Name: Uma abordagem metodológica para avaliações não-invasivas de função vascular e Morfologia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Aprenda métodos não invasivos para avaliar função vascular e morfologia em pesquisas de aterosclerose. Utilize imagem a laser Doppler com iontoforese, dilatação mediada por fluxo e espessura íntima-média carotídea para estudar fisiologia cardiovascular.

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Os autores gostariam de agradecer ao Dr. George Balanos por sua assistência na técnica de dilatação mediada por fluxo.

NOTA: O protocolo segue orientações do Comitê de Ética em Pesquisa em Seres Humanos do Dudley Grupo NHS Foundation Trust. Executar todas as técnicas descritas em um laboratório de temperatura controlada (21 - 22 o C), com iluminação estável e ausência de ruído. Peça indivíduos submetidos a avaliações de abster-se de comer, beber, fumar e exercício de 12 horas antes do teste. Reter medicamentos vasoativos por pelo menos 12 horas, quando apropriado. 1. Laser Doppler Imaging com Iontoforese <ol><li> Ligue Laser Doppler Imager (LDI) e permitir que o scanner para estabilizar automaticamente por cerca de 30 min. Inicie o software LDI e clique em &quot;Measurement&quot; (tela inicial do software, então, ser apresentado). Na tela inicial, selecione &#39;Ionto Protocol&#39; na barra de tarefas localizada na parte superior da janela. </li><li> Introduzir manualmente o protocolo (o protocolo utilizado no nosso laboratório envolve um total de 13 slatas, com corrente eléctrica para aplicação iontoforética de fármacos definida de verificação 2 11 para digitalizar a uma voltagem de 30 mA). Definir verificação 1 como uma linha de base digitalizar sem corrente elétrica, e digitalizar 12 e 13 como scans de recuperação também sem corrente elétrica. Clique em OK para confirmar as configurações e retornar à tela inicial. </li><li> Peça ao participante para relaxar em uma cadeira semi-reclinada com seu antebraço descansando 90 graus em um confortável, travesseiro firme, e coloque um tapete preto sob o antebraço. NOTA: O tapete ajuda a limitar as medições do artefacto gerados pelas superfícies de fundo que rodeiam o tecido. É importante que os participantes braço está preso firmemente ao descanso de modo que não há movimento e artefactos associados. </li><li> Ligar as fichas com fio na extremidade oposta de cada uma das câmaras de perspex para o controlador de iontoforese. Ligue a câmara contendo uma dose de 2,5 mL de 1% de acetilcolina (ACh) para a ligação anódica de o controlador de iontoforese, e ligar-se a segunda câmara contendouma dose de 2,5 mL de 1% de nitroprussiato de sódio (SNP) para a ligação catódica. Misturar os dois agentes na câmara usando solução salina 0,5%. Ligue as duas câmaras do aspecto volar do antebraço direito do participante usando o dobro tomou partido almofadas adesivas. </li><li> Cubra as câmaras em 32 mm lamelas para evitar o vazamento de fluido. </li><li> Antes de iniciar a digitalização, abra a janela &quot;Configuração do scanner&quot;, localizado no canto superior esquerdo da tela inicial. Selecione a guia &#39;Video and Distance &quot;e selecione a função&quot; auto distância &quot;para medir a distância da cabeça do scanner a partir do antebraço participantes. <ol><li> Após a conclusão da medição automática distância, selecione a aba &quot;Imagem Scan &#39;e determinar a área que está a ser digitalizado, clicando no botão&#39; Mark &#39;no canto inferior direito da janela. Se necessário, altere o tamanho da região de interesse, digitando manualmente no tamanho da área de digitalização para a &#39;Área Scan &amp;# 8217; a secção perto do topo da janela. Assegure-se que a região de interesse inclui o diâmetro de cada uma das câmaras de iontoforese e é suficientemente grande para limitar a variabilidade no fluxo sanguíneo da pele. </li></ol></li><li> Após a conclusão da avaliação, salve o arquivo de dados. Abra o arquivo de dados usando LDI software de análise de imagem para realizar medições de perfusão. <ol><li> Clique em &quot;revisão da imagem &#39;na janela principal do software, e abra o arquivo de imagem que está a ser analisado. </li><li> Use o software para marcar uma região de interesse em torno dos diâmetros externos de cada câmara. Ajuste a região de interesse, de modo que ele se encaixa corretamente na área onde as câmaras estavam presentes. Em seguida, clique no ícone &#39;estatísticas&#39; e uma coluna contendo as unidades de perfusão médio para cada câmara será exibido. Note-se a unidade de perfusão de base, bem como a unidade de perfusão mais elevada de cada um dos últimos 12 varreduras para cada câmara. NOTA: Este método de análise éespecífica para o nosso laboratório; no entanto, outros métodos podem ser utilizados para expressar os dados obtidos a partir da verificação LDI. Para uma revisão abrangente, por favor consultar as orientações de Roustit e Cracowski 12. </li></ol></li><li> Para calcular variação percentual de perfusão em resposta a acetilcolina e SNP, subtrair perfusão linha de base a partir do pico de perfusão, divida por perfusão linha de base e, em seguida, multiplicar por 100. NOTA: Em nosso laboratório, alterações de perfusão em relação à linha de base têm mostrado bom coeficiente intra-observador de variação para ACh (7%) e SNP (6%). </li></ol> Dilatação 2. Flow-mediada e Dilatação nitroglicerina mediada <ol><li> Ligue a máquina de ultra-som Doppler e PC em rede, contendo análise de imagem vascular software (VIA). NOTA: O software VIA capta uma imagem ao vivo (a 25 quadros por segundo) e fornece informações sobre o diâmetro do vaso, bem como a qualidade das fronteiras vasculares sendo detectada pela máquina de ultra-som. Otseus pacotes de software estão disponíveis, que podem conter recursos e configurações adicionais. É aconselhável consultar manuais de operação de software específico. </li><li> Peça ao participante para relaxar em uma poltrona semi-reclinada e coloque o braço em um travesseiro confortável para o seu lado, mas ao nível do coração. Coloque um manguito de pressão arterial em torno do pulso do participante. NOTA: O paciente deve ser pediu para manter seu braço o mais imóvel possível para evitar artefatos de movimento durante a medição. </li><li> Fixar o transdutor linear a partir do aparelho de ultrassom matriz em uma braçadeira estereotáxica, e apertar a braçadeira utilizando os wingnuts forma que o transdutor de ultra-som permanece numa posição fixa. NOTA: O grampo irá garantir que o transdutor de ultra-sons irá permanecer estável uma vez que o vaso sanguíneo está localizado. </li><li> Na máquina de ultra-som, desloque-se para o &quot;Menu&quot; e definir a freqüência de varredura de 5 MHz, e otimizar a profundidade (a configuração recomendada é de profundidade3,5 cm) e ajustes de ganho na máquina de ultra-som. Ajuste as configurações de ganho para assegurar que não há brilho simétrico para a parede perto e longe do navio. </li><li> Usando o transdutor linear, localização da artéria braquial, que é normalmente encontrado 2-10 cm acima da fossa antecubital no plano de varrimento longitudinal. Faça os ajustes para esclarecer a qualidade de imagem nesta fase. Para ajudar a identificar a artéria, ligue o Doppler colorido para ajudar a mostrar o fluxo sanguíneo pulsátil arterial e distingui-lo do fluxo sanguíneo venoso contínuo. Ver a artéria braquial na horizontal em toda a tela; ele deve aparecer como duas linhas paralelas sólidos, separados por uma área clara entre as linhas, que representa o lúmen do vaso. </li><li> Para permitir que o software VIA para gravar automaticamente diâmetro do vaso, use o cursor para marcar uma região predeterminada de interesse para detectar e rastrear as paredes anterior e posterior da artéria. NOTA: O tamanho da região de interesse pode seraumentado ou diminuído usando os botões de &#39;x&#39; e &#39;y&#39; localizados na tela principal do software. </li><li> Clique em &quot;Iniciar&quot; no software VIA e imagem da artéria por 2 min. Em seguida, pressione &#39;inflar&#39; no software VIA e, simultaneamente, inflar o manguito de pressão colocada em torno do pulso para suprasystolic pressões (geralmente acima de 220 mmHg) por 5 min. NOTA: O objectivo da braçadeira de pulso é a oclusão do fluxo de sangue para o lado. </li><li> Após 5 min desinflar o manguito de pressão arterial para induzir hiperemia reativa que, em uma embarcação saudável, irá estimular NO mediada por vasodilatação. NOTA: dilatação Peak pode ocorrer até 180 seg seguinte deflação do manguito, por isso é aconselhável para continuar a gravar diâmetros vasculares por 3 min, após a liberação do manguito. </li><li> Após um período de repouso de 10 min, re-localizar a artéria braquial utilizando o transdutor linear e gravar uma leitura de linha de base de diâmetro 2 min da mesma maneiracomo passo 2.7. </li><li> Em seguida, perguntar o participante para colocar um sublingual glyceryl-trinitrato (GTN) comprimido de 500 mg sob a sua língua e continuar a medir o diâmetro da artéria braquial por mais 5 min. Após esse período, o participante pedir para remover o tablet GTN e monitorar o participante para se certificar de que eles não sentir quaisquer efeitos adversos para a droga. </li><li> Realizar todas as análises de dados offline. Vinte e cinco pontos de dados estão disponíveis para cada segundo da avaliação; fechar este dados em épocas de um segundo no Microsoft Excel. Exportar os dados para um pacote de análise de sinal digital e filtrar com uma sec 3 filtro de média móvel. </li><li> Estabelecer o diâmetro da linha de base a partir do 120 segundos de dados antes do manguito à inflação. Inspecione visualmente a região de linha de base e excluir artefatos. Calcular a média dos restantes regiões da linha de base para produzir o diâmetro da linha de base. </li><li> Para a análise da dilatação fluxo-mediada (FMD), use o software para escanear automaticamente o cargo cuff-região deflação para a dilatação de pico e usar o cursor para marcar esse pico para a inspeção visual. Se o pico foi identificado erroneamente, use o cursor para selecionar uma região mais confinado dentro do qual o pico poderia, então, ser identificado. Grave o valor de pico como diâmetro de pico. </li><li> Para os dados GTN, adoptar um procedimento idêntico ao utilizado com a febre aftosa, com exceção de busca para a dilatação de pico na região após a 5 min da administração da droga. </li><li> Para calcular a febre aftosa% e GTN%, subtrair diâmetro basal do diâmetro de pico, dividir pelo diâmetro da linha de base e, em seguida, multiplicar por 100. NOTA: Em nosso laboratório, o coeficiente intra-observador de variação é de 11% para a febre aftosa, e 12% para GTN. </li></ol> Espessura 3. carótida íntima-media <ol><li> Peça ao participante para deitar-se confortavelmente em uma cama, e colocar um travesseiro sob a cabeça para oferecer suporte para o pescoço. </li><li> Conecte o eletrocardiograma (ECG) leva ao ultra-som Doppler e, em seguida, anexá-los para o pmembros aciente. Apenas um traço básico ECG é necessário, portanto, colocar os fios apropriados à esquerda e à direita braços, e no tornozelo esquerdo. </li><li> Prepare a máquina de ultra-som, percorrendo o &#39;menu&#39; e definir a freqüência de varredura em 10 MHz e otimização de profundidade (a configuração de profundidade recomendada é de 3-4 cm) e ganho de configurações. Ajuste as configurações de ganho para assegurar que não há brilho simétrico para a parede perto e longe do navio. </li><li> Peça ao participante para inclinar a cabeça ligeiramente para a esquerda, e utilizando o transdutor linear, digitalizar a artéria carótida direita ao longo de todas as suas secções (artéria carótida comum, interno e externo) utilizando o plano de exploração longitudinal para identificar a presença de quaisquer placas. Salve as imagens que mostram qualquer evidência de placa. Para ajudar a identificar a artéria, procure um ponto de bifurcação no vaso, pois isso mostra a artéria carótida comum bifurcando nas artérias carótidas internas e externas. </li><li> Para a medição of carótida espessura íntima-média (CIMT), atingir pelo menos 3 imagens de uma secção da artéria carótida comum, que é livre de placa, e é de 1 cm proximal ao bulbo carotídeo. Atingir todas as imagens no pico da onda R no ECG em que coincida com a diástole ventricular e o ponto em que o navio está sob o mínimo de tensão de cisalhamento. </li><li> Repita os passos 3.4 e 3.5 na artéria carótida esquerda. Pergunte ao participante para inclinar a cabeça ligeiramente para a direita para esta medição. </li><li> Para auxiliar na obtenção de imagens nítidas das paredes próximas ou distantes, manipular cuidadosamente a sonda de ultra-som durante a avaliação para garantir o navio é perpendicular ao feixe de ultra-som. Atingir este por subtilmente altera a inclinação e rotação do transdutor junto com pequenos ajustes para a pressão aplicada ao ângulo de proximal para distal (movimento calcanhar-dedo do pé) da sonda. </li><li> Realizar análise de imagens off-line utilizando Software Measurement Artery (AMS) para detectar a boun vascularSecundário de acordo com as linhas de Pignoli. Carregar-se a imagem a ser analisado, e então utilizando o cursor, criar uma região de interesse de uma secção do vaso, que é livre de placa. Clique em &#39;detectar&#39; no software e registre os valores exibidos na tela para cIMT e diâmetro do lúmen. NOTA: leituras precisas só pode ser obtido a partir da parede do fundo, de modo ignorar leituras da parede perto. </li><li> Tomar três medições para cada lado, e em seguida médio para obter a média cIMT para o artérias carótida esquerda separadamente e direito. Além disso, em média, o cIMT de ambos os lados para dar o cIMT geral. NOTA: O coeficiente intra-observador de variação para esta técnica em nosso laboratório é de 9%. </li><li> Efectuar a medição de qualquer placa usando o mesmo software por marcação manualmente a placa usando o cursor. Clique em &#39;classificar&#39; on AMS para calcular automaticamente a ecogenicidade da placa e do grau de acordo com a sua susceptibilidade para a ruptura. Cliquena janela &quot;características da placa&quot; para ver esta informação. </li></ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

O presente manuscrito detalha a metodologia de várias avaliações distintas da função vascular e a morfologia que podem ser realizadas na vasculatura periférica. Cada avaliação fornece informações sobre os estágios distintos de aterosclerose, e ajudam a caracterizar o perfil vascular de diferentes territórios vasculares. Temos relatado anteriormente que a função endotelial microvascular é independente da função endotelial navio grande em uma população de pacientes com artrite reumatóide com maior risco de DCV 39. Além disso, a avaliação da função vascular e morfologia também eram independentes entre si no mesmo grupo de pacientes e em pacientes com DCV 40,41. Estes resultados podem ser explicados pela heterogeneidade da função e estrutura de células endoteliais vasculares em diferentes territórios 38, bem como um possível intervalo de tempo para a progressão das alterações funcionais para morfológicaanormalidades no vaso. Um estudo realizado por Hashimoto e colegas 42 revelou que vários participantes com aterosclerose tinha diminuído os valores de febre aftosa, mas valores CIMT normais. Estes achados sugerem que o exame de aterosclerose subclínica, usando uma variedade de métodos é importante para decifrar os efeitos globais da DCV. A importância da microcirculação na saúde e na doença está ganhando cada vez mais atenção na literatura médica. Os microvasos formar uma área de superfície muito maior do que as grandes embarcações tornando-os alvos importantes para os danos da estímulos prejudiciais 43. Há a hipótese de que microvasos pode ser a fonte primária de mediadores inflamatórios que se infiltram no endotélio dos vasos maiores que levam à formação de lesão 43. Nos diabéticos tipo II, doença microvascular muitas vezes precede a doença grande vaso 44, e em outras populações com risco aumentado de doenças cardiovasculares, tais como artrite Arthritis, as intervenções que reduzam o risco de DCV melhorar microvascular, mas não grande navio, a função endotelial 45,46. Em conjunto, esses resultados sugerem que o exame da função microvascular pode ajudar na compreensão dos complexos mecanismos que iniciam a aterosclerose. No presente trabalho, a avaliação da função endotelial microvascular foi realizada utilizando LDI com iontoforese de drogas vasoativas. Várias outras avaliações podem ser utilizadas para avaliar a função microvascular, incluindo a CPU e pletismografia de oclusão venosa. No entanto, a anterior avaliação fornece apenas informação sobre a morfologia microvascular, enquanto o último é demorado e, em alguns protocolos invasivos devido à administração de agentes vasoativos intra-braquial 1. Em contraste, a LDI oferece uma abordagem simples, eficiente em termos de tempo para medir a perfusão microvascular de vasos sanguíneos da pele em resposta a agentes vasoativos que são administrados não Invasvamente. A medição do fluxo sanguíneo da pele ganhou ampla aceitação na literatura, devido à sua facilidade de acesso e uma forte correlação com o estabelecido CVD 12. Além disso, a vantagem de LDI sobre outras técnicas, tais como Doppler fluxometria de Doppler por laser, é que ele pode verificar simultaneamente múltiplos pontos em uma dada área e pode, por conseguinte, representam artefactos de movimento celulares e as diferenças espaciais do fluxo sanguíneo cutâneo, ambos dos quais podem afectar o perfusão do navio 47,48. Apesar das vantagens óbvias de iontoforese, é importante notar que a corrente de vasodilatação induzida (CIV) de iontoforese pode confundir os efeitos dos agentes vasoactivos especialmente no cátodo. A escolha do veículo para a entrega da droga poderia ajudar a reduzir esse efeito, com cloreto de sódio a 0,5% (como o usado no protocolo atual) eficaz para limitar CIV 18. Além disso, o uso de câmaras de maior diâmetro e baixa cur elétricarendas (como o utilizado no protocolo atual) todos os ajudar a reduzir CIV 18. Uso de um local de controle tem sido também recomendado 12. Fatores biológicos e comportamentais também podem afetar a confiabilidade e repetibilidade da técnica. Por exemplo, a variação circadiana e fumo têm sido mostrados para influenciar microvascular função endotelial 49,50. Condições de gravação rigorosas devem ser respeitados, a fim de obter resultados precisos e diretrizes estabelecidas devem ser seguidas ao projetar protocolos 12. Medição da febre aftosa e dilatação GTN-mediada fornece informação sobre disfunção endotelial nos vasos sanguíneos grandes, e é amplamente utilizado em investigação vascular não invasivo. A técnica de febre aftosa fornece informações substituto em biodisponibilidade e é um marcador de prognóstico útil de eventos cardíacos em diferentes populações clínicas 7-9. No presente trabalho, o protocolo apresentado contas para muitos dos factores quesão necessárias para estimulação adequada de vasodilatação mediada por NO 25. Por exemplo, a braçadeira de oclusão foi colocada distalmente à sonda de ultra-sons e em torno do pulso de 27, a duração da isquemia foi de 5 min 26 e o tempo adequado foi deixada a gravar o diâmetro &quot;verdadeiro&quot; pico seguinte hiperemia reactiva 28. Infelizmente, o protocolo não incluiu a caracterização do perfil de tensão de cisalhamento como o software de detecção de borda automática não permitir a gravação simultânea de diâmetro do vaso e sinal de velocidade de onda de pulso. O cálculo da tensão de cisalhamento é parte integrante de uma medição precisa da febre aftosa 26 e é recomendável que, sempre que possível, os grupos de pesquisa vasculares usar software que permite que tais medições a serem realizadas. As avaliações da febre aftosa e da dilatação mediada por GTN também são suscetíveis a variações ambientais e biológicas 24, como pequenas alterações no diâmetro vascular podesuscitar grandes respostas FMD / GTN. Por exemplo, os valores típicos de febre aftosa para os participantes saudáveis ​​varia de 5-10% 51, o que corresponde a um 0,25 - 0,5 mm de diâmetro mudança arterial para uma artéria com um diâmetro de 5 mm. Dadas essas pequenas alterações no diâmetro arterial, muita atenção deve ser dada aos fatores técnicos e biológicos que podem influenciar a medição. Com efeito, a febre aftosa pode ser afetada por uma variedade de fatores biológicos e comportamentais, tais como ativação simpática 52, privação de sono de 53 anos, o consumo de cafeína 54, fumando 55, a terapia antioxidante 56 e hora do dia 57. Por conseguinte, é importante controlar estes factores, utilizando informação de orientações estabelecidas 24,25. Avaliação da aterosclerose subclínica avançada, mas foi feito usando cIMT. A técnica tem sido utilizada em várias populações clínicas e fornece grande detalhe sobre st arterialructure quando comparado com técnicas mais sofisticadas, como a ressonância magnética 34. Tal como acontece com as outras técnicas vasculares, medição de cIMT requer uma análise cuidadosa de fatores técnicos que podem afetar a medição. Geralmente, cIMT deve ser realizado em áreas livres de placa, na parede mais distante da artéria carótida comum. Semelhante a febre aftosa, a medição da cIMT é realizada utilizando a ultra-sonografia de alta resolução e por isso é altamente dependente do usuário. Informou coeficiente de variação (CofV) gama 2,4-18,3% 58, enquanto que para a febre aftosa é 1-84% 59. No entanto, mesmo quando ambas as técnicas são realizadas por ecografistas competentes com factores externos bem controlados, continua a haver uma alta CofV 58,60,61. Uma razão para isso poderia ser que a análise das fronteiras vasculares são realizadas usando os métodos manuais 60,61. Tal análise pode reduzir a confiabilidade como artefatos de imagem, como falsas fronteiras, o barulho do ultrasosinal und, e distorção de vasos pode afetar interpretação da imagem 22. Desenvolvimentos recentes em software de detecção de borda automatizado contínuo melhoraram muito a detecção de limites da parede vascular 21,22. No presente estudo, software VIA foi utilizado para medir o diâmetro da artéria braquial, enquanto AMS foi usado para detectar cIMT. A utilização destes software reduz muito a dependência do operador, ainda no caso de AMS, um certo grau de controle do operador ainda está disponível nas situações em que a qualidade da imagem pode ser pobre 62. Os laboratórios que usam automatizado software de detecção de borda geralmente tendem a ter baixa CofV 58,63,64, portanto, deve ser o objetivo de todos os laboratórios de pesquisa vasculares incorporar medição automatizada de fronteiras vasculares, a fim de garantir a precisão dos resultados. Também é uma boa prática para relatar os resultados de estudos de reprodutibilidade para protocolos específicos ao publicar os resultados do estudo. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Apesar de avaliações da função vascular são rotineiramente utilizados em pesquisa clínica, uma limitação das técnicas é que os valores normativos para LDI com iontoforese e febre aftosa não existem. Por isso, é importante que à idade saudável e grupos de controle pareados por sexo são examinados para comparar os achados com o grupo experimental. Embora essas técnicas associar com mau prognóstico em uma variedade de populações com evidência de CVD 6-9, ainda há uma carência de estudos que examinaram a relação entre a função endotelial pobre e resultados adversos cardiovasculares, como infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral. Outros estudos prospectivos são necessários para responder a estas preocupações. Outra limitação é a utilização de operadores humanos para realizar as avaliações e efectuar a análise. Isto introduz uma fonte potencial de viés; no entanto, este pode ser limitada por cegando o operador com os resultados ou a assegurar que o leitor é diferente do operador. Eleé também importante para garantir que o leitor segue um protocolo normalizado para a análise dos dados, de modo que todos os dados são analisados ​​de forma consistente. Em resumo, o presente manuscrito fornece informações detalhadas sobre os passos metodológicos necessários para realizar com sucesso a apreciação de microvasos e função endotelial embarcação de grande porte, bem como a morfologia vascular da circulação periférica. Quando utilizados em conjunto, as avaliações fornecer informação global sobre os diferentes estágios da aterosclerose. Outros estudos prospectivos que examinam o papel diagnóstico potencial dessas técnicas são garantidos.

O endotélio é a camada mais interna da vasculatura e está envolvido na manutenção da homeostasia vascular através da regulação de uma multiplicidade de processos vasoactivos. A interrupção destes processos pode predispor o navio para a aterosclerose e aumentar o risco de doença cardiovascular (DCV) 1. Função endotelial periférica é um bom indicador de alterações precoces na parede vascular 2. Além disso, as medições da função endotelial periférica têm sido mostrados para reflectir a função endotelial coronária 3-5, e como tal, são considerados como bons preditores de doença cardiovascular 6-9. Este é talvez pouco surpreendente dado que a aterosclerose é agora amplamente apreciada a ser uma doença sistêmica 10. A avaliação da função endotelial periférica normalmente quantificar a resposta vasodilatadora do navio a um estímulo específico, com uma atenuação da resposta dilatória indicativo de endotelialdisfunção 11, e pode ser medido em diferentes leitos vasculares. As avaliações das mudanças estruturais avançadas do navio pode ser caracterizada por exame de ultra-som da espessura íntima-média. Na microcirculação, dopplerfluxometria laser (LDF) e de imagem Laser Doppler (LDI), com iontoforese de agonistas vasodilatadores podem fornecer informações úteis sobre perfusão microvascular 12. Ambas as técnicas de medir o efeito Doppler criado por luz difusa de mover as células vermelhas do sangue. A perfusão é representado como o fluxo sanguíneo em vez de fluxo sanguíneo (mL / min), com um fluxo de sangue que reflecte a velocidade média dos glóbulos vermelhos do sangue e concentração. Medição do fluxo de sangue é linearmente relacionado com o fluxo de sangue real 13. A avaliação da LDI oferece vantagens consideráveis ​​sobre LDF, porque ao contrário de LDF, LDI pode digitalizar por uma vasta área de contabilidade, assim, para a heterogeneidade do fluxo sanguíneo da pele e aumentar a reprodutibilidade da técnica12. O estímulo para aumentar o fluxo de sangue durante LDI são fornecidos por iontoforese de vasodilatadores agonistas de acetilcolina (ACh) e nitroprussiato de sódio (SNP), que avaliam a função endotélio-dependente e independente do endotélio, respectivamente, na pele utilizando uma fraco 14 de corrente eléctrica. Depois de atravessar a pele, ACh se liga a células endoteliais receptores muscarínicos liberando o óxido vasodilatador nítrico (NO). O uso de SNP ativa diretamente os receptores das células musculares lisas a fim de permitir a vasodilatação máxima da embarcação e análise da integridade do músculo liso 15. Existe alguma incerteza sobre se a dilatação mediada por ACh não envolve em tudo, como ACh pode estimular sem NO vias, tais como vias mediadas por ciclooxigenase 12. No entanto, já relatado anteriormente que Ach e SNP respostas são prejudicados em populações de pacientes com risco aumentado de DCV 16 e que as intervenções de exercício conhecido por melhorar NO bioactivity também melhorar o fluxo de sangue ACh mediada usando LDI 17. O veículo para o transporte de agentes para os microvasos da pele, muitas vezes incluem cloreto de sódio ou água desionizada 18,19. Função endotelial microvascular pode ser quantificado usando diferentes abordagens, com a condutância vascular cutâneo - um produto de fluxo dividido pela pressão arterial, utilizados em estudos nos quais a pressão arterial pode mudar ao longo da duração do estudo (ou seja, durante o exercício ou tratamento anti-hipertensivo) 12. Outra quantificação é utilizada para calcular a área sob a curva para o fluxo de sangue ou de expressar a percentagem de aumento no fluxo da linha de base. É importante notar que não há diretrizes estabelecidas para a apresentação de dados, mas os investigadores devem utilizar uma abordagem que apresenta boa reprodutibilidade. Nas grandes vasos, mediada pelo fluxo dilatação (FMD) e trinitrato de glicerilo-dilatação mediada (NGT) são realizados para avaliars endotélio-dependente e função independente do endotélio, respectivamente 20. Febre aftosa é tipicamente levada a cabo na artéria braquial, onde uma braçadeira é utilizado para ocluir o fluxo de sangue arterial durante 5 min; libertação da braçadeira provoca um aumento repentino do fluxo sanguíneo (hiperemia reactiva) através da artéria braquial, resultando em tensão de cisalhamento mediada dilatação do vaso. A linha de base e diâmetro pós-liberação do manguito são quantificados por ultra-sonografia do navio com as avaliações subsequentes do diâmetro do vaso realizada manualmente 20 ou usando software de detecção de borda automatizado 21,22. O uso de GTN ajuda a determinar se as anormalidades na vasodilatação são, devido a uma perda de integridade das células do músculo liso, ou libertação diminuída de NO a partir das células endoteliais 23. Febre aftosa e GTN são expressos como o aumento percentual na pós-estímulo diâmetro do vaso em relação ao diâmetro da linha de base. A avaliação correta da febre aftosa exige uma série deconsiderações importantes no 24,25 protocolo do estudo. A duração da oclusão manguito deve ser cuidadosamente programada; 5 min de oclusão cuff é suficiente para a dilatação mediado pelo tempo mais longo do manguito resultados oclusão em non-NO dilatação mediada por 26. Do mesmo modo, a colocação da braçadeira de oclusão em torno do pulso e distal da sonda de ultra-sons predominantemente invoca NO mediada por dilatação, ao passo que a colocação do manguito na parte superior do braço e proximal à sonda estimula apenas parcialmente NO 27. Também é importante para medir a dilatação pico seguindo a deflação do manguito ao longo de um período prolongado de tempo, pois a medição do diâmetro de pico nos primeiros 60 segundos a seguir a deflação do manguito pode subestimar febre aftosa por 25 - 40% 28. Com efeito, um período de 180 segundos é provável que seja suficiente para capturar diâmetro pico verdadeira, com a maioria dos valores de pico ocorrendo dentro dos primeiros 120 segundos 28. O estímulo para a febre aftosa envolveré a produção de tensão de cisalhamento, que ativa os receptores endoteliais específicos para liberar NO 29. No entanto, a tensão de cisalhamento também pode ativar vários outros fatores vasoativos (alguns dos quais podem causar vasoconstrição) 30, tornando-se essencial que o estímulo tensão de cisalhamento evocado reflete vasodilatação do NO vias 26. Também é importante para explicar o estímulo tensão de cisalhamento durante a febre aftosa, com o cálculo da velocidade de corte (velocidade / diâmetro) que serve como uma medida adequada de tensão de cisalhamento, mas não necessariamente reflete o pico de fluxo 31. Recomendações fisiológicas recentes sugerem que o perfil de tensão de corte deve ser sempre caracterizado quando os sistemas de ultra-som permitem a medição simultânea da velocidade da onda de pulso e de modo B ativa de imagem em modo duplex 25. Avaliação das artérias carótidas, utilizando-mode B ultra-som pode fornecer informações sobre a espessura da camada íntima-média (CIMT), e foi o primeiro described em 1986 por Pignoli e colegas 32. Avaliação da cIMT reflete a proliferação de células musculares lisas para a íntima do vaso e é um bom preditor de eventos clínicos em aterosclerose precoce 33. Carótida ultra-som, muitas vezes pode prever estrutura arterial melhor do que técnicas semelhantes (como ressonância magnética ou avaliações radiográficas) 34. Além disso, os associados CIMT com um número de fatores de risco cardiovascular clássicos, incluindo o envelhecimento, hipertensão e dislipidemia 35. As alterações nas paredes da artéria carótida são geralmente iniciado por uma redução da biodisponibilidade que promove a inflamação no interior do vaso 36. A artéria carótida comum, artéria carótida interna e carótida pontos de bifurcação pode ser usado para determinar cIMT, como cada local podem igualmente prever eventos cardiovasculares 37. Neste manuscrito, nós fornecemos metodologia detalhada sobre a avaliação de microvascular função endotelial (LDI com iontoforese), função endotelial grande navio (FMD e GTN) e morfologia vascular (CIMT). A aterosclerose é um processo multi-fase, que começa com a disfunção endotelial e termina com lesões ateroscleróticas focais nas artérias de grande calibre. A justificativa para a escolha das avaliações acima é que eles refletem os diferentes estágios da aterosclerose e ajudar a explicar a natureza heterogênea da vasculatura 38. Além disso, já haviam demonstrado que, em uma população de pacientes com risco aumentado para doenças cardiovasculares, a função endotelial microvascular foi independente da função endotelial grande vaso 39, e avaliações funcionais foram independentes das avaliações estruturais da vasculatura 40. Portanto, a avaliação global da vasculatura pode ajudar a decifrar as diferentes fases da aterosclerose.

<table><tbody><tr><td>Laser Doppler Imager</td><td>Moor Instruments, Devon, Reino Unido</td><td>moorLDI2</td><td></td></tr><tr><td>Controlador de iontoforese</td><td>Moor Instruments, Devon, Reino Unido</td><td>MIC2</td><td></td></tr><tr><td>Miochol-E 20 mg</td><td>Novartis UK</td><td>Prescrito pelo médico</td><td>Acetilcolina para função dependente do endotélio</td></tr><tr><td>Nitroprussiat Fides 50 mg</td><td>Rottapharm Espanha</td><td>Prescrito pelo médico</td><td>Nitroprussiato de sódio para função independente do endotélio</td></tr><tr><td>Ultrassom Doppler</td><td>Siemens PLC, Camberley UK</td><td>Accuson Antares</td><td></td></tr><tr><td>Nitroglicerila Trinitrato 500 mcg</td><td>Alpharma, Barnstaple, Reino Unido</td><td>Prescrito pelo médico</td><td></td></tr></tbody></table>

uma abordagem metodológica para avaliações não-invasivas de função vascular e morfologia

A Methodological Approach to Non-invasive Assessments of Vascular Function and Morphology

O endotélio é o revestimento mais interno da vasculatura e está envolvido na manutenção da homeostase vascular. Danos ao endotélio podem predispor o vaso à aterosclerose e aumentar o risco de doença cardiovascular. As avaliações da função endotelial periférica são bons indicadores de anormalidades precoces na parede vascular e se correlacionam bem com as avaliações da função endotelial coronariana. O presente manuscrito detalha as etapas metodológicas importantes necessárias para a avaliação da função endotelial microvascular usando imagem Doppler a laser com iontoforese, função endotelial de grandes vasos usando dilatação mediada por fluxo e aterosclerose carotídea usando ultrassom da artéria carótida. Uma discussão sobre as considerações metodológicas para cada uma das técnicas também é apresentada e recomendações são feitas para pesquisas futuras.

Laser Doppler com Iontoforese As unidades de fluxo de sangue médios após os exames de imagem de laser Doppler de um saudável de meia-idade feminina livre de DCV são apresentados na Figura 1. Houve um aumento acentuado no fluxo de sangue mediana para tanto Ach e SNP. Fluxo de sangue da linha de base foi de 48 unidades de perfusão para ACH, e 67 unidades de perfusão para SNP. Fluxo de sangue Peak em resposta a ACh foi 455 unidades de perfusão, e para SNP 446 unidades de perfusão. Isto produziu um aumento 831% e 566% em perfusão (em relação à linha de base) para Ach e SNP, respectivamente. Os valores fornecidos são altamente dependente do equipamento utilizado para examinar o fluxo sanguíneo da pele, juntamente com os factores ambientais. Dilatação fluxo-mediada e Dilatação nitroglicerina mediada A figura 2 mostra os diâmetros da linha de base e de pico de febre aftosa e de avaliações GTN de um jovem macho saudável, livre de doenças cardiovasculares. Odiâmetro basal da artéria braquial foi de 3,0 mm, para as avaliações de febre aftosa e GTN. O diâmetro máximo no teste da febre aftosa foi de 3,3 mm, enquanto que para a avaliação GTN que foi de 3,9 mm, o que corresponde a um aumento de 10 e 30% no fluxo de sangue, respectivamente, em relação à linha de base. Carótida espessura íntima-média A Figura 3 mostra a artéria carótida esquerda de um indivíduo saudável. Cálculo dos valores CIMT é realizada utilizando software de detecção de borda automatizado. O cIMT na parede agora foi 0,83 milímetros e diâmetro do lúmen do vaso foi 7,71 milímetros. Os resultados para a artéria carótida direita no mesmo indivíduo eram 0,87 milímetros para cIMT, e 7,80 milímetros de diâmetro do lúmen. Quando a média da leitura de ambos os lados, cIMT foi 0,85 milímetros, e diâmetro do lúmen foi 7,76 milímetros. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52339/52339fig1highres.jpg" /> Figura 1. Changes no fluxo sanguíneo em resposta ao Doppler laser com iontoforese. Após a conclusão de uma linha de base para medir o fluxo de digitalizar sangue baseline, 10 scans (varredura de 1 a 10) com iontoforese de Ach e SNP, usando uma corrente de 30 mA elétrica foram realizadas. Seguindo iontoforese, 2 varreduras de recuperação foram realizados. ACh = acetilcolina; SNP = nitroprussiato de sódio. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52339/52339fig2highres.jpg" /> Figura 2. mediada por fluxo e de trinitrato de glicerilo mediada dilatação. O gráfico mostra o diâmetro da linha de base e um claro aumento nos diâmetros de pico após a aplicação dos mediada por trinitrato de estímulos dilatação fluxo-mediada e glicerílicos. FMD = dilatação fluxo-mediada; GTN = glicerilo dilatação mediada por trinitrato. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52339/52339fig3highres.jpg" /><br/&gt; Figura 3. A ultra-sonografia da artéria carótida. A ultra-sonografia da artéria carótida esquerda é mostrado com uma região de interesse colocado um centímetro do bulbo carotídeo (ponto de bifurcação). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52339/52339fig3large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura .</a>

O presente artigo descreve as considerações metodológicas para várias avaliações não invasivas da função e morfologia vascular que são comumente usadas em pesquisas médicas para avaliar diferentes estágios da aterosclerose.

Uma abordagem metodológica para avaliações não-invasivas de função vascular e Morfologia

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis.  Damage to the endothelium may ...

O objetivo geral do experimento a seguir é examinar a arteriosclerose subclínica em diferentes territórios vasculares. Primeiro, a imagem de Doppler a laser com iontoforese de medicamentos vasodilatadores é utilizada para examinar a função endotelial microvascular. Em seguida, a dilatação mediada pelo fluxo e a dilatação mediada por nitrato de glicerina são utilizadas para examinar a função endotelial de grandes vasos.Por fim, a espessura da camada íntima-média carotídea é analisada em busca de alterações morfológicas avançadas. Os resultados mostram alterações na função endotelial de microvasos e vasos de grande calibre em resposta à estimulação. Além disso, a parede do vaso da artéria carótida também é caracterizada.Esses métodos podem ajudar a responder perguntas fundamentais na área da fisiologia cardiovascular, como determinar o impacto de intervenções na saúde vascular em diferentes populações clínicas. Primeiro, prepare o imagiador a laser doppler. Deixe-o aquecer por meia hora ou mais.Calibre a máquina e prepare o software para uso. Além disso, prepare as soluções na câmara de acrílico. Em seguida, leve o participante do estudo até o assento do aparelho de imagem, com o participante levemente reclinado e apoiado em um travesseiro firme, com um cotovelo flexionado em 90 graus e o antebraço confortavelmente posicionado sobre um tapete preto.Certifique-se de fixar o antebraço ao travesseiro para que permaneça no lugar sobre o tapete. Em seguida, prepare as câmaras de perspex. Primeiro, conecte suas tampas ao controlador de iontoforese.Em seguida, conecte a câmara contendo acetilcolina à ligação anódica e conecte a câmara contendo nitroprussiato de sódio à ligação catódica. Depois, conecte as duas câmaras à face volar do antebraço fixado utilizando placas adesivas dupla face. Além disso, cubra as câmaras com lamínulas de 32 milímetros.Agora, no software do scanner, abra a janela de configuração do scanner localizada no canto superior esquerdo da tela inicial. Selecione a guia de digitalização de imagem e determine a área a ser digitalizada clicando no botão marcar no canto inferior direito da janela. Posicione cuidadosamente a cabeça do scanner para que ela digitalize com precisão a área de interesse, se necessário.Altere manualmente a região de interesse inserindo o tamanho da área de varredura na seção de área de varredura próxima ao topo da janela. Certifique-se de que a região de interesse inclua o diâmetro de cada uma das câmaras de iontoforese e seja grande o suficiente para limitar a variabilidade do fluxo sanguíneo cutâneo. A varredura pode agora ser iniciada após a conclusão da configuração.Utilize o software de análise de imagem LDI. Para abrir o arquivo de dados, selecione a opção de revisão de imagem na janela principal.Agora delimite uma região de interesse ao redor dos diâmetros externos de cada câmara. Em seguida, clique no ícone de estatísticas e uma coluna contendo as unidades medianas de perfusão para cada câmara será exibida a partir dos 12 exames de cada câmara. Anote a unidade de perfusão basal e a unidade de perfusão mais alta.Comece configurando o aparelho de ultrassom Doppler e o software de análise de imagens vasculares com imagem em tempo real. Em seguida, apresente a configuração ao participante e peça que ele se acomode confortavelmente na cadeira. Solicite ao participante do teste que remova qualquer joia do punho e use uma almofada para apoiar o braço de forma confortável.Em seguida, coloque uma braçadeira de pressão arterial ao redor do punho do participante. Ela deve ser mantida o mais imóvel possível. Depois, fixe a matriz linear de transdutores do aparelho em um suporte estereotáxico.Em seguida, aperte o grampo no transdutor. Depois, acesse o menu na máquina de ultrassom. Ajuste a frequência de varredura para cinco megahertz e defina a profundidade em cerca de 3,5 centímetros.Agora, utilizando o transdutor, localize a artéria braquial com varredura longitudinal. Ela geralmente está a dois a dez centímetros acima da fossa antecubital. Em seguida, ajuste o ganho para obter um brilho simétrico nas paredes próxima e distante do vaso.O Doppler colorido mostrará o pulso sanguíneo arterial passando pela artéria, o que a distinguirá de quaisquer veias. Ajuste a visualização da artéria braquial para que ela seja claramente visível e horizontal na tela. Deve aparecer como duas linhas paralelas contínuas separadas por uma área clara entre as linhas no software.Use o cursor para marcar a região de interesse e o software registrará automaticamente. O ajuste do diâmetro do vaso na área pode ser feito com os botões X e Y na tela principal. Agora, clique no botão iniciar e imagine a artéria por dois minutos.Em seguida, pressione inflar para gravar durante cinco minutos enquanto infla o manguito de pressão arterial até as pressões sistólicas. O fluxo sanguíneo para a mão deve ser ocluído pelo manguito após a desinflação do mesmo. Continue a gravação por três minutos.Neste momento, induz-se a hiperemia, o que estimula a vasodilatação mediada por óxido nítrico. Em seguida, realize um período de repouso de 10 minutos. Depois, localize novamente a artéria braquial e realize uma nova gravação basal do diâmetro da artéria por dois minutos.Agora, peça ao participante para ingerir sublingualmente um comprimido de 500 gramas de trinitrato de glicerol e continue o registro por cinco minutos. Após cinco minutos, o comprimido deve ser removido e o participante deve ser monitorado quanto a efeitos adversos. Ao analisar os dados, certifique-se de verificar a região basal em busca de artefatos, excluindo quaisquer artefatos antes de calcular a média dos valores restantes para obter o diâmetro basal.Além disso, durante a análise da dilatação mediada por fluxo, inspecione a região de dilatação máxima detectada automaticamente. Se ela estiver incorretamente identificada, selecione manualmente uma região mais restrita, que contenha o pico. Para esta medição, peça ao participante que se deite confortavelmente em uma cama com um travesseiro.Em seguida, configure os eletrodos de ECG para um traçado básico. Afixe-os em ambos os braços e no tornozelo esquerdo. Depois, acesse o menu e defina a frequência de varredura como 10 megahertz e a profundidade de gravação entre três e quatro centímetros.Em seguida, ajuste o ganho como antes. Agora, peça ao participante para girar levemente a cabeça para a esquerda e use o transdutor de arranjo linear para examinar a artéria carótida direita. Procure um ponto de bifurcação no vaso, pois esse ponto mostra a artéria carótida comum se dividindo nas artérias carótidas interna e externa.Realize a varredura da artéria carótida ao longo de todas as suas seções em plano longitudinal. Identifique a artéria comum interna e externa caso alguma placa seja observada. Salve as imagens agora.Obtenha pelo menos três imagens de uma seção livre de placa e situada a cerca de um centímetro da bulha carotídea. Peça ao participante que gire a cabeça para o outro lado e repita o procedimento para documentar a artéria carótida esquerda. Posteriormente, analise as imagens fora de linha utilizando o pacote de software de medição arterial, coletando os valores de EIMC e diâmetro do lúmen.Esteja ciente de que leituras precisas próximas à parede não podem ser obtidas, portanto analise apenas leituras provenientes da parede oposta. A imagem de Doppler a laser com iontoforese foi utilizada em uma mulher saudável de meia-idade sem doença cardiovascular. Houve um aumento acentuado no fluxo sanguíneo mediano com ambos os estímulos.O fluxo sanguíneo máximo atingiu 455 unidades de perfusão para acetilcolina e 446 unidades de perfusão para nitroprussiato de sódio. A dilatação mediada por fluxo e a dilatação mediada por trinitrato de glicerol foram ambas investigadas em uma mulher jovem saudável, livre de doenças cardiovasculares. O teste de dilatação mediada por fluxo aumentou o diâmetro da artéria em cerca de 10%, e a dilatação mediada por trinitrato de glicerol aumentou o diâmetro da artéria em cerca de 30%. A espessura da camada íntima-média da carótida foi avaliada na artéria carótida esquerda de um indivíduo saudável.O valor da IMC para a parede distal foi de 0,83 milímetros e o diâmetro do lúmen foi de 7,71 milímetros. As mesmas medidas na artéria carótida direita foram de 0,87 milímetros e 7,8 milímetros após seu desenvolvimento. Essas técnicas abriram caminho para que pesquisadores da fisiologia cardiovascular compreendessem os mecanismos das doenças cardiovasculares em diferentes populações clínicas.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Capilaroscopia é uma metodologia não-invasiva, relativamente barato para a visualização direta da microcirculação. O antebraço técnica de fluxo de sangue proporciona aceitos não invasivos medidas da função endotelial.

Avaliação não invasiva da função microvascular e endotelial

Velocidade de onda de pulso (VOP) Medição avalia a rigidez arterial por um sistema baseado em tonometria, que mede a velocidade com que a pressão arterial onda viaja ao longo da árvore arterial, normalmente aproximar o tempo que ele leva essa onda de viajar da aorta descendente (usando a carótida artéria como um substituto) a artéria femoral. Carótida-femoral PWV aumenta duas a três vezes ao longo da vida adulta.

Pulso de onda Velocity Ensaios no Estudo Longitudinal de Envelhecimento de Baltimore

O grau de disfunção vascular e contribuindo mecanismos fisiológicos podem ser avaliados em pacientes com doença renal crônica através da medição do fluxo-mediada dilatação da artéria braquial, a velocidade da onda de pulso da aorta, e expressão da proteína de célula endotelial vascular.

Avaliação da função vascular em pacientes com doença renal crônica

A disfunção endotelial está associada a diversas doenças e é preditivo de eventos cardiovasculares adversos em seres humanos. Vasodilatação mediada pelo fluxo (FMD) é um método de ultra-som não invasivo de avaliação da função endotelial. As escolhas metodológicas e experiência do operador podem afetar os resultados. Uma abordagem sistemática à febre aftosa em estudos humanos é discutido aqui.

Avaliação ultra-som de endotelial-dependente do fluxo vasodilatação mediada da artéria braquial em Pesquisa Clínica

Sistemas de tele-microscopia são usados para examinar as propriedades funcionais das arteríolas isoladas de tecido adiposo em resposta a estímulos fisiológicos e farmacológicos. Esta técnica pode ser usada para examinar fenótipos microvasculares em domínios diferentes de tecido adiposo em seres humanos obesos.

Avaliação da função Microvascular de tecido adiposo humano usando tele-microscopia

Este artigo descreve um ensaio bem estabelecido e reprodutível de manchas de lectina para toda a preparação da retina do montagem e os protocolos necessários para a medição quantitativa dos parâmetros vasculares frequentemente alterados em retinopatias proliferativas e não proliferativas.

Quantificação de Parâmetros Vasculares em Retinas inteiras de Camundongos com Retinopatias Não Proliferativas e Proliferativas

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Medida do vasorelaxamento endotélio-dependente na aorta torácica de camundongos utilizando a miografia tensométrica de câmara de pequeno volume

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Aprenda métodos não invasivos para avaliar função vascular e morfologia em pesquisas de aterosclerose. Utilize imagem a laser Doppler com iontoforese, dilatação mediada por fluxo e espessura íntima-média carotídea para estudar fisiologia cardiovascular.

Uma abordagem metodológica para avaliações não-invasivas de função vascular e Morfologia

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