é fornecida. Próximo. Uma vez que a configuração correta do gramado é alcançada, as imagens sequenciais podem ser gravadas automaticamente pelo software em condições basais ou estimuladas.