Name: Glutamato e hipóxia como um modelo de estresse para o isolado perfundido Vertebrate Retina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Aprenda a desenvolver um modelo padronizado de estresse com glutamato e hipóxia em retina bovina isolada para testar agentes neuroprotetores. Este método utiliza eletroretinograma para avaliar função retiniana em condições controladas.

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Este artigo é dedicado à minha amada esposa Maren e ao nosso pequeno Karl.

1. Preparação de Bovinos Olhos <ol><li> Obter bovina olhos imediatamente após o abate do animal. </li><li> Transportar os olhos protegidos em &quot;Sickel-solução&quot; uma forma especial, contendo NaCl 120 mM, KCl a 2 mM, 0,1 mM de MgCl2, 0,15 mM de CaCl2, 1,5 mM de NaH 2 PO 4, 13,5 mM de Na 2 HPO 4 e 5 mM de glucose no RT. </li><li> Realizar a preparação da retina em condições adaptadas escuro com uma luz vermelha ofuscante. </li><li> Retire a parte anterior do olho. Executar uma ca. incisão equatorial 4 milímetros posterior ao limbo. Posteriormente remover córnea, íris, corpo ciliar e lente em uma única peça. Mantenha as retinas em Sickel-solução. </li><li> Mecanicamente soltar os anexos vítreas para a superfície da retina e do vítreo remover da taça olho aberto. </li><li> Depois divida o olho em quatro quadrantes e perfurar rodada áreas de ca. 7 milímetros de diâmetro usando uma trefina. </li><li> Suavemente separar da retinado epitélio pigmentar e colocá-lo em um dispositivo de gravação dentro de uma caixa protegida da luz. O dispositivo de gravação é composto por uma manutenção de plástico com uma malha no meio; colocar a retina na malha e, em seguida, fixar com um anel de plástico directamente sobre os eléctrodos. NOTA: O mantenedor de plástico tem dois canais para permitir um fluxo constante do meio. </li></ol> 2. A gravação do eletrorretinograma (ERG) <ol><li> A fim de gravar o electrorretinograma, usar dois eléctrodos de prata / prata-cloreto de cada lado da retina e perfundir a retina a uma velocidade de perfusão constante de ca. 1 ml / min e temperatura constante de 37 ° C. Use a &quot;Sickel-solução&quot; saturada com oxigênio. </li><li> Antes de iniciar a medição, adaptar escuro da retina (proteger da luz durante todas as medições) e usar intervalos de estímulo de cinco min. Use um único flash xenon branco 1 Hz para a estimulação com uma intensidade definido para 6,3 mlx na superfície da retina. </li&gt; <li> Uso calibrado filtros de densidade neutra e um estímulo de luz de 10 ms controlado por um temporizador, de modo a apresentar respostas óptimas. </li><li> Para medir e processar os dados, filtrar o ERG e amplificá-lo (100 Hz filtro de alta freqüência, de 50 Hz filtro notch, 100.000 x amplificação), utilizando um RPS312RM Amplifier Grass. Tente filtrar frequências possíveis perturbadores que possam perturbar o sinal. A fim de processar os dados, use uma placa de aquisição analógico-digitais de dados em um computador desktop (PC compatível). </li><li> Após o período de adaptação ao escuro sob perfusão constante, medir a amplitude do sinal elétrico até estáveis ​​amplitudes b-ondas são gravadas. NOTA: As amplitudes são consideradas estáveis ​​se cinco medições individuais chegar a um valor médio e desviar-se menos de 10%. Um bom exemplo de medições individuais é dada na Figura 1. </li><li> Para iniciar o teste, substituir o oxigénio puro por qualquer azoto puro (número de experiências individuais, n = 5) para testar a hipóxiaou 250 um glutamato (n = 5). </li><li> Grave as respostas elétricas a cada 5 min para 45 min. </li><li> Após o período de testes, aspergir as retinas com padrão médio saturada com oxigênio por 75 min e olhar para as mudanças da amplitude da onda-b. Esta é a fase de lavagem. Medir a amplitude da onda-b da calha do uma onda para o pico da onda b. </li><li> Para investigar o efeito de hipóxia ou glutamato no potencial de fotorreceptores em condições escotópicas, suprimir a onda b pela adição de 1 mM para a solução nutriente. </li><li> Após a gravação de um potencial estável de fotorreceptores durante 30 min, realizar o procedimento como antes, expondo as retinas de 45 min para as diferentes soluções de irrigação com aspartato 1 mM. Use o mesmo período de washout (passo 2.8), como mencionado anteriormente. </li></ol> Análise 3. Dados <ol><li> A fim de avaliar estatisticamente os dados, garantir uma distribuição normal para todos os dados, por exemplo, utilizando o teste de Kolmogorov-Smirnovteste 15. </li><li> Calcula-se a redução dos a- e b-amplitudes de onda em percentagens após a fase de exposição, em comparação com a última medição antes da exposição. Comparar a redução das amplitudes-ERG após 45 min - no final do período de exposição - a ERG medido antes da aplicação. </li><li> Comparar a onda a- e b- no final da fase de lavagem para a amplitude correspondente antes de exposição a estudar a possibilidade de recuperação. </li><li> Para a análise estatística, use o software estatístico JMP software ou software SPSS. Calcular dados ao longo como a média ± desvio padrão. Estime significado pelo teste estatístico adequado. NOTA: Estes testes podem ser diferentes dependendo do escopo experimental. Neste cenário, use t-pareado de Student. </li></ol>

<ol><li>Varma, D. D., Cugati, S., Lee, A. W., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+central+retinal+artery+occlusion%3A+clinical+presentation+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">A review of central retinal artery occlusion: clinical presentation and management.</a> Eye (Lond). 27, 688-697 (2013).</li>
<li>Resch, M., Suveges, I., Nemeth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension-related+eye+disorders%29%5BTitle%5D)+AND+%22Orv+Hetil%22%5BJournal%5D)">Hypertension-related eye disorders).</a> Orv Hetil. 154, 1773-1780 (2013).</li>
<li>Feltgen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+study+of+the+European+Assessment+Group+for+Lysis+in+the+Eye+%28EAGLE%29+for+the+treatment+of+central+retinal+artery+occlusion%3A+design+issues+and+implications.+EAGLE+Study+report+no.+1+%3A+EAGLE+Study+report+no.+1%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Multicenter study of the European Assessment Group for Lysis in the Eye (EAGLE) for the treatment of central retinal artery occlusion: design issues and implications. EAGLE Study report no. 1 : EAGLE Study report no. 1.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 244, 950-956 (2006).</li>
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<li>Diederen, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+glutamate+levels+in+the+vitreous+of+patients+with+retinal+detachment%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Increased glutamate levels in the vitreous of patients with retinal detachment).</a> Exp Eye Res. 83, 45-50 (2006).</li>
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<li>Ambati, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+gamma-aminobutyric+acid%2C+glutamate%2C+and+vascular+endothelial+growth+factor+levels+in+the+vitreous+of+patients+with+proliferative+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Elevated gamma-aminobutyric acid, glutamate, and vascular endothelial growth factor levels in the vitreous of patients with proliferative diabetic retinopathy.</a> Arch Ophthalmol. 115, 1161-1166 (1997).</li>
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<li>Alt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroprotective+potential+of+Rho-kinase+inhibition+in+promoting+cell+survival+and+reducing+reactive+gliosis+in+response+to+hypoxia+in+isolated+bovine+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">The neuroprotective potential of Rho-kinase inhibition in promoting cell survival and reducing reactive gliosis in response to hypoxia in isolated bovine retina.</a> Cell Physiol Biochem. 32, 218-234 (2013).</li>
<li>Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+properties+of+a+new+isolated+rat+retina+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+research%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation.</a> Vision research. 39, 2165-2177 (1999).</li>
<li>Richter, S. H., Garner, J. P., Wurbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+standardization%3A+cure+or+cause+of+poor+reproducibility+in+animal+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments.</a> Nat Methods. 6, 257-261 (2009).</li>
<li>Dutescu, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifocal+ERG+recordings+under+visual+control+of+the+stimulated+fundus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmology+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">Multifocal ERG recordings under visual control of the stimulated fundus in mice.</a> Investigative ophthalmology & visual science. 54, 2582-2589 (2013).</li>
<li>Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+retinal+toxicity+of+drugs+in+animal+models+using+electrophysiological+and+morphological+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Testing retinal toxicity of drugs in animal models using electrophysiological and morphological techniques.</a> Doc Ophthalmol. 118, 3-28 (2009).</li>
<li>Mukhopadhyay, A., Gupta, A., Mukherjee, S., Chaudhuri, K., Ray, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Did+myocilin+evolve+from+two+different+primordial+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Did myocilin evolve from two different primordial proteins.</a> Mol Vis. 8, 271-279 (2002).</li>
<li>Januschowski, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+retinal+toxicity+of+a+new+heavy+intraocular+dye%2C+using+a+model+of+perfused+and+isolated+retinal+cultures+of+bovine+and+human+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Evaluating retinal toxicity of a new heavy intraocular dye, using a model of perfused and isolated retinal cultures of bovine and human origin.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 250, 1013-1022 (2012).</li>
<li>Luke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolated+perfused+bovine+retina--a+sensitive+tool+for+pharmacological+research+on+retinal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 16, 27-36 (2005).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Neste estudo, um impacto significativo na amplitude da onda b após 45 minutos de hipoxia foi encontrado. Esta redução foi ainda significativo após a fase de washout. Um efeito semelhante sobre o potencial de fotorreceptores pode ser observada. Os resultados são compatíveis com outros dados publicados 16 e nos dão a oportunidade de estudar possíveis efeitos neuroprotetores após hipóxia. Depois de 45 minutos de exposição de 250 uM de glutamato, conseguim...

Neuroprotection tem sido um forte campo de investigação na investigação oftalmológica nas últimas décadas. A retina é uma rede neuronal altamente sensível que depende significativamente a oxigenação e é fortemente influenciado pelo metabolismo das suas células vizinhas. As principais patologias oculares relacionadas com a lesão das células nervosas são oclusões vasculares retinianas, glaucoma e descolamento da retina. A oclusão da artéria retinal, como um exemplo para a oclusão vascular da retina, leva a uma perda súbita de visão devido a hipoxia da retina interna 1. Ela é freqüentemente associada com patologias vasculares gerais 2 e leva a uma perda visual persistente 1, com apenas 8% dos pacientes em recuperação da acuidade visual significativamente 1. Apesar de a fibrinólise arterial tem sido sugerida como uma opção de tratamento, o benefício não poderia ser mostrado em um ensaio clínico randomizado 3. Glaucoma e descolamento de retinaambos têm um aumento na concentração de glutamato 4-6. O glutamato sob condições fisiológicas é encontrado como um transmissor excitatório ao longo de todo o sistema nervoso central e retina interna a 7,8. Elevados níveis de glutamato foram encontradas não só em glaucoma e descolamento de retina 5,6, mas também na retinopatia diabética proliferativa 9. Um aumento em glutamato conduz possivelmente a excitotoxicidade e, portanto, danos das células nervosas 10. Na maioria dos casos de descolamento da retina e em alguns casos de cirurgia de retinopatia diabética proliferativa na retina (vitrectomia via pars plana) são necessários. Durante a manipulação mecânica vitrectomia, luz brilhante da fibra óptica ou tensão de cisalhamento exercida por altas taxas de fluxo de soluções de irrigação durante as operações longas exercer uma pressão adicional sobre a retina 11,12. Todas as doenças mencionadas têm em comum que a patologia está localizada ao retinuma só e representam a comunidade oftalmológica com o desafio de encontrar formas de proteger a retina como um sistema neurossensorial. O electrorretinograma (ERG) é o método padrão para a avaliação in vivo da função de fotorreceptores (uma onda) e a função da retina interna (b-ondas). O ERG é medido por eléctrodos de prata-introduzidos na córnea e os olhos estão a ser estimulado por um aumento do nível de luz para detectar defeitos em bastonetes ou cones ou na retina interna. Diferentes defeitos na retina pode ser detectada por alterações na amplitude (a força da resposta) ou a latência (o intervalo de tempo de resposta-para) do ERG. Diferentes protocolos e métodos de medição ERG (padrão-ERG, multifocal ERG-campo ou brilhante ERG) permitem uma maior diferenciação de defeitos. A técnica da retina isolado foi introduzida recentemente, tornando-se possível avaliar os efeitos sobre a retina, sem interferências de um animal, por exemplo o estudo dereações gerais 13,14. Foi o propósito deste estudo para avaliar e introduzir um modelo de estresse definido e padronizado para hipóxia e estresse glutamato na retina superfused isolado. Assim, nós estamos esperando para lançar as bases para futuros estudos sobre efeitos neuroprotetores de determinados agentes ou soluções de irrigação intra-oculares.

<table><tbody><tr><td>120 mM NaCl&nbsp;</td><td>Merck Pharma, Alemanha</td><td>1.064.041.000</td><td></td></tr><tr><td>2 mM KCl,&nbsp; &nbsp;</td><td>Merck Pharma, Alemanha</td><td>1.050.010.250</td><td></td></tr><tr><td>0,1 mM MgCl2,&nbsp;</td><td>Merck Pharma, Alemanha</td><td>58.330.250</td><td></td></tr><tr><td>0,15 mM CaCl2</td><td>Merck Pharma, Alemanha</td><td>111 TA106282</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mM NaH2PO4/13,5 mM Na2HPO4&nbsp; &nbsp;</td><td>Merck Pharma, Alemanha</td><td>1.065.860.500</td><td></td></tr><tr><td>5 mM de glicose</td><td>Merck Pharma, Alemanha</td><td>40.741.000</td><td></td></tr></tbody></table>

glutamato e hipóxia como um modelo de estresse para o isolado perfundido vertebrate retina

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

Neuroprotection tem sido um forte campo de investigação na investigação oftalmológica nas últimas décadas e afeta doenças como glaucoma, oclusão vascular da retina, descolamento de retina, e retinopatia diabética. Era o objeto deste estudo a introdução de um modelo de estresse padronizado para futuro teste pré-clínico terapêutico. Retina bovina foram preparadas e perfundido com uma solução saturada de oxigénio padrão, e o ERG foi gravado. Depois de gravar b-ondas estáveis, hipoxia (N 2) puro ou estresse glutamato (250 um glutamato) foi exercida por 45 min. Para investigar os efeitos sobre sozinho função de fotorreceptores, 1 mM aspartato foi adicionada para obter a-ondas. ERG-recuperação foi monitorada por 75 min. Para hipoxia, uma diminuição na amplitude da onda-um de 87,0% foi observada (p &lt;0,01) após um tempo de exposição de 45 min (36,5% de redução após o final da lavagem p = 0,03). Além disso, um decr inicialfacilidade de amplitudes de ondas de b-87.23% foi registada, que atingiu significado estatístico (p &lt;0,01, diminuição de 25,5% no final da lavagem, p = 0,03). Para 250 um glutamato, uma redução inicial de 7,8% de um amplitudes de ondas (p&gt; 0,05), seguidas por uma redução de 1,9% (p&gt; 0,05). Uma redução de 83,7% da amplitude da onda b (p &lt;0,01) foi observado; após uma lavagem de 75 min, a redução foi de 2,3% (p = 0,62). Neste estudo, um modelo de tensão é apresentada normalizada que pode ser útil para identificar possíveis efeitos neuroprotectores no futuro.

Após 1 hora de perfusão dos preparativos da retina com solução padrão saturado de oxigênio (Figura 1A e B) ERG-amplitudes mostrou estabilização e menor variação de amplitudes entre as medidas individuais. pH, pressão osmótica, temperatura, e pO 2 (excepto para o teste de hipóxia) foram mantidas constantes em todos os testes. Para isolar o sinal a partir do sinal de fotorreceptores da retina interna, aspartato 1 mM foi adicionado para a solução padrão para suprimir a ...

Com este estudo, apresentamos um modelo de estresse padronizado para a retina bovina superfundido isolado para o futuro teste pré-clínico terapêutico. O efeito de qualquer hipóxia (puro N 2) ou estresse glutamato (250 mM glutamato) em função da retina representado por a- e amplitudes da onda-b foi avaliado.

Glutamato e hipóxia como um modelo de estresse para o isolado perfundido Vertebrate Retina

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

O objetivo geral do seguinte experimento é introduzir o estresse por glutamato ou hipóxia como um modelo potencial para testar a eficácia de agentes neuroprotetores. Isso é alcançado primeiramente obtendo olhos bovinos frescos com núcleos e realizando uma rápida, mas ainda assim traumática, remoção da retina. Em seguida, após fundir as retinas com uma solução nutriente especial, eletrodos são usados para registrar uma série de eletroretinogramas estáveis, ou ERGs.Em seguida, glutamato é adicionado à solução nutritiva, ou a hipóxia é induzida pela adição de nitrogênio a 100% em vez de oxigênio. Por fim, um ERG é registrado para observar o efeito do estresse por glutamato ou da hipóxia nas amplitudes das ondas A e B. Os resultados mostram uma alteração na função retiniana quando exposta à hipóxia ou ao estresse por glutamato por meio dos registros de ERG.A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como culturas celulares ou gravações de ERG in vivo, é que testes funcionais podem ser realizados, diferentemente das culturas celulares, sem a variabilidade provocada pelo posicionamento do eletrodo ou pela anestesia geral, comparado a experimentos in vivo. Este método pode ajudar a responder questões fundamentais no campo farmacológico, como a avaliação de agentes neuroprotetores. As implicações desta técnica estendem-se à terapia ou ao diagnóstico de doenças agudas ou crônicas.Agentes neuroprotetores possíveis podem agora ser testados com este modelo de estresse. Embora este método possa fornecer insights sobre neuroproteção no campo oftalmológico, ele também pode ser aplicado a outras áreas médicas, como doenças neurodegenerativas. Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à técnica de preparo.O próprio modelo foi desenvolvido pelo Professor Sickle em Colônia, e ele era um grande neurofisiologista. Após obter olhos de bovino de um animal abatido, coloque-os em solução sickle à temperatura ambiente para transporte ao laboratório, utilizando uma luz vermelha fraca em condições de adaptação ao escuro. Remova a parte anterior do olho, faça então uma incisão equatorial cerca de quatro milímetros posterior ao limbo e remova a córnea, o corpo ciliar, a íris e o cristalino em uma única peça.Mantenha as retinas na solução de pesca. Em seguida, solte mecanicamente as aderências do vítreo à superfície retiniana e remova o vítreo do copo ocular aberto. Então, divida o olho em quatro quadrantes e, utilizando um perfurador TR, retire áreas redondas de aproximadamente sete milímetros de diâmetro.Separar suavemente a retina do epitélio pigmentar e posicioná-la sobre um dispositivo de registro, transferir a retina para uma malha e usar um anel de plástico para fixá-la sobre os eletrodos. Em seguida, colocar o dispositivo de registro dentro de uma caixa protegida da luz. Antes de realizar as medições, adaptar a retina ao escuro e, então, com filtros neutros calibrados de densidade e um estímulo luminoso de 10 microssegundos, aplicar, em intervalos de cinco minutos, um flash branco único de xenônio de 1 hertz para estimulação, com intensidade de 6,3, correspondente à intensidade luminosa ou MLX na superfície da retina.Após o período de adaptação à escuridão sob perfusão constante, meça as amplitudes do sinal elétrico até que amplitudes estáveis da onda a sejam registradas. Para iniciar o teste, substitua o oxigênio puro por nitrogênio puro para testar a hipóxia ou por glutamato 250 micromolar. Registre as respostas elétricas a cada cinco minutos durante 45 minutos.Meça a amplitude da onda B do ponto mais baixo da onda A até o pico da onda B para investigar o efeito da hipóxia ou do glutamato no potencial dos fotorreceptores. Em condições escotópicas, adicione 1 milimolar de aspartato à solução nutriente para suprimir a onda B. Para avaliar estatisticamente os dados, utilize o teste de Kolmogorov-Smirnov para garantir uma distribuição normal de todos os dados. Calcule a redução das amplitudes das ondas A e B e as porcentagens após a fase de exposição.Em comparação com a última medição antes da exposição, compare a redução das amplitudes do ERG após 45 minutos, ao final do período de exposição, com o ERG medido antes da aplicação. Compare as ondas a e b ao final da fase de lavagem com as amplitudes correspondentes antes da exposição. Para examinar uma possível recuperação para análise estatística, utilize o software estatístico JMP ou o software SPSS.Calcule os dados ao longo do experimento como média mais ou menos desvio padrão. Utilize o teste estatístico apropriado para estimar a significância, conforme mostrado aqui. Após uma hora de perfusão das preparações retinianas com solução padrão saturada de oxigênio, a amplitude do ERG se estabilizou e exibiu menor variação entre as amplitudes das medições individuais.O pH, a pressão osmótica, a temperatura e o PO₂ foram mantidos constantes em todos os testes. Para isolar o sinal do fotorreceptor do sinal da retina interna, adicionou-se um milimolar de aspartato à solução padrão para suprimir a onda B. Em condições hipóxicas, observou-se uma diminuição de 87,0% na amplitude da onda A.Após um tempo de exposição de 45 minutos ao final do lavado, foi observada uma diminuição de 36,5%. Isso foi estatisticamente significativo. Além disso, nesse contexto, foi registrada uma diminuição inicial estatisticamente significativa nas amplitudes da onda B de 87,23%.Foi observada uma redução estatisticamente significativa de 25,5%. Após exposição ao glutamato 250 micromolar, detectou-se uma redução não significativa de 7,8% das amplitudes da onda após o intervalo de tempo definido. Isso foi seguido por uma redução não significativa de 1,9%. Finalmente, foram registradas reduções nas amplitudes do ERG em 83,7%, e ao final do lavado, observou-se uma recuperação da BWA, resultando em uma redução não significativa de 2,3% após 75 minutos de perfusão com solução padrão.Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de monitorar continuamente a linha de base do seu ERG. Após este procedimento, agentes neuroprotetores ou tóxicos podem ser testados para responder a perguntas adicionais, como toxicidade após seu desenvolvimento. Essa técnica abriu caminho para pesquisadores na área de XV com eletrofisiologia explorarem alterações no ERG em um modelo padronizado.

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