Name: Modelagem 3D do lateral ventrículos e histológica Caracterização do Tecido Periventricular em humanos e mouse (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 26 s
Description: Aprenda a criar reconstruções 3D dos ventrículos laterais a partir de ressonâncias magnéticas e seções coronárias de cérebros de camundongos. Este método combina modelagem volumétrica com análise imunohistoquímica para mapear a integridade celular do revestimento ventricular em humanos e roedores.

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An NINDS Grant NS05033 (JCC) apoiou este trabalho. Os programas RAC, SURF e OUR da Universidade de Connecticut forneceram suporte adicional.

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Os autores não têm nada a divulgar.

Nós apresentamos ferramentas e protocolos que podem ser utilizados para avaliar a integridade de sistema ventricular do cérebro em ratos e em seres humanos. Estas ferramentas, no entanto, pode também ser aplicada a outras estruturas cerebrais ou sistemas de órgãos que sofrem alterações devido a lesões, doença, ou durante o processo de envelhecimento 14,21,22. As estratégias apresentadas tirar proveito do software que permite o alinhamento de seqüências de RM transversais e longitudinais para gerar representaç...

Um ependimais linhas monocamada de células do sistema ventricular do cérebro fornecendo funções de barreira e de transporte bi-direccionais entre o cerebral fluido espinhal (CSF) e fluido intersticial (ISF) 1-3. Estas funções ajudam a manter o cérebro e no equilíbrio fisiológico 2,3 livre de substâncias tóxicas. Nos seres humanos a perda de porções do revestimento esta, devido a lesão ou doença não parece resultar na substituição regenerativa como encontrado em outros revestimentos epiteliais; em vez de perda de cobertura de célula ependimária parece resultar em astrogliose periventricular com uma malha de astrócitos que abrangem regiões desnudados de células ependimais na superfície do ventrículo. As repercussões graves para mecanismos importantes CSF / troca ISF e de apuramento seria previsível como resultado da perda desta camada epitelial 1,2,4-7. Uma característica comum de envelhecimento humano é ampliado ventrículos laterais (ventriculomegalia) e edema periventricular associadas como observed por ressonância magnética e-fluido recuperação inversa da atenuação de ressonância magnética (MRI / DOM) 8-14. Para investigar a relação entre ventriculomegalia e a organização celular do revestimento do ventrículo, seqüências de RM humanos post-mortem foram combinados com preparações histológicas de tecido periventricular ventrículo lateral. Nos casos de ventriculomegalia, áreas substanciais de gliosis tinha substituído cobertura celular ependymal ao longo da parede do ventrículo lateral. Quando a expansão ventrículo não foi detectado por análise de volume com base em ressonância magnética, o revestimento celular ependimária estava intacto e gliose não foi detectada ao longo do revestimento do ventrículo 6. Esta abordagem combinatória representa a primeira documentação detalhando mudanças abrangentes na integridade celular do revestimento do ventrículo lateral usando preparações wholemount de partes ou toda a parede ventrículo lateral e modelagem 3D dos volumes do ventrículo 6. Várias doenças (doença de Alzheimer, esquizofrenia) e lesões (traumatismo crânio-encefálico)ventriculomegalia mostrar como um recurso neuropatológico cedo. Desnudação de áreas do revestimento celular ependymal assim seria previsto para interferir com a função das células ependymal normal e comprometer o equilíbrio homeostático entre CSF / fluido ISF eo intercâmbio soluto. Assim, um exame mais profundo de mudanças no sistema ventricular, a sua composição celular, ea consequência para estruturas cerebrais subjacentes ou vizinhos acabará por começar a revelar mais sobre a neuropatologia associada com aumento do ventrículo. A falta de dados de imagens multimodais, nomeadamente sequências de dados longitudinais, juntamente com acesso limitado a amostras de tecido histológico correspondente torna a análise de patologias cerebrais humanas difícil. Modelando fenótipos encontrados em envelhecimento humano ou doença muitas vezes pode ser conseguido com modelos do rato e modelos animais tornar-se um dos nossos melhores meios para explorar questões sobre iniciação doença humana e progressão. Vários estudos incamundongos jovens saudáveis ​​têm descrito a citoarquitetura das paredes do ventrículo lateral e o nicho de células-tronco subjacente 4,7-15. Esses estudos foram alargados para incluir a modelagem 3D e análise celular das paredes do ventrículo através de envelhecimento 6,15. Nem gliosis periventricular nem ventriculomegalia são observados em ratos envelhecidos, em vez ratos exibir uma zona subventicular relativamente robusta (SVZ) tronco nicho de células subjacente a uma célula ependymal intacto forro 6,15. Assim, as diferenças específicas de espécies de batimento existir tanto na manutenção geral e integridade do revestimento ventrículo lateral durante o processo de envelhecimento 6,15. Portanto, para melhores ratinhos uso para interrogar condições encontradas em seres humanos, as diferenças entre as duas espécies têm de ser caracterizada apropriadamente e considerado em qualquer paradigma de modelagem. Aqui, apresentamos os procedimentos para avaliar as mudanças longitudinais para os ventrículos laterais e do tecido periventricular associadas em seres humanos e mouse. Nossos procedimentos incluem renderização em 3D e volumetria do mouse e ventrículos humanos e uso de análise imuno-histoquímica das preparações inteiras de montagem de tecido periventricular para caracterizar tanto organização e estrutura celular. Em conjunto, estes procedimentos proporcionam um meio para caracterizar as alterações no sistema ventricular e tecido periventricular associado.

<table><tbody><tr><td>Fosfato tamponado salino (PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA)</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>19210</td><td>Uso a 4% em PBS, 4 &graus; C</td></tr><tr><td>Normal Horse Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16050</td><td>10% em PBS-TX (v/v)</td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210</td><td>10% em PBS-TX (v/v)</td></tr><tr><td>Triton X-100 (TX)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>0,1% em PBS (v/v)</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Fluorescência</td><td>Zeiss</td><td>Imager.M2</td><td></td></tr><tr><td>Câmera</td><td>Hamamatsu</td><td>ORCA R2</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Controlador de Estágio</td><td>Ludl Produtos Eletrônicos MAC</td><td>6000</td><td></td></tr><tr><td>Software de Estériologia</td><td>MBF Bioscience</td><td>Stereo Investigator 11</td><td></td></tr><tr><td>Software de Estreologia</td><td>ImageJ / NIH</td><td>NIH freeware</td><td></td></tr><tr><td>3D Software de reconstrução</td><td>MBF Bioscience</td><td>Neurolucida Explorer</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Confocal</td><td>Leica</td><td>TCS SP2</td><td></td></tr><tr><td>MRI Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Freesurfer</td><td>https://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/fswiki/DownloadAndInstall</td><td>Segmentação e Volume</td><td></td></tr><tr><td>ITK-Snap</td><td>http://www.itksnap.org/pmwiki/pmwiki.php</td><td></td><td>Segmentação e</td></tr><tr><td>Análise de Volume Multi-imagem GUI (Mango)</td><td>http://ric.uthscsa.edu/mango/ </td><td></td><td>Equipamento</td></tr> de <tr><td>montagem longitudinal Equipamento</td><td></td><td></td><td></td>de montagem inteira</tr><tr><td>22.5&deg; faca de facada reta microcirúrgica</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9854830</td><td></td></tr> prato de dissecação de fundo de <tr><td>cera parafilme</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td>pinos</tr><tr><td>pinça</td><td></td><td></td><td></td>fina</tr><tr><td>aquapolymount</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>Leica</td><td>MZ95</td><td></td></tr><tr><td>Whole Mount Anticorpos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>camundongo anti-b-catenina</td><td>BD Bioschiences, San Jose, CA, EUA</td><td></td><td>1:250</td></tr><tr><td>cabra anti-GFAP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td></td><td>1:250</td></tr><tr><td>coelho anti-AQP4 (aquaporina-4)</td><td>&nbsp; Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1:400</td></tr><tr><td>Anticorpos</td><td></td><td></td><td></td>Coronais</tr><tr><td>Anti-S100&beta; anticorpo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1:500</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Life Technologies</td><td>D-1306</td><td>10 &micro; g/ml em PBS</td></tr></tbody></table>

modelagem 3d do lateral ventrículos e histológica caracterização do tecido periventricular em humanos e mouse

3D Modeling of the Lateral Ventricles and Histological Characterization of Periventricular Tissue in Humans and Mouse

O sistema ventricular transporta e circula o líquido cefalorraquidiano (LCR) e facilita a depuração de solutos e toxinas do cérebro. As unidades funcionais dos ventrículos são células epiteliais ciliadas denominadas células ependimárias, que revestem os ventrículos e, por meio da ação ciliar, são capazes de gerar fluxo laminar de LCR na superfície do ventrículo. Essa monocamada de células ependimárias também fornece funções de barreira e filtração que promovem a troca entre os fluidos intersticiais cerebrais (ISF) e o LCR circulante. As alterações bioquímicas no cérebro são refletidas na composição do LCR e a destruição do ependima pode perturbar o delicado equilíbrio da troca de LCR e FSI. Em humanos, existe uma forte correlação entre a expansão do ventrículo lateral e o envelhecimento. A ventriculomegalia associada à idade pode ocorrer mesmo na ausência de demência ou obstrução do fluxo liquórico. A causa exata e a progressão da ventriculomegalia são frequentemente desconhecidas; no entanto, ventrículos aumentados podem mostrar perda regional e, muitas vezes, extensa da cobertura de células ependimárias com astrogliose da superfície do ventrículo e edema periventricular associado substituindo a monocamada funcional de células ependimárias. Usando exames de ressonância magnética junto com tecido cerebral humano post-mortem, descrevemos como preparar, visualizar e compilar renderizações 3D dos volumes do ventrículo lateral, calcular os volumes do ventrículo lateral e caracterizar o tecido periventricular por meio da análise imuno-histoquímica de preparações de tecido da parede do ventrículo lateral em face. Análises correspondentes de tecido cerebral de camundongo também são apresentadas, apoiando o uso de modelos de camundongos como meio de avaliar alterações nos ventrículos laterais e no tecido periventricular encontradas no envelhecimento e na doença humana. Juntos, esses protocolos permitem investigações sobre a causa e o efeito da ventriculomegalia e destacam técnicas para estudar a saúde do sistema ventricular e suas importantes funções de barreira e filtração no cérebro.

Traçado do contorno dos ventrículos laterais do rato com base em imunomarcadas 50 mm cortes coronais e reconstruções em 3D (Figura 3) permite que os dados de volume a ser coletado em diferentes paradigmas experimentais utilizando o mouse como um sistema modelo para a doença ou lesão. Crítico para este procedimento é a exclusão de regiões onde as paredes ventriculares laterais aderir uns aos outros. Por subsegmenting regiões dos ventrículos e designa uma cor diferente para cada região (Figura 3C)...

Usando exames de ressonância magnética (humana), software de imagem 3D e análise imuno-histológica, documentamos alterações nos ventrículos laterais do cérebro. O mapeamento longitudinal 3D das alterações do volume do ventrículo lateral e a caracterização das alterações celulares periventriculares que ocorrem no cérebro humano devido ao envelhecimento ou doença são então modelados em camundongos.

Modelagem 3D do lateral ventrículos e histológica Caracterização do Tecido Periventricular em humanos e mouse

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional ...

O objetivo geral dos procedimentos a seguir é fornecer um meio para investigar a causa e o efeito da ventriculomegalia e destacar técnicas que permitam o estudo da saúde do sistema ventricular e de suas importantes funções de barreira e filtração no cérebro. Isso é alcançado mediante a coleta de cortes coronais do cérebro de camundongo ou de exames de ressonância magnética do cérebro humano, para gerar reconstruções tridimensionais dos ventrículos e calcular seus volumes. Em um segundo passo, tecido pós-mortem que inclui preparações en face da superfície apical dos ventrículos é corado com anticorpos específicos para células, revelando a integridade celular do revestimento ventricular. Em seguida, é preparado um mosaico da organização celular em toda a superfície ventricular, que é sobreposto ao modelo tridimensional do ventrículo para demonstrar regiões de gliose versus células ciliadas intactas.Os resultados mostram regiões de expansão dos ventrículos com base na modelagem tridimensional longitudinal dos ventrículos e áreas onde a camada de células epiteliais do revestimento ventricular já não está intacta, mas substituída por cicatrizes gliais. Ao combinar os dados de modelagem 3D com os dados imunohistoquímicos, pode-se gerar um mapa tridimensional específico por região da composição celular do revestimento ventricular. As implicações desta técnica estendem-se para a terapia ou diagnóstico de lesões cerebrais, doenças neurodegenerativas como a doença de Alzheimer e o envelhecimento normal, todas as quais geralmente apresentam algum grau de expansão ventricular e, portanto, provável escoliose da superfície ventricular.As demonstrações dos procedimentos em camundongo serão realizadas por Richard Wolffer e um estudante de graduação do nosso laboratório. Os procedimentos realizados com dados de ressonância magnética humana e tecido humano pós-mortem serão demonstrados por Yeun, atualmente estudante de medicina, e Rebecca Chu, aluna de pós-graduação no laboratório. Prepare as lâminas para serem analisadas fixando, seccionando, realizando imuno-histoquímica e montando o cérebro do camundongo conforme descrito na parte escrita do protocolo. Para iniciar o procedimento, para traçar os ventrículos laterais do camundongo, ligue o microscópio de fluorescência invertido e o computador; o microscópio deve estar equipado com uma platina automatizada e uma câmera digital CCD.Inicie o software de mapeamento no modo de fluorescência e abra as opções de exibição para carregar as barras de ferramentas e os painéis de acoplamento necessários para o rastreamento. Em seguida, clique em opções, opções de exibição e acessórios, e selecione as barras de ferramentas principal e de marcador no mesmo menu. Em painéis de acoplamento, selecione histograma da câmera, controle multicanal, configurações da câmera e aquisição de imagem.Identifique o primeiro fragmento de tecido que contém os ventrículos laterais com base na intensa fluorescência da proteína S100 beta, que marca as células apendiculares que revestem o ventrículo lateral. Oriente os hemisférios esquerdo e direito identificando o pequeno corte feito durante o seccionamento.Agora, crie um novo arquivo de dados e defina um ponto de referência para o movimento do estágio clicando na janela da imagem acima do ventrículo lateral esquerdo. Mantenha este ponto de referência em uma localização consistente em relação aos ventrículos laterais em todos os arquivos de rastreamento. Para auxiliar na importação de contornos para a reconstrução serial, selecione o tipo de contorno predefinido apropriado no menu suspenso de contornos.Use uma cor diferente para cada um dos traçados dos ventrículos laterais esquerdo e direito. Agora, clique ao longo de toda a superfície apical do revestimento do apêndice para traçar o contorno do ventrículo. Mova a janela de traçado usando as teclas de seta.Após traçar o contorno, clique com o botão direito e selecione fechar contorno. Repita o traçado para o ventrículo direito usando uma cor diferente. Em seguida, selecione o marcador apropriado na barra de ferramentas de marcadores à esquerda e clique para colocar um marcador na tela de traçado ao longo da linha média, a fim de auxiliar no alinhamento de contornos consecutivos para a reconstrução tridimensional.Repita este procedimento para fazer uma segunda marcação. Salve os rastros do tecido selecionando Arquivo Salvar arquivo de dados como e crie uma nova pasta e um nome de arquivo numerando os rastreamentos de acordo com a convenção número da lâmina traço número do tecido para facilitar a identificação dos rastros de seções seriadas. Em seguida, repita o procedimento mostrado acima para todas as seções que contêm um ventrículo.Para realizar a reconstrução tridimensional dos ventrículos laterais, abra o programa de reconstrução 3D. Em seguida, clique em Arquivo Abrir e selecione o arquivo de contorno da primeira seção seriada traçada.Importe todas as delimitações de contorno do ventrículo esquerdo e direito, bem como quaisquer marcadores adicionados. Alinhe os contornos de acordo com as instruções na parte escrita do protocolo. Em seguida, selecione todos os contornos no painel esquerdo e clique no botão de visualização 3D para exibir a reconstrução tridimensional final.Esta imagem mostra uma seção coronal do cérebro de camundongo, incluindo os ventrículos laterais delimitados por células epiteliais imunorreativas à S100 beta. O asterisco indica os ventrículos laterais. Os colchetes delimitam a adesão e a barra de escala representa 500 mícrons.Os ventrículos laterais do camundongo são delineados como contornos e organizados em seções de subsegmentos. As regiões intraventriculares são eliminadas para evitar interferência na análise volumétrica. Esta imagem mostra a reconstrução tridimensional final dos contornos dos ventrículos laterais.A cor amarela representa o contorno dos volumes cerebrais completos que abrangem a região de interesse contendo os ventrículos laterais. Você deve ter um bom entendimento de como criar reconstruções tridimensionais dos ventrículos a partir de tecido cerebral seccionado em corte coronal. Os protocolos são listados para criar a reconstrução de imagens tridimensionais e a quantificação volumétrica dos ventrículos laterais, bem como para avaliar as alterações volumétricas ao longo do tempo usando análise de sobreposição longitudinal; é importante observar que a consistência na aquisição de dados de RM e no processamento pós-aquisição são critérios extremamente importantes para a inclusão dos conjuntos de dados. Para realizar a segmentação ventricular, o ITK-SNAP é utilizado para segmentar os ventrículos a partir de imagens de RM ponderadas em T1 de alta resolução. Após iniciar o programa, abra a imagem em escala de cinza, selecione o arquivo desejado e abra-o como um arquivo nifty.Em seguida, percorra cada plano anatômico e observe as anormalidades ventriculares, como regiões do nariz, chifres temporais grandes ou pequenos ou semelhantes. Depois, na caixa de ferramentas principal, clique em snake, ferramenta de ROI. Em seguida, segmente em 3D e selecione a opção de região de intensidade.Agora clique em pré-processar imagem e selecione acima. Registre a intensidade máxima utilizando a barra deslizante. Em seguida, defina o limiar em 15% da intensidade máxima e registre esse valor.Isso deve destacar a ROI em branco. Defina o parâmetro de suavização para 10. Clique em OK.Em seguida, adicione 10 a 12 bolhas pequenas do tamanho dois a cada ventrículo. Duas no cornete frontal anterior, sete distribuídas uniformemente ao longo da superfície superior do corpo do ventrículo lateral, uma no cornete occipital e uma no cornete temporal do ventrículo lateral.Em seguida, selecione os parâmetros e defina a força de curvatura como 0,4. Depois, clique no símbolo de reprodução para iniciar a evolução do contorno ativo. Agora, clique em atualizar malha para visualizar a superfície.Em seguida, verifique a atualização automática. Interrompa o processo de segmentação quando todas as áreas dos ventrículos laterais estiverem incluídas na região de interesse. Evite a inclusão do terceiro ventrículo.Por fim, clique em finalizar e salve os resultados da segmentação em formato de arquivo nifty. Para obter o volume total dos ventrículos, selecione segmentação, volume e estatísticas para obter o volume total dos ventrículos utilizando o rótulo de cor definido. Neste segmento, as ROI longitudinais são sobrepostas utilizando o software mango para demonstrar qualitativa e quantitativamente as alterações no volume ventricular em indivíduos ao longo do tempo.Após abrir o software, clique em abrir, abrir arquivo e carregue o arquivo nifty previamente salvo. Após o carregamento do arquivo de imagem, clique em arquivo carregar ROI e carregue a ROI do ponto temporal de linha de base como verde. Clique em arquivo carregar ROI e carregue a segunda ROI do ponto temporal como vermelha.Salve a sobreposição longitudinal selecionando arquivo salvar ROI e atribua a cada imagem um nome de arquivo de acordo com a convenção agora exibida na tela. Em seguida, abra o ITK-SNAP. Depois, reabra a ROI combinada como uma imagem em escala de cinza, carregue a ROI combinada selecionando segmentação carregar a partir da imagem do arquivo ROI combinada para obter os dados volumétricos longitudinais e execute a seguinte segmentação volumétrica e estatísticas.Rotule um vermelho como volume de expansão, rótulo dois verde como volume de estenose, rótulo três azul como volume da base, começando com um hemisfério intacto que foi fixado em Formalina 10% por um máximo de seis semanas e enxaguado cuidadosamente com PBS 0,1 molar; corte secções coronais com espessura de 1,5 centímetro ao longo de todo o hemisfério usando uma faca grande e um escalpe microcirúrgico. Disseque a parede do ventrículo com profundidade de um centímetro, mantendo uma secção contínua para toda a parede lateral, subdividindo a parede conforme necessário para criar secções de tamanho apropriado para coloração. Faça um entalhe na secção no lado oposto da parede do ventrículo.Para identificar a orientação superior-inferior, realize imuno-histoquímica e monte as seções de acordo com o protocolo escrito. Sob um microscópio estereoscópico, fixe o tecido usando alfinetes com uma faca microcirúrgica, crie uma seção uniformemente fina da parede do ventrículo lateral e monte-a penem para cima sobre uma lâmina. Quando as lâminas estiverem completamente secas, examine as seções por microscopia confocal de imunofluorescência. Defina o plano focal de imagem na superfície do ventrículo, conforme determinado pelo uso de beta-catenina, um marcador de aderência apical.Proteínas de junção de células apendiculares. Em seguida, delimite as regiões de cobertura pelas células apendiculares e gliose astrocitária superficial de acordo com a marcação de GFAP na superfície do ventrículo para documentar e montar toda a superfície ventricular. Utilize imagens sobrepostas de toda a superfície para criar um mosaico de imagens em série.Abra o Adobe Photoshop e use o recurso Arquivo > Automatizar > Auto-montagem Interativa para selecionar as imagens a sobrepor, fazendo ajustes manuais se necessário. Crie uma nova camada para rastrear a montagem e gerar uma representação esquemática do órgão intacto. Dependendo da cobertura celular ou da superfície do ventrículo em casos de escoliose, compile todas as seções para reconstruir o mapa da parede ventricular e vinculá-lo à região correspondente na reconstrução por ressonância magnética.Esta é a montagem de imagens de RM humanas aqui. O ventrículo lateral foi definido como a região de interesse em vermelho. A reconstrução tridimensional da imagem, conforme mostrada aqui, permite a quantificação volumétrica e a visualização qualitativa do ventrículo lateral.Esta imagem mostra a avaliação da expansão longitudinal dos ventrículos em um paciente idoso. Ressonâncias magnéticas longitudinais de múltiplos pontos podem ser alinhadas e sobrepostas para visualizar e quantificar a expansão do volume ventricular em indivíduos ao longo do tempo. Essas últimas três imagens mostram a avaliação imunohistoquímica e o mapeamento regional da superfície do ventrículo lateral humano. Aqui.As áreas de células apendiculares intactas delimitadas por beta-catenina e coloração mostram uma aparência em mosaico, conforme indicado pelo asterisco, e são demarcadas por uma linha pontilhada em relação às regiões de astrogliose na superfície do ventrículo, delimitadas pela coloração de GFAP. Imagens confocais em série são sobrepostas para gerar um mosaico regional e rastreadas usando o Adobe Photoshop ou uma representação esquemática da organização celular na superfície do ventrículo. Esta imagem esquemática do mosaico é mapeada para a superfície do ventrículo na reconstrução tridimensional correspondente do ventrículo baseada em ressonância magnética.Como mostrado, a cor verde indica o apêndice intacto e as áreas vermelhas indicam gliose. Durante a realização deste procedimento, é importante manter uma documentação cuidadosa de cada amostra de tecido, a fim de realizar a reconstrução seriada e o mapeamento da integridade celular. Após este procedimento, outros métodos, como a subsegmentação dos ventrículos laterais, podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre a expansão específica por região ao longo do tempo.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

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