Name: In vitro caracterização funcional de Rato Colorretal Aferente Endings (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 9 s
Description: Aprenda a caracterizar funcionalmente terminações nervosas aferentes no colo retal de camundongos usando gravações eletrofisiológicas de fibra única in vitro. Este método permite estudar mecanismos de dor e processamento sensorial.

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Apoiado pelo prêmio NIH R01 DK093525 (GFG). Agradecemos imensamente a revisão científica e a edição gramatical do manuscrito pela Dra. Amber Shaffer (Universidade de Pittsburgh) e agradecemos a Michael Burcham pela ajuda na preparação das figuras.

NOTA: Este protocolo foi revisto e aprovado pela Universidade de Pittsburgh Institutional Animal Care e do Comitê Use. 1. Preparação da solução de Krebs modificado e teste de droga Alíquotas <ol><li> Adicione 6 L de solução de Krebs modificada, que contém (em mM): NaCl 117,9, KCl 4,7, NaHCO3 25, 1.3 NaH 2 PO 4, 1,2 MgSO4, 2,5 CaCl2, 11,1 de D-glucose, 2 butirato de sódio, acetato de sódio 20 , 0,004 nifedipina (para bloquear as contracções espontâneas do músculo), 0,003 e indometacina (para bloquear a síntese de prostaglandinas endógenas). Utilizar soluções ice-frias e quentes Krebs para dissecção dos tecidos e gravação de fibra única, respectivamente. </li><li> Preparar todas as soluções químicas (por exemplo, IS, capsaicina, ATP) em alíquotas a concentrações desejadas. </li></ol> 2. dissecção do tecido colorectum nervo- <ol><li> Anestesiar e eutanásia ratos machos (6-8 semanas de idade, 20 - 30 g) emuma câmara de CO 2 a um caudal que desloca 10 - 30% do volume da câmara por minuto até que os ratinhos parar de respirar completamente, como indicado pela ausência do movimento do tórax. </li><li> Imediatamente após a eutanásia, desangrar, cortando abrir a caixa torácica, perfurando o átrio direito, e imergindo a carcaça do mouse em um amplo volume de (~ 500 ml) de gelado Krebs solução (4 ° C) aeradas com carbogênio (95% O 2 , 5% de CO 2). </li><li> Remova cuidadosamente todas as vísceras, mas os dois pontos e pélvicas órgãos. Transecto o mouse pela metade em todo o segmento da coluna vertebral T12 ligeiramente acima do diafragma torácico e transferir a metade caudal para uma câmara de dissecção contendo gelo frio, borbulhar solução Krebs. </li><li> Sob um microscópio estereoscópico, remover a bexiga e os órgãos reprodutivos, ao seccionar os seus cruzamentos para a uretra, e remova o descendente / aorta abdominal até que se bifurca em artérias ilíacas comuns. Livre o PN ou o LSN de seu surrounding tecidos por dissecção romba e siga o nervo do lado de fora da crista ilíaca até o seu ponto de entrada ventral na L6 e S1 coluna vertebral (por PN) ou T13 e L1 coluna vertebral (por LSN). </li><li> Corte a sínfise púbica e à direita e articulações do acetábulo esquerda, e remova o osso ilíaco. Cuidadosamente livre tanto o PN ou LSN do músculo ligado e do tecido conjuntivo de perto da colorectum até onde o nervo entra na coluna vertebral. </li><li> Ressecar cuidadosamente o osso ilíaco para expor o colorectum distal. Dissecar o colorectum distal com o PN anexado ou LSN no continuum. </li><li> Transferir a colorectum com o nervo ligado ao compartimento da câmara de banho de tecido. Remover excesso de tecido conjuntivo por mais dissecação, e abrir o colorectum longitudinalmente ao longo da fronteira anti-mesentérica. </li><li> Com o lado da mucosa voltada para cima, o pino da borda mesentérica do colorectum adjacente ao compartimento de gravação para a base de silicone da chamber e anexar o comprimento antimesentérica do colorectum a um ancinho de ganchos ligados a um actuador de força (ilustrada na Figura 1 e fotografado na Figura 2A). </li><li> Estender o LSN PN ou no compartimento de gravação, o qual está ligado ao compartimento de banho por um buraco de rato e portão. Cuidadosamente, coloque o tronco do nervo sobre um espelho de vidro pequeno no compartimento de gravação, o que proporciona uma superfície hidrófila para o nervo para aderir. Superfuse compartimento do banho com água morna (30-32 ° C), solução de Krebs oxigenada e encher o compartimento de gravação com óleo mineral. </li></ol> Gravação 3. Single-fibra e localização do campo receptivo <ol><li> Retire cuidadosamente de volta o epineuro (bainha do nervo) do PN ou LSN, ao microscópio estereoscópico em alta ampliação (50 - 60X). Usando uma pinça fina, provocar o tronco do nervo em 5-8 feixes de nervos de ~ 100 m de espessura. </li><li> Coloque a referência de platina-irídioeléctrodo em contacto com a solução de Krebs na câmara de tecido. Sequencialmente colocar os feixes de nervos individuais sobre o eléctrodo de gravação feitos do mesmo material. </li><li> Use um pincel macio para evocar APs dos aferentes colorretais por acariciando acima e abaixo da superfície colorectal. Localize o pacote (s) de nervos que inervam o cólon através AP detectável (potencial de ação) gravações. NOTA: A PN e LSN também inervam a bexiga e outros órgãos pélvicos. </li><li> Use um par de 30 g pontas de agulha para dividir ainda mais o feixe de nervos em filamentos finos fascículo de ~ 10 mm de espessura e coloque um filamento indivíduo para o eletrodo de registro. </li><li> Coloque o eletrodo concêntrico rodada de ponta perpendicular à superfície da mucosa para excitar eletricamente terminações aferentes na intensidade suprathreshold estímulo (10 mA magnitude, 0,5 duração ms @ 0,3 Hz), que produz um raio de propagação mm atual ~ 2. Mova o eletrodo sistematicamente (~ 1,5 passos mm) Ao longo do comprimento e largura do colorectum achatadas para localizar terminações receptivas. </li><li> Quando um final aferentes está animado, ajustar a posição do eletrodo para identificar o local da ativação (campo receptivo, RF) que requer intensidade mínima de estímulo (limiar de estímulo). Descarte terminações com um limiar de estímulo&gt; 3 mA 19. </li><li> Calcula-se a velocidade de condução (CV) a partir de 1) a distância entre o eléctrodo estimulante no campo receptivo (RF) e o local de gravação e 2) o atraso na condução (por exemplo, a Figura 2B) entre o artefacto de estímulo e o aparecimento do potencial de acção . CV (m / s) = distância (mm) / atraso de condução (ms). </li></ol> 4. Classificação Funcional de Mechanosensitive colorretais Aferentes <ol><li> Depois de localizar um RF pela estimulação elétrica, aplicam-se as seguintes três estímulos mecânicos para a RF: <ol><li> Conduzir o estímulo sondagem pressionando a ponta de uma calibrated von Frey-like monofilamento de nylon (0,4 e 1 g vigor) perpendicularmente ao RF na colorectum achatada. </li><li> Conduzir o estímulo acariciando acariciando gentilmente a mucosa retal com uma multa fio de nylon de filamento (10 mg vigor) para gerar uma pequena tensão de corte superficial na RF. </li><li> Conduzir o trecho circular usando uma força atuador controlado por computador, o que proporciona uma força trecho em rampa (0-170 mN em 5 mn / seg) em direção circunferencial ao longo da borda anti-mesentérica do colorectum via o rake de ganchos descritos no passo 2.8 . </li></ol></li><li> Classifique aferentes como serosa (responder apenas a despontar sondagem), mucosa (responder a mucosa acariciando e neutralizar sondagem), muscular (responder ao estiramento circunferencial e neutralizar sondagem) muscular / mucosa (responder ao estiramento circunferencial, mucosa acariciando e neutralizar sondagem), ou MIA (não responsivos a qualquer um dos três estímulos mecânicos). </li><li> Para aferentes mesentéricos (apenas eminervação LSN) que são difíceis de ativar seletivamente pela estimulação elétrica, localize suas terminações receptivas acariciando mecânica / sondagem do mesentério. </li><li> Para aferentes sensíveis ao estiramento muscular e muscular (-mucosas), determinar o limiar de resposta, que é definida como a força que evoca o primeiro AP durante trecho em rampa. </li><li> Para aferentes serosa, gravar as suas respostas a ascendente níveis de pontuada sondagem do campo receptivo impulsionado pela força do atuador controlado por computador. </li></ol> 5. Chemical Aplicação / Modulação da Endings Receptivo <ol><li> Grave uma resposta de linha de base a um estímulo mecânico (ou seja, a resposta ao trecho em rampa, pontuada de sondagem, ou mucosa carícias). </li><li> Revestir a borda inferior de um pedaço de tubo (latão ou aço inoxidável, 10 mm de altura e 4 x 4 mm 2 quadrado ou 4 - 5 mm de diâmetro) com vaselina e colocá-lo sobre o campo receptivo no colorectum. </li><li> Removera solução de Krebs no interior do tubo, e exponha o fim receptivo para o 3 - 5 min a 170 ul da solução que contém o produto químico (s) a ser testado. </li><li> Monitorar a resposta das vias aferentes durante a aplicação de produtos químicos (aferentes são alguns quimiosensível). </li><li> Remover a solução química e tubos para terminar a acção do produto químico. Dentro de 4-6 min, testar a resposta de aferentes ao mesmo estímulo mecânico como na resposta de linha de base. </li><li> Reaplique o estímulo mecânico novamente após período suficiente de wash-out (&gt; 15 min). </li></ol> 6. spikes Gravação e Discriminando AP <ol><li> Digitalizar os sinais elétricos gravados a partir de axônios em 20 kHz e salvar os dados para um computador. Monitorar o sinal on-line por um monitor de áudio. </li><li> Analisar os pontos AP off-line e discriminar unidades individuais com base em análise de componentes principais das formas de onda de pico individuais 25. NOTA: Um registro não deve conter mais thum duas unidades activas facilmente discrimináveis. </li></ol>

<ol><li>Naliboff, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+two+distinct+perceptual+alterations+in+irritable+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Evidence for two distinct perceptual alterations in irritable bowel syndrome.</a> Gut. 41, 505-512 (1997).</li>
<li>Verne, G. N., Robinson, M. E., Vase, L., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+visceral+and+cutaneous+hyperalgesia+by+local+rectal+anesthesia+in+irritable+bowel+syndrome+%28IBS%29+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Reversal of visceral and cutaneous hyperalgesia by local rectal anesthesia in irritable bowel syndrome (IBS) patients.</a> Pain. 105, 223-230 (2003).</li>
<li>Verne, G. N., Sen, A., Price, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrarectal+lidocaine+is+an+effective+treatment+for+abdominal+pain+associated+with+diarrhea-predominant+irritable+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Intrarectal lidocaine is an effective treatment for abdominal pain associated with diarrhea-predominant irritable bowel syndrome.</a> Journal of Pain. 6, 493-496 (2005).</li>
<li>Chey, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linaclotide+for+irritable+bowel+syndrome+with+constipation%3A+a+26-week%2C+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+trial+to+evaluate+efficacy+and+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Linaclotide for irritable bowel syndrome with constipation: a 26-week, randomized, double-blind, placebo-controlled trial to evaluate efficacy and safety.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1702-1712 (2012).</li>
<li>Rao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+12-week%2C+randomized%2C+controlled+trial+with+a+4-week+randomized+withdrawal+period+to+evaluate+the+efficacy+and+safety+of+linaclotide+in+irritable+bowel+syndrome+with+constipation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">A 12-week, randomized, controlled trial with a 4-week randomized withdrawal period to evaluate the efficacy and safety of linaclotide in irritable bowel syndrome with constipation.</a> Am J Gastroenterol. 107, 1714-1724 (2012).</li>
<li>Busby, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+properties%2C+metabolism%2C+and+disposition+of+linaclotide%2C+a+novel+therapeutic+peptide+approved+for+the+treatment+of+irritable+bowel+syndrome+with+constipation+and+chronic+idiopathic+constipation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic properties, metabolism, and disposition of linaclotide, a novel therapeutic peptide approved for the treatment of irritable bowel syndrome with constipation and chronic idiopathic constipation.</a> J Pharmacol Exp Ther. 344, 196-206 (2013).</li>
<li>Mei, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+chemosensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Intestinal chemosensitivity.</a> Physiol Rev. 65, 211-237 (1985).</li>
<li>Mei, N., Lucchini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+data+and+ideas+on+digestive+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Auton+Nerv+Syst%22%5BJournal%5D)">Current data and ideas on digestive sensitivity.</a> J Auton Nerv Syst. 41, 15-18 (1992).</li>
<li>Su, X., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat+are+polymodal+in+character%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat are polymodal in character.</a> J Neurophysiol. 80, 2632-2644 (1998).</li>
<li>McMahon, S. B., Morrison, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+neurones+with+long+projections+activated+from+the+abdominal+viscera+of+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Spinal neurones with long projections activated from the abdominal viscera of the cat.</a> J Physiol. 322, 1-20 (1982).</li>
<li>Cervero, F., Sann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+evoked+responses+of+afferent+fibres+innervating+the+guinea-pig%27s+ureter%3A+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanically evoked responses of afferent fibres innervating the guinea-pig's ureter: an in vitro study.</a> J Physiol. 412, 245-266 (1989).</li>
<li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensitive+properties+of+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+urinary+bladder+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Mechanosensitive properties of pelvic nerve afferent fibers innervating the urinary bladder of the rat.</a> J Neurophysiol. 72, 2420-2430 (1994).</li>
<li>Sengupta, J. N., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mechanosensitive+pelvic+nerve+afferent+fibers+innervating+the+colon+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of mechanosensitive pelvic nerve afferent fibers innervating the colon of the rat.</a> J Neurophysiol. 71, 2046-2060 (1994).</li>
<li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+unmyelinated+afferent+fibres+by+mechanical+stimuli+and+inflammation+of+the+urinary+bladder+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Activation of unmyelinated afferent fibres by mechanical stimuli and inflammation of the urinary bladder in the cat.</a> J Physiol. 425, 545-562 (1990).</li>
<li>Habler, H. J., Janig, W., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+type+of+unmyelinated+chemosensitive+nociceptor+in+the+acutely+inflamed+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Actions%22%5BJournal%5D)">A novel type of unmyelinated chemosensitive nociceptor in the acutely inflamed urinary bladder.</a> Agents Actions. 25, 219-221 (1988).</li>
<li>Brierley, S. M., Jones, R. C. 3rd, Gebhart, G. F., Blackshaw, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Splanchnic+and+pelvic+mechanosensory+afferents+signal+different+qualities+of+colonic+stimuli+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Splanchnic and pelvic mechanosensory afferents signal different qualities of colonic stimuli in mice.</a> Gastroenterology. 127, 166-178 (2004).</li>
<li>Meyer, R. A., Davis, K. D., Cohen, R. H., Treede, R. D., Campbell, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+insensitive+afferents+%28MIAs%29+in+cutaneous+nerves+of+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanically insensitive afferents (MIAs) in cutaneous nerves of monkey.</a> Brain Res. 561, 252-261 (1991).</li>
<li>Handwerker, H. O., Kilo, S., Reeh, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unresponsive+afferent+nerve+fibres+in+the+sural+nerve+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Unresponsive afferent nerve fibres in the sural nerve of the rat.</a> J Physiol. 435, 229-242 (1991).</li>
<li>Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+silent+afferents+in+the+pelvic+and+splanchnic+innervations+of+the+mouse+colorectum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of silent afferents in the pelvic and splanchnic innervations of the mouse colorectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G170-G180 (2011).</li>
<li>Feng, B., La, J. H., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irritable+bowel+syndrome%3A+methods%2C+mechanisms%2C+and+pathophysiology.+Neural+and+neuro-immune+mechanisms+of+visceral+hypersensitivity+in+irritable+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Irritable bowel syndrome: methods, mechanisms, and pathophysiology. Neural and neuro-immune mechanisms of visceral hypersensitivity in irritable bowel syndrome.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G1085-G1098 (2012).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+sensitization+of+mechanosensitive+and+-insensitive+afferents+in+mice+with+persistent+colorectal+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-term sensitization of mechanosensitive and -insensitive afferents in mice with persistent colorectal hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, G676-G683 (2012).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+colorectal+afferent+function+associated+with+TNBS-induced+visceral+hypersensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered colorectal afferent function associated with TNBS-induced visceral hypersensitivity in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G817-G824 (2012).</li>
<li>Feng, B., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+stretch-sensitive+pelvic+nerve+afferents+innervating+mouse+distal+colon+and+rectum%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of stretch-sensitive pelvic nerve afferents innervating mouse distal colon and rectum.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 298, G402-G409 (2010).</li>
<li>Feng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+guanylate+cyclase-C+attenuates+stretch+responses+and+sensitization+of+mouse+colorectal+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activation of guanylate cyclase-C attenuates stretch responses and sensitization of mouse colorectal afferents.</a> J Neurosci. 33, 9831-9839 (2013).</li>
<li>Jolliffe, I. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJolliffe%2C+IT+%22Principal+component+analysis%22">Principal component analysis</a>. , 2nd, Springer. New York, NY. (2002).</li>
<li>La, J. H., Feng, B., Schwartz, E. S., Brumovsky, P. R., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luminal+hypertonicity+and+acidity+modulate+colorectal+afferents+and+induce+persistent+visceral+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Luminal hypertonicity and acidity modulate colorectal afferents and induce persistent visceral hypersensitivity.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 303, G802-G809 (2012).</li>
<li>Christianson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((plasticity+and+modulation+of+visceral+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">plasticity and modulation of visceral afferents.</a> Brain Research Reviews. 60, 171-186 (2009).</li>
<li>Kiyatkin, M. E., Feng, B., Schwartz, E. S., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+genetic+and+pharmacological+inhibition+of+TRPV1+and+P2X3+attenuates+colorectal+hypersensitivity+and+afferent+sensitization%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Combined genetic and pharmacological inhibition of TRPV1 and P2X3 attenuates colorectal hypersensitivity and afferent sensitization.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G638-G648 (2013).</li>
<li>Brumovsky, P. R., Feng, B., Xu, L., McCarthy, C. J., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystitis+increases+colorectal+afferent+sensitivity+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cystitis increases colorectal afferent sensitivity in the mouse.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 297, G1250-G1258 (2009).</li>
<li>Shinoda, M., Feng, B., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+and+central+P2X+receptor+contributions+to+colon+mechanosensitivity+and+hypersensitivity+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Peripheral and central P2X receptor contributions to colon mechanosensitivity and hypersensitivity in the mouse.</a> Gastroenterology. 137, 2096-2104 (2009).</li>
<li>Tanaka, T., Shinoda, M., Feng, B., Albers, K. M., Gebhart, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+visceral+hypersensitivity+by+glial+cell+line-derived+neurotrophic+factor+family+receptor+%CE%B1-3+in+colorectal+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of visceral hypersensitivity by glial cell line-derived neurotrophic factor family receptor α-3 in colorectal afferents.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 300, G418-G424 (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

A preparação in vitro colorectum-nervo descrito aqui tem provado ser uma abordagem poderosa para estudar funções de codificação neural de aferentes colorretais individuais, que bem complementa outras abordagens não-funcionais (por exemplo, estudos celulares, moleculares e histológicos) sobre os neurônios sensoriais viscerais ( veja o comentário 27 para detalhes). Mecanismos neuronais que contribuem para a nocicepção e hipersensibilidade colorectal longo prazo foram revelados e manipulações f...

Dor e hipersensibilidade são predominantes as queixas dos pacientes que sofrem de desordens gastrointestinais funcionais, incluindo o síndrome do intestino irritável (IBS), que existem na ausência de pathobiological causa aparente ou danos nos tecidos. Por exemplo, pacientes com SII exibem hipersensibilidade, incluindo respostas intensificadas para distensão rectal balão e aumento da sensibilidade na função normal do intestino, bem como a hipersensibilidade de referência somáticas (isto é, sensibilidade à palpação da zona abdominal) 1. Porque direccionamento aferentes colorectal tem provado ser eficaz no alívio da dor e hipersensibilidade em pacientes com IBS (por exemplo, a instilação intra-rectal de anestésicos locais 2,3; ingestão oral da guanilato ciclase C-agonista linaclotide 4-6), uma melhor compreensão do inervação aferente do colorectum é importante. Aferentes viscerais, incluindo aferentes colorretais, São capazes de responder às modalidades químicos / em nutrientes e térmicos (por exemplo, 7-9). No entanto, aferentes viscerais que respondem a estímulos mecânicos (ou seja, aferentes mechanosensitive) ter sido o mais estudado porque estímulos mecânicos (por exemplo, distensão luminal, estiramento) são aqueles que normalmente dão origem a sensações conscientes, incluindo desconforto e dor 10-16. Além disso, as vísceras também são inervados por aferentes insensíveis mecanicamente (MIAs), vulgarmente designados por silenciosas ou dormir nociceptors 17. Em condições fisiológicas normais, MIAs não respondem ao estímulo mecânico ou ter resposta muito alta limiares 18, mas pode se tornar ativo e adquirir mecanosensibilidade em condições fisiopatológicas e contribuir para a hipersensibilidade. Usando a preparação in vitro e protocolo descrito aqui, nós desenvolvemos e empregou uma estratégia de estímulo elétrico para o mar<html> RCH para terminações receptivas, permitindo a identificação imparcial de ambas as terminações mechanosensitive e MIA no colorectum 19. A inervação colorectal é derivado splanchnic lombar (LSN) e do nervo pélvico (PN) vias, e inclui aferentes colorretal que podem ser classificados em cinco classes mechanosensitive (serosa, mucosa, muscular, músculo-mucosa, mesentérica) e uma classe MIA 20. Usando esta preparação in vitro, verificou-se que MIAs colorretais adquirido mecanosensibilidade (sensibilizar) após uma breve exposição de seus campos receptivos a uma sopa inflamatória (IS), que sensibilizados 71% dos MIAs na via PN e 23% das MIAs na via LSN 19. Nós também documentada sensibilização a longo prazo (até 28 dias) de MI As no contexto da hipersensibilidade visceral comportamentais de longa duração (isto é, nos ratos que receberam os tratamentos com zimosan intracolónica 21 ou ácido 2,4,6-trinitrobenzenossulfónico (TNBS) 22) . jove_content &quot;&gt; Entre aferentes mechanosensitive, aferentes musculares e muscular-mucosas são as únicas classes que tonicamente codificam trecho circunferencial da colorectum (ou seja, são stretch-sensitive) e servir à codificação de nocivo distensão colorectal 23,24. Usando um computador controlado- força do actuador, foi aplicado um padrão, homogénea e reprodutível em rampa estiramento na direcção circunferencial do tecido colorectal achatada e mais categorizados aferentes sensíveis ao estiramento tão baixo limiar e de alto limiar 23. Além disso, o curso de tempo da sensibilização de estiramento aferentes sensíveis ao após zymosan intracolônica 21 ou 22 TNBS tratamento corresponde ao início, persistência e / ou recuperação de hipersensibilidade visceral comportamental, sugerindo um papel de aferentes colorretais sensíveis ao estiramento na dor visceral e hipersensibilidade.

<table><tbody><tr><td>Microscópio estéreo Leica MZ16</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Câmera Leica IC D</td><td>Leica Microsystems Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instrumentos de precisão do mundo do amplificador</td><td>, Inc.</td><td>SYS-DAM80</td><td>Amplificador diferencial de baixo ruído</td></tr><tr><td>Câmara de tecido de dois compartimentos</td><td></td> Power1401 <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Cambridge Electronic Design Limited</td><td>Power1401</td><td>Aquisição de dados, entrada/saída de sinal analógico</td></tr><tr><td>Spike2 v5.02</td><td>Cambridge Electronic Design Pacote de</td><td>software limitado</td><td></td> que funciona com o monitor de áudio Power1401</tr><tr><td></td><td>Natus</td><td>Am </td><td></td>8</tr><tr><td>Estimulador de pulso quadrado</td><td>Natus</td><td>S48</td><td>Para fornecer estímulos elétricos</td></tr><tr><td>Unidade de isolamento fotoelétrico</td><td>Natus</td><td>PSIU6</td><td>Isolamento de estímulo para reduzir o ruído</td></tr><tr><td>Microeletrodo bipolar concêntrico</td><td>FHC Inc.</td><td>CBFFG75</td><td>Para fornecer estímulos elétricos</td></tr><tr><td>Sistema de alavanca de modo duplo</td><td>Aurora Scientific Inc.</td><td>Série 300C</td><td>Para fornecer estímulos mecânicos</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td>Fórceps com pontas finas</td></tr></tbody></table>

in vitro caracterização funcional de rato colorretal aferente endings

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

Este vídeo mostra em pormenor um protocolo de fibra única gravação electrofisiológico in vitro utilizando uma preparação colorectum rato-do nervo. A abordagem permite a identificação imparcial e caracterização funcional de aferentes colorretais individuais. Gravações extracelulares de potenciais de acção propagadas (APs) que se originam a partir de um ou alguns aferente (ou seja, de fibra única) campos receptivos (RFS) na colorectum fascículos são feitos de fibras nervosas provocavam. O colorectum é removido quer com o pélvica (PN) ou splanchnic lombar (LSN) do nervo ligado e abertos longitudinalmente. O tecido é colocado numa câmara de registo, fixado plana e perfundidas com solução de Krebs oxigenada. Estimulação elétrica Focal é usado para localizar as terminações aferentes colorretais, que são ainda mais testadas por três estímulos mecânicos distintos (sem corte sondagem, acariciando mucosa e stretch circunferencial) para categorizar funcionalmente os aferentes em cinco mechanosensiaulas operatório. Endings respondendo a nenhum desses estímulos mecânicos são classificados como aferentes mecanicamente insensíveis (MIAs). Ambos mechanosensitive e MIAs pode ser avaliado para a sensibilização (ou seja, a resposta melhorada, limiar reduzida e / ou aquisição de mecanosensibilidade) por exposição localizada entre os FR para produtos químicos (por exemplo, sopa inflamatória (IS), a capsaicina, trifosfato de adenosina (ATP)). Nós descrevemos o equipamento e preparação de gravação colorectum-nervo, colheita de colorectum com anexado PN ou LSN, identificação de FR no colorectum, gravação de fibra única de fascículos, e aplicação localizada de produtos químicos para a RF. Além disso, os desafios de preparação e aplicação de estimulação mecânica padronizada também são discutidos.

A configuração está ilustrada na Figura 1. Ela inclui uma câmara de tecido feito à medida que abriga o colorectum num compartimento de banho revestido de silicone e o nervo ligado num compartimento cheio com óleo mineral contígua. A câmara de dois compartimentos foi usinado a partir de um bloco sólido de plástico acrílico por uma máquina CNC; parte inferior de ambos os compartimentos foi posteriormente revestido com silicone firme para permitir a fácil pin para baixo do tecido colorretal. APs extracelul...

Este vídeo demonstra um protocolo para a realização de gravações eletrofisiológicas de fibra única em uma preparação in vitro do nervo colorreto de camundongo.

In vitro caracterização funcional de Rato Colorretal Aferente Endings

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

O objetivo geral do experimento a seguir é caracterizar funcionalmente terminações nervosas aferentes extrínsecas no reto do camundongo in vitro. Isso é conseguido por meio da coleta do cólon reto e do nervo esplâncnico pélvico ou lombar associado em continuidade, colocando-se o tecido em uma câmara de gravação in vitro. Como segundo passo, o tronco do nervo esplâncnico pélvico ou lombar é dividido em finos filamentos, de modo que gravações eletrofisiológicas de fibra única possam ser realizadas em axônios nervosos individuais. Em seguida, terminações nervosas individuais do cólon reto são identificadas por estimulação elétrica imparcial dos campos receptivos e classificadas funcionalmente com base nos perfis de resposta a três estímulos mecânicos distintos.Além disso, as respostas a produtos químicos aplicados aos terminais nervosos podem ser testadas isolando o campo receptivo com um tubo de latão e substituindo a solução pela solução contendo a substância química ou mistura de substâncias químicas. Os resultados mostram que o cólon-retal de camundongo é inervado por cinco classes diferentes de ENs mecanossensíveis. Além disso, cerca de 25% dos ENs coloretais são nociceptores mecanicamente insensíveis ou silenciosos.Este método é utilizado por nós e por outros pesquisadores para estudar a inervação sensorial do cólon reto. Estamos interessados em utilizar essa abordagem de pesquisa porque muitos distúrbios gastrointestinais estão associados à sensibilização ou a uma alteração na excitabilidade da inervação sensorial. Nosso interesse em compreender os mecanismos da sensibilização está relacionado ao desejo de ajudar a desenvolver estratégias terapêuticas que possam ser úteis para modular a dor e o desconforto tipicamente associados a esses distúrbios gastrointestinais, como a síndrome do intestino irritável.A demonstração visual deste método é essencial, pois os passos de dissecação do tecido e de divisão do nervo são muito difíceis de dominar. Os nervos inovantes. O reto distal pode ser facilmente danificado durante a dissecação.Assim, uma dissecação cuidadosa e os passos de separação são realmente essenciais para aqueles que desejam replicar este experimento. Imediatamente após a eutanásia de um camundongo, realize a exsanguinação, abra a cavidade torácica, perfure o átrio direito e imerja o cadáver do camundongo em cerca de meio litro de solução Creb gelada. Em seguida, remova cuidadosamente todas as vísceras, exceto o cólon e os órgãos pélvicos.Em seguida, seccione o corpo do camundongo aproximadamente no nível de T12, ligeiramente acima do diafragma torácico, e transfira a metade caudal do corpo para uma câmara de dissecação contendo solução de Krebs gelada e aerada. Sob um estereoscópio, remova a bexiga e os órgãos reprodutivos seccionando-os nos pontos de junção com a uretra. Além disso, remova a aorta descendente até o ponto em que se bifurca nas artérias ilíacas comuns.Agora, libere os nervos esplâncnicos pélvicos ou lombares dos tecidos circundantes. Siga os nervos a partir da borda externa da crista ilíaca até o ponto de entrada na coluna vertebral. Os nervos pélvicos entram nas vértebras L6 e S1, e os nervos esplâncnicos lombares entram em T13 e L1, conforme demonstrado.Aqui está a dissecação dos nervos pélvicos esquerdo e direito. Em seguida, corte a sínfise púbica e os articulações acetabulares direita e esquerda. Depois, remova o osso ilíaco. Após a remoção do ilíaco, dissecione o reto cólon distal com o nervo anexo livre.O nervo está ligado ao músculo e ao tecido conjuntivo circundantes. O nervo é suscetível a danos mecânicos. Devemos liberá-lo do tecido ao seu redor, portanto, é necessário ter cuidado especial para evitar puxar ou comprimir o nervo.Em seguida, transfira o cólon-retal com o nervo anexado para a câmara de tecido. Abra o cólon-retal longitudinalmente ao longo da borda anti-mesentérica e posicione o lado mucoso do cólon-retal voltado para cima. Em seguida, estenda o nervo até o compartimento de gravação, que é conectado ao compartimento do banho por um orifício e uma comporta.Posicione o tronco nervoso sobre um pequeno espelho de vidro. O espelho é hidrofílico e o nervo aderirá a ele. Agora, ao lado do compartimento de registro, fixe a borda mesentérica do reto cólico.Agora, suprime uma câmara de banho com solução Creb aquecida e oxigenada e preencha a câmara de gravação com óleo mineral para finalizar a montagem. Prenda o segmento antimesentérico do cólon reto a um conjunto de ganchos conectados a um atuador de força sob microscópio estereoscópico com alta ampliação. Remova cuidadosamente a bainha nervosa do nervo pélvico ou esplâncnico lombar isolado utilizando pinças finas.Separar o tronco nervoso em cinco a oito feixes nervosos, cada um com cerca de 100 mícrons de espessura. Agora, colocar o eletrodo de referência em contato com a solução de Krebs na câmara de tecidos. Em seguida, posicionar sequencialmente os feixes nervosos individuais sobre o eletrodo de registro para evocar potenciais de ação dos nervos retocorretais.Passe suavemente uma escova de pintura macia sobre a superfície colorretal. Assim, identifique o(s) feixe(s) nervoso(s) que inerva(m) o cólon. Agora, utilizando as pontas de uma agulha de calibre 30, divida ainda mais o feixe nervoso em filamentos com espessura de 10 mícrons e coloque um dos filamentos sobre o eletrodo de registro.Esta etapa exige um alto nível de coordenação olho-mão e destreza. Em seguida, para excitar eletricamente os terminais nervosos aferentes, posicione o eletrodo concêntrico de ponta redonda perpendicularmente à superfície da mucosa e estime com uma intensidade acima do limiar. Isso produz uma dispersão de corrente num raio de dois milímetros.Para localizar terminações receptivas, mova o eletrodo sistematicamente em passos de 1,5 milímetro ao longo do comprimento e da largura do reto achatado. Quando uma terminação aferente for excitada, ajuste a posição do eletrodo e a intensidade do estímulo para identificar com precisão o campo receptor que exige a menor intensidade de estímulo para responder. Se o limiar do estímulo for superior a três miliampères, descarte essa terminação nervosa e passe para o estudo de outro filamento nervoso.Agora calcule a velocidade de condução com base na distância entre o eletrodo estimulante no campo receptivo e o local de registro, e com base no atraso de condução entre o artefato do estímulo e o início do potencial de ação. Após localizar um campo receptivo por meio do estímulo elétrico, aplique três estímulos mecânicos. Primeiro, aplique um estímulo de sondagem pressionando perpendicularmente a ponta de um filamento de von Frey calibrado, como um monofilamento de náilon, em direção ao campo receptivo no reto-colon achatado.Utilize monofilamentos que produzem uma força de 0,4 grama e uma força de um grama. Em segundo lugar, produza um estímulo de escovação ao percorrer suavemente a mucosa colorretal com um filamento fino de náilon que exerça uma força de 10 miligramas, gerando uma pequena tensão de cisalhamento na superfície do campo receptivo. Em terceiro lugar, realize o estiramento circunferencial utilizando um atuador de força controlado por computador.Faça com que aplique uma força rampa esticada em direção circunferencial ao longo da borda antimesentérica do cólon-retal. Agora, classifique o SNE como serosa mucosa muscular, muscular mucosa ou aferente mecanicamente insensível ao MIAA. Com base nos resultados dos três testes.Inicie registrando uma resposta basal a um estímulo mecânico conforme a seção anterior, utilizando uma sondagem mecânica rampada, circunferencial, de alongamento ou perpendicular para testar a sensibilidade química. Primeiro, recubra a borda inferior de um pedaço de tubo de latão ou aço inoxidável com vaselina e posicione-o sobre o campo receptivo no reto cólon. Agora, aspire a solução de Krebs do interior do tubo e substitua a solução por 170 microlitros da solução-teste.Deixe o tubo em posição por três a cinco minutos, monitorando as respostas no aferente. Imediatamente após a remoção do tubo, dentro de quatro a seis minutos, teste a resposta aferente ao mesmo estímulo mecânico utilizado na resposta basal. Após 15 minutos ou mais, pode-se considerar que os reagentes foram eliminados.Em seguida, o estímulo mecânico é aplicado novamente. Para comparação com as formigas da linha de base, um nervo dissecado foi estimulado para localizar um campo receptivo. O campo receptivo foi identificado por meio da resposta de potencial de ação, utilizando o atraso de condução do potencial de ação.A velocidade de condução calculada foi de 0,43 metros por segundo, o que está bem dentro da faixa de uma fibra C não mielinizada. Após identificar o campo receptivo, ele foi sondado perpendicularmente por monofilamentos semelhantes aos von Frey manuais e também levemente acariciado por um filamento fino de náilon manual. As respostas das FRA à sondagem também foram avaliadas por um atuador de força controlado por computador que aplica ao mesmo local no reto, uma série de forças mecânicas precisamente cronometradas e reprodutíveis.Da mesma forma, o estiramento circunferencial do cólon reto foi aplicado pelo mesmo esforço do atuador. As respostas podem ser distinguidas com base nas respostas ao sondagem, ao acariciamento e ao estiramento, sendo que as respostas de um aferente sensível ao estiramento foram evocadas por três estiramentos circunferenciais consecutivos separados por cinco minutos. Os números de potenciais de ação foram uniformemente fixados e exibidos como funções de resposta ao estímulo, revelando alta reprodutibilidade, tanto na magnitude da resposta quanto no limiar de resposta.Em seguida, os seguintes produtos químicos foram aplicados. A ativação direta de ens ocorreu após a aplicação de uma solução hipertônica ácida, depois da aplicação de uma mistura inflamatória a um aferente mecanicamente insensível. Nenhuma ativação da terminação ocorreu, mas a aquisição de sensibilidade menoscópica foi evidente.Um aferente sensível ao estiramento e sensível ao meno também foi sensibilizado ao estiramento mecânico do campo receptivo após a aplicação de uma solução inflamatória. Uma vez dominada a técnica, geralmente leva de três a quatro horas para concluir a dissecação do tecido e obter o registro de fibra única. Um experimento típico leva um dia inteiro do início ao fim. Após assistir a este vídeo, você deverá entender como remover cirurgicamente e coletar o cólon reto com os nervos anexos.Em seguida, será possível realizar registros de fibras Ahern individuais no nervo pélvico ou no nervo esplâncnico lombar, inervando o cólon, utilizando uma estratégia elétrica imparcial de busca. Você então deverá ser capaz de identificar terminações receptoras no reto e testá-las quanto à sensibilidade mecanossensitiva, bem como à sensibilidade química, mediante aplicação direta de substâncias químicas sobre as terminações receptoras. Esta preparação é uma técnica poderosa que permite estudar mecanismos fisiopatológicos, bem como questões fisiológicas básicas no cólon reto.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

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Geração do modelo de alça de cólon proximal de camundongo: um procedimento cirúrgico para gerar alça de cólon proximal e medir a permeabilidade intestinal pela detecção de marcadores fluorescentes no soro após injeção intraluminal

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In vitro caracterização funcional de Rato Colorretal Aferente Endings

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