Name: Moderado pré-natal álcool Exposição e quantificação do comportamento social em ratos adultos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Aprenda a expor ratos a álcool pré-natal moderado e quantificar alterações no comportamento social na idade adulta. Este protocolo ajuda pesquisadores a estudar efeitos do álcool no desenvolvimento cerebral.

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Suporte fornecido por AA019462 de concessão ao DAH e AA019884 ao DDS.

Todos os procedimentos descritos aqui e no vídeo que o acompanha foram aprovados pelos Comitês de cuidado e uso de animais Institucional do Centro de Ciências da Saúde e do principal campus da Universidade do Novo México. 1. Pré-natal Ethanol Exposição <ol><li> Obter todos os materiais e produtos químicos necessários: Sacarina hidrato de sal de sódio, 190 etanol de prova (95% de álcool por volume), tubos de vidro de consumo de contas, borracha natural branco # 4 rolha de um buraco, um &quot;ponto de dobrar tubos de bola, os governantes de papel impresso a partir www .vendian.org / mncharity / pasta3 / paper_rulers /. </li><li> Obter ratos comprovadas adulto criador de um fornecedor ou fonte alternativa. Use criadores Long-Evans para os métodos e os dados representativos apresentados neste protocolo. Fêmeas pesam 125-150 g e 6-7 semanas de idade no momento da chegada de tal forma que eles são aproximadamente 9-10 semanas de idade na altura da reprodução (passo 1.5). Assegure-se que todas as barragens prospectivos são mães pela primeira vez. Certifique-se de que os homens são 12semanas de idade no momento da chegada e 15 semanas de idade no início do protocolo de reprodução. </li><li> Casa os animais individualmente em gaiolas de plástico a 22 ° C em um 12 horas de luz / escuridão cronograma reverso (luzes acesas 21:00-09:00 hr). Proporcionar o acesso a comida e água da torneira ad libitum durante todo o estudo, incluindo durante todas as sessões de consumo. Permitir que pelo menos uma semana para aclimatação à facilidade antes de prosseguir para a etapa 1.4. </li><li> Obter pesos corporal basal para cada rato fêmea. </li><li> Avalie os níveis de consumo pré-gravidez em ratas durante 2 semanas. Siga os passos 1.5.1-1.5.6 em ordem. <ol><li> Nos dias 1 e 2 encher um tubo de beber contendo solução de 0,066% de sacarina (sem etanol) em água da torneira. Para quantificar o consumo de apor uma régua de papel com mm de precisão para o tubo de beber antes de preenchê-lo. Utilizar este método, uma vez que reduz o erro de medição associado com tubos de pesagem para quantificar o consumo de etanol. Encha o tubo até a marca de 20 milímetros na régua. Comece quatro horas drinkisessões ng (passos 1.5.1-1.5.6 e 1,7) 1 h após o início da fase de obscuridade (10:00 horas) quando os níveis de actividade e de consumo são mais elevadas. </li><li> No fim de cada sessão de beber quantificar o volume da solução de sacarina que foi consumido. Para facilitar a medição, determinar o volume de solução por mm na régua de antecedência e converter mm para volumes. Para os tubos aqui recomendados cada mm corresponde a 0,366 ml. </li><li> Nos dias 3 e 4 encher um tubo com etanol a 2,5% (v / v) e solução de sacarina 0,066% em água da torneira. No fim de cada sessão de quantificar a quantidade de solução de etanol (peso por kg de peso corporal) que foi consumido. </li><li> No dia 5 e depois disso encher um tubo com 5% de etanol (v / v) e solução de sacarina 0,066% em água da torneira. No fim de cada sessão de quantificar a quantidade de solução de etanol (peso por kg de peso corporal) que foi consumido. </li><li> Após a conclusão da fase de pré-gravidez beber pesar os ratos e calcular o consum média etanolption e desvio padrão para todo o grupo. Remover os ratos para os quais o consumo médio é maior do que um desvio padrão acima ou abaixo da média do grupo do estudo para reduzir a variabilidade na ingestão voluntária durante a gravidez. </li><li> Atribuir os ratos restantes, quer o controle sacarina ou condições PAE tais que os níveis de consumo pré-gravidez são correspondidos, tanto quanto possível para os dois grupos. </li></ol></li><li> Dentro de 1-14 dias par cada rato fêmea com um macho reprodutor comprovado. Ratas não consomem etanol durante a fase de reprodução. Confirmar gravidez pela presença de um tampão vaginal, pesar o rato fêmea, e abrigar seu individualmente. Isto é definido como o dia gestacional 1. Opcionalmente, deixar as ratas com um reprodutor masculino para até 5 dias, após o que removem as fêmeas do estudo. Observação: Como o consumo de etanol durante a gravidez começa às 10:00 h na gestacional dia 1 de inspeção para a presença de um plug vaginal deve ser realizadaantes deste horário. </li><li> Fornecer soluções de etanol ou a sacarina durante 4 horas por dia (1000 a 1400 h) durante o período da gravidez. <ol><li> Começando no dia gestacional 1 proporcionar a rata quer com 0% ou 5% de etanol e solução de sacarina 0,066% na água da torneira com base no trabalho de grupo. Certifique-se de que o volume da solução de etanol desde 0% a ratos de controlo sacarina é comparado com a média do volume de solução etanólica a 5% de álcool consumido pelos ratos. No fim de cada sessão de quantificar a quantidade de solução de etanol (peso por kg de peso corporal) ou a sacarina que foi consumido. </li><li> Pesar barragens rato semanalmente para avaliar o ganho de peso materno. </li><li> Fornecer alimentos e água da torneira em todas as ocasiões, incluindo as sessões de beber. </li><li> Cessar os procedimentos de exposição ao etanol quando a prole nascem. Anote o número de filhotes vivos e do peso das crias ao nascer. Designar o dia do nascimento como pós-natal dia 0. </li><li> Abater o lixo para 10 filhotes ao redor dia pós-natal 2-3. Tentativa to manter uma proporção igual de macho para fêmeas em cada ninhada. Se isso não for possível, a abater 10 crias com um número desigual de machos e fêmeas. </li><li> Grave peso das crias de 2-3 dias após o nascimento. </li><li> Desmamar os animais no dia pós-natal aproximadamente 21-24 e casa em pares do mesmo sexo com um animal da mesma condição de tratamento pré-natal. Não use mais de 1-2 ratos de cada ninhada por experimento para limitar os efeitos potenciais de maca. </li></ol></li></ol> 2. Comportamento Social <ol><li> Obtenha e preparar todos os materiais e equipamentos necessários. <ol><li> Obter um aparelho para a interação social. Use uma câmara com uma parte superior aberta construída de material que é fácil de limpar e desinfetar. A parte da frente do aparelho deve ser coberto com plástico transparente rígido (~ 2 mm de espessura) para a filmagem. Linha as paredes interiores e chão com plástico transparente (~ 2 mm) para ajudar na limpeza e controle de odor. Coloque espelhos ao longo do wa interior de voltall para auxiliar a análise. NOTA: Para obter os dados representativos aqui relatado uma câmara de costume (95 cm de comprimento x 47 centímetros de largura × 43 cm de altura) com uma parte superior aberta e plástico rígido transparente (2 mm de espessura) que cobre o interior eo chão do aparelho foi usado. Espelhos foram colocados ao longo da parede traseira. As dimensões e materiais específicos não são críticos para a medição do comportamento social, no entanto, recomenda-se que as dimensões de ser suficientemente grande para garantir que a interacção social genuíno pode ser distinguido de outros comportamentos. Isto é, o aparelho deve ser suficientemente grande de modo a que os animais não são sempre em estreita proximidade um do outro. </li><li> Obter câmeras de vídeo capaz de gravar em condições de baixa ou nenhuma luz como todos filmagens é conduzido com pouca ou nenhuma iluminação ambiente dentro do espectro visível. Certifique-se de que a câmera tem uma resolução alta dentro do espectro infravermelho, no entanto, qualquer câmera capaz de gravar em ambientes escuros em sua nativamodo de noite ou com iluminadores infravermelhos adicionais deve ser suficiente. </li><li> Posição iluminadores infravermelhos em todo o aparelho para melhorar a iluminação do aparelho de gravação de vídeo. </li><li> Obter lascas de madeira de grau de laboratório (chip Aspen). </li><li> Obter uma escova, pá, dióxido de cloro e álcool isopropílico (70%) para a limpeza do aparelho e entre as sessões de controlo de odores. </li></ol></li><li> Aclimatação aparelhos e comportamento social <ol><li> Para esta fase da experiência, fazer as medições em ratos adultos que são pelo menos 90 dias de idade. </li><li> Antes de cada sessão remover todas as fichas madeiras, limpe o aparelho limpo com álcool isopropílico para controlar odores entre as sessões e fornecer lascas de madeira frescas. Certifique-se de que as aparas de madeira cobrir totalmente o fundo do aparelho. Limpar e higienizar o aparelho com um agente apropriado, tal como o dióxido de cloro, na medida do necessário. </li><li> Durante três dias consecutivos colocar um animal e sua gaiola-mate para ocâmara durante 30 minutos a aclimatar os animais ao aparelho. Durante as sessões de aclimatação todas as luzes da sala estão desligados. </li><li> No final da terceira sessão de casa aclimatação os animais individualmente em gaiolas novas com roupas de cama, comida e água durante 24 horas para motivar a interação social. </li><li> Interação social Record no dia seguinte 24 horas após os animais foram separados. <ol><li> Retire as aparas de madeira a partir do aparelho, limpar e higienizar com dióxido de cloro, limpar com álcool isopropílico para controlar odores, e substituir as aparas de madeira antes da sessão. </li><li> Coloque uma ou mais câmeras para registrar a interação. Posição, pelo menos, uma câmara em frente do aparelho de modo que os espelhos na parede traseira do aparelho pode proporcionar uma perspectiva adicional para análise. </li><li> Recuperar animais um de cada vez e mantenha o animal em frente da câmera para que as características originais do teste padrão da pele pode ser notado. Estes elementos de identificação dea pele pode ser utilizada para distinguir os ratos durante a análise, em vez de marcação artificialmente os animais. Nota: Como muitos aspectos do roedor interação social envolvem sinais olfativos e sentir o cheiro do parceiro, sempre que possível odores estranhos introduzem deve ser evitado. Ratos Long-Evans têm tipicamente alguma característica do padrão da pele que podem ser utilizados para distinguir um determinado par de animais. Para outros estirpes (por exemplo, ratos Sprague-Dawley) abordagens alternativas, tais como marcação da cauda com um corante sem perfume pode ser utilizado. É importante reconhecer que muitos comportamentos de interesse são direcionados para alvos específicos (por exemplo., Anogenital sniffing dirigido perto da base da cauda, ​​os ataques lúdicas dirigidas à nuca, ou ataques agressivos dirigidos para os flancos ou barriga). Marcando os animais mais próximo da ponta da cauda longe destes alvos de interesse é recomendada. </li><li> Grave vídeo da interação social por pelo menos 12 min.</li><li> Monitorar os animais para o combate ao longo da sessão. Se possível, observar os animais através de um monitor ou janela para que o pesquisador não está na sala durante a sessão. NOTA: A luta tem sido raramente observada em estudos com ratos adultos, no entanto, os animais devem ser monitorados durante toda a sessão. A sessão deve ser interrompido se houver luta excessiva ou há sinais de danos ou lesões a um animal. </li></ol></li></ol></li><li> Codificação e análise comportamental. <ol><li> Identificar os seguintes comportamentos de interesse de acordo com o trabalho anterior com PAE 1,18. Quantificar a duração, frequência e latência para a primeira ocorrência dos seguintes comportamentos; luta livre (incluindo fixando), boxe, rastejando (cruzamento) sobre / sob o parceiro, anogenital sniffing, outro sniffing do corpo do parceiro (corpo sniffing), allogrooming (aliciamento do parceiro), criação e sniffing / cavando as lascas de madeira . Exemplos de cada comportamento são ilustrard no componente de vídeo deste artigo. </li><li> Quantificar os comportamentos sociais de interesse do vídeo. Obter a frequência, a duração total e latência para a primeira instância para cada comportamento de interesse. NOTA: A obtenção dessas medidas pode ser alcançado manualmente, no entanto, é recomendado quantificação destas medidas, utilizando análises computadorizadas de vídeo digitalizado. Um script Matlab (www.mathworks.com) para a reprodução de vídeo e quantificação dos comportamentos é fornecido como um complemento a este artigo. </li><li> Após a codificação é concluída para todos os ratos os dados duração, frequência e latência resultantes são analisados ​​com um pacote estatístico. </li></ol></li></ol>

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<li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Play-fighting+differs+from+serious+fighting+in+both+target+of+attack+and+tactics+of+fighting+in+the+laboratory+rat+Rattus-Norvegicus%5BTitle%5D)+AND+%22Aggressive+Behav%22%5BJournal%5D)">Play-fighting differs from serious fighting in both target of attack and tactics of fighting in the laboratory rat Rattus-Norvegicus.</a> Aggressive Behav. 13 (4), 227-242 (1987).</li>
<li>Meaney, M. J., Stewart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+descriptive+study+of+social-development+in+the+rat+%28Rattus-Norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">A descriptive study of social-development in the rat (Rattus-Norvegicus).</a> Anim. Behav. 29 (1), 34-45 (1981).</li>
<li>Pellis, S. M., Pellis, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prejuvenile+onset+of+play+fighting+in+laboratory+rats+%28Rattus+norvegicus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">The prejuvenile onset of play fighting in laboratory rats (Rattus norvegicus).</a> Dev. Psychobiol. 31 (3), 193-205 (1997).</li>
<li>Himmler, B. T., Pellis, V. C., Pellis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peering+into+the+dynamics+of+social+interactions%3A+measuring+play+fighting+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Peering into the dynamics of social interactions: measuring play fighting in rats.</a> J. Vis. Exp. (71), e4288-e4288 (2013).</li>
<li>Panksepp, J., Siviy, S., Normansell, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+psychobiology+of+play+%3A+Theoretical+and+methodological+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">The psychobiology of play : Theoretical and methodological perspectives.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 8 (4), 465-492 (1984).</li>
<li>Siviy, S. M., Panksepp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+modulation+of+juvenile+play+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Psychobiol%22%5BJournal%5D)">Sensory modulation of juvenile play in rats.</a> Dev. Psychobiol. 20 (1), 39-55 (1987).</li>
<li>Pellis, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+orbital+frontal+cortex+damage+on+the+modulation+of+defensive+responses+by+rats+in+playful+and+nonplayful+social+contexts%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The effects of orbital frontal cortex damage on the modulation of defensive responses by rats in playful and nonplayful social contexts.</a> Behav. Neurosci. 120 (1), 72-84 (2006).</li>
<li>Blanchard, R. J., Blanchard, D. C., Takahashi, T., Kelley, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attack+and+defensive+behavior+in+albino-rat%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Attack and defensive behavior in albino-rat.</a> Anim. Behav. 25 (3), 622-634 (1977).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.

O paradigma de exposição pré-natal álcool descrito aqui envolve o consumo voluntário de etanol (5% v / v) por barragens de rato durante a gravidez. Há um número de protocolos de exposição dos animais não-humanos para etanol durante o desenvolvimento do cérebro representado na literatura, os quais diferem no que diz respeito ao tempo, dose, a duração e via de administração de etanol, bem como as espécies em estudo. Apesar de um tratamento exaustivo das vantagens de vários protocolos de exposição não é fornecido aqui, vár...

Estima-se que 1-5% das crianças são diagnosticadas com Transtornos do Espectro Alcoólico Fetal (FASDs) 2, que incluem a Síndrome Alcoólica Fetal (SAF), FAS parcial (DFP), e ligados ao álcool neurodesenvolvimento transtornos (Arnds) 3. Os déficits de comportamento social e cognição estão entre os resultados adversos mais comuns observados em crianças com FASDs 4-7. Consequências negativas não se limitam a exposição pré-natal pesado de álcool (PAE), como moderado PAE que não leva ao déficit morfológicas, comportamentais e cognitivas conspícua característica do FAS pode causar relativamente sutil, mas mesmo assim persistente, déficit em humanos com FASDs 10/08 e animais não-humanos expostos ao etanol durante o desenvolvimento do cérebro 11. A importância de compreender as consequências neurobiológicas e comportamentais correspondentes de moderada PAE é sublinhada pelas estimativas atuais indicam que a grande maioria dos casos FASD estão dentro dos menos severe gama do espectro 12. Vários laboratórios independentes relataram alterações no comportamento social roedor relacionadas à exposição ao etanol durante o desenvolvimento do cérebro, incluindo a diminuição da investigação e interação 1,13-15, alteradas jogo 14,16,17, aumento das interações agressivas 17,18, alterações na capacidade de resposta a estímulos sociais 19-21 e déficits nas preferências alimentares socialmente adquiridos e memória de reconhecimento social 22. Déficits de comportamento social têm sido observadas após a exposição aos pesados ​​(concentrações de etanol no sangue (CEBs) ~ 300mg / dl) níveis mais moderados de etanol (CEBs ~ 80mg / dl) 1 ou 22,23, e através de uma ampla gama de parâmetros para outro significativo fatores, incluindo tempo de exposição, duração da exposição, e idade no momento da medição comportamental. Pesquisas anteriores já haviam demonstrado que as alterações nos aspectos específicos da int sociaiseraction na idade adulta discriminar ratos expostos a níveis moderados de álcool a partir de animais de controle expostos a sacarina 1,18. Em particular, moderada PAE tem sido consistentemente associada com aumentos robustos no wrestling, o que sugere aumentos de comportamento agressivo, e níveis mais baixos de investigação social (por exemplo, farejando do parceiro) na idade adulta. Por causa alterações no comportamento social são consequências confiáveis ​​de PAE, a quantificação do comportamento social seguinte PAE pode deter importância para progredir em direção a uma compreensão mais completa das bases neurais de alterações relacionadas à PAE no comportamento social e do desenvolvimento de abordagens de intervenção. O objetivo deste artigo e o vídeo associado é fornecer instruções sobre o protocolo PAE moderada e métodos para a quantificação do comportamento social em filhos adultos que têm seguramente distinguidos pré-natal da prole não expostos ratos expostos ao álcool.

<table><tbody><tr><td>Hidrato de sal de sódio sacarina</td><td>Sigma</td><td>S1002</td><td></td></tr><tr><td>190 prova de etanol</td><td>Sigma</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de vidro frisado</td><td>Fisher</td><td>14-955K</td><td></td></tr><tr><td>Borracha natural branca # 4 rolha de um furo</td><td>Plasticóide</td><td>LSG4M181</td><td></td></tr><tr><td>1 "tubos de curvatura-ponta esferográfica</td><td>Ancare</td><td>TD-199-3"</td><td></td></tr> <tr><td>Papel réguas</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td><a href="http://www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers">www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers</a></td></tr><tr><td>Aparelho para interação social</td> N/A <td>Construído sob medida</td> N<td>/A</td><td>95 cm X 47 cm X 43 cm Câmeras</td></tr><tr>de<td>vídeo</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Capaz de gravar condições de pouca ou nenhuma luz</td></tr><tr><td>Iluminadores infravermelhos</td><td>Vitek</td><td>VT-IR1-12</td><td></td></tr><tr><td>Teclad grau de laboratório sani-chips</td><td>Harlan</td><td>7090A</td><td></td></tr><tr><td>Escova e pá de lixo</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Álcool isopropílico</td><td>Sigma</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>Dióxido de Cloro (1,5 mg Comprimidos)</td><td>Quiplabs</td><td>N/A</td><td>Preparar por recomendação do fabricante</td></tr></tbody></table>

moderado pré-natal álcool exposição e quantificação do comportamento social em ratos adultos

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

Alterações no comportamento social estão entre as principais consequências negativas observadas em crianças com Transtornos do Espectro Alcoólico Fetal (FASDs). Vários laboratórios independentes demonstraram alterações robustas no comportamento social de roedores expostos ao álcool durante o desenvolvimento do cérebro em uma ampla gama de durações de exposição, tempo, doses e idades no momento da quantificação comportamental. Trabalhos anteriores deste laboratório identificaram alterações confiáveis em formas específicas de interação social após exposição pré-natal moderada ao álcool (PAE) no rato que persistem até a idade adulta, incluindo aumento da luta livre e diminuição da investigação. Essas alterações comportamentais têm sido úteis na identificação de circuitos neurais alterados por PAE1 moderado e podem ter importância para progredir em direção a uma compreensão mais completa das bases neurais das alterações relacionadas ao PAE no comportamento social. Este artigo descreve procedimentos para a realização de PAE moderada em que ratas consomem voluntariamente etanol ou sacarina (controle) durante a gestação e mensuração de comportamentos sociais em descendentes adultos.

Ao longo de muitos ciclos de reprodução ratas na condição etanol beber consistentemente uma média de cerca de 2,1 g / kg de etanol por sessão de beber 4 h. Rato barragens consumir cerca de metade do total de quatro horas durante os primeiros 15 a 30 minutos depois da introdução dos tubos de bebida, resultando numa concentração de etanol no soro materno de pico de cerca de 60 mg / dl, medida no ponto de tempo de 45 min. Durante o restante 3,5 h do período de ingestão, eles continuam a consumir etanol a 5%, a uma taxa inf...

O objetivo do protocolo aqui apresentado é descrever procedimentos para expor ratos a níveis moderados de álcool durante o desenvolvimento cerebral pré-natal e quantificar as alterações resultantes no comportamento social durante a idade adulta.

Moderado pré-natal álcool Exposição e quantificação do comportamento social em ratos adultos

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

Exposição pré-natal moderada ao álcool e quantificação do comportamento social em ratos adultos. Este vídeo descreve um paradigma de exposição pré-natal ao álcool seguido pela quantificação do comportamento social na idade adulta. Todos os procedimentos descritos neste vídeo foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais do Centro de Ciências da Saúde e do campus principal da Universidade do Novo México. Inicie obtendo ratas fêmeas adultas com seis a sete semanas de idade, que apresentem peso médio entre 125 e 150 gramas, e reprodutores machos comprovados.Normalmente, animais com 12 semanas de idade devem ter pelo menos uma semana para se aclimatarem ao seu novo ambiente de alojamento. No geral, a cronologia da exposição pré-natal ao álcool inclui um período pré-exposição de duas semanas, um período de acasalamento no qual os animais não têm acesso ao álcool e o período de exposição pré-natal, que ocorre durante toda a gestação. Os detalhes de cada fase são os seguintes.Para avaliar os níveis de consumo de álcool antes da gravidez, as ratas consomem voluntariamente água com sacarina contendo concentrações progressivamente maiores de álcool durante um período de duas semanas. A função dessa avaliação é identificar ratas que bebem em níveis desejados para as fases subsequentes do protocolo de consumo. Esse aspecto do paradigma de exposição ao álcool também assegura que todas as ratas tenham experimentado o consumo de bebida alcoólica antes da gravidez.Prepare os tubos de bebida reunindo os seguintes materiais. Sal de sódio da sacarina, hidrato, etanol 190 graus, tubos de vidro com contas para beber, borracha natural branca, rolhas brancas com um orifício número quatro, tubos curvos de uma polegada com ponta de esferográfica e réguas de papel. Prepare uma solução estoque de sacarina a 0,066% dissolvida em água da torneira. Utilize uma parte da solução de sacarina a 0,066% para preparar uma solução estoque contendo 2,5% de etanol e outra parte para preparar uma solução estoque contendo 5% de etanol.Prepare os tubos de bebida fixando uma régua de papel em um tubo. Encha o tubo até a marca de 20 milímetros com a solução correta para o dia. Certifique-se de obter os pesos corporais iniciais de cada rata fêmea antes de as sessões de ingestão de bebida, que ocorrem por quatro horas por dia, iniciando uma hora após o início do ciclo escuro.Nos dias um e dois, as fêmeas terão acesso à água com sacarina a 0,066%. Nos dias três e quatro, as fêmeas terão acesso à solução de SAC contendo etanol a 2,5%. A partir do dia cinco, as fêmeas terão acesso à solução de SAC contendo etanol a 5% durante sessões de consumo da solução com etanol a 5%.Continue até a conclusão da fase de consumo de álcool pré-gestação. Alimento e água da torneira estão disponíveis durante todas as sessões de consumo. Ao final da sessão de quatro horas, quantifique o peso da solução de etanol consumida por quilograma de peso corporal.Após a conclusão da fase de consumo de álcool antes da gravidez, calcule o consumo médio de etanol e o desvio padrão para o grupo inteiro e remova os ratos cujo consumo médio esteja um desvio padrão ou mais acima ou abaixo da média do grupo.Designe as ratas restantes para o grupo controle de sacarina ou para o grupo com exposição pré-natal ao etanol. Iguale os níveis de ingestão de álcool antes da gravidez o mais próximo possível. Para os dois grupos, acasale cada rata com um macho reprodutor comprovado.Ratos fêmeas não consomem álcool durante a fase de reprodução. Quando a gravidez for confirmada pela presença de um tampão vaginal, pese a rata e o Hauser individualmente a partir do primeiro dia gestacional. Forneça soluções de álcool ou sacarina de acordo com a atribuição ao grupo.Durante quatro horas por dia, permita o acesso a comida e água da torneira durante os períodos de ingestão. Continue os períodos diários de ingestão ao longo de toda a duração da gravidez. Quantifique diariamente o consumo de ingestão e pese as ratas prenhes semanalmente.Interrompa os procedimentos de exposição ao álcool quando os descendentes nascerem. Designe o dia do nascimento como pós-natal. Dia zero.Chame a ninhada para cerca de 10 filhotes por volta do segundo ou terceiro dia pós-natal e registre os pesos dos filhotes. Desmame os animais aproximadamente entre o 21º e o 24º dia pós-natal e aloje-os aos pares do mesmo sexo, com um animal para a mesma condição de tratamento pré-natal. Não utilize mais de um a dois ratos de cada ninhada por experimento para limitar possíveis efeitos da ninhada.Quantificação do comportamento social na vida adulta. Obtenha todos os materiais e equipamentos necessários. Utilizamos uma câmara personalizada, com 95 centímetros de comprimento, 47 centímetros de largura e 43 centímetros de altura.A câmara é construída em material plástico compósito que pode ser facilmente limpo e desinfetado, e possui uma frente em plástico transparente e topo aberto. O piso e as paredes laterais são revestidos com plástico para facilitar a limpeza. A parede interna traseira é coberta com ladrilhos espelhados para auxiliar na análise.Materiais adicionais necessários incluem as seguintes câmeras de vídeo capazes de gravar em condições de pouca ou nenhuma luz. Idealmente, a câmera deve ter alta resolução no espectro infravermelho e iluminadores infravermelhos, que são posicionados ao redor do equipamento para melhorar a iluminação do aparato. No laboratório de gravação, são necessários fragmentos de areia de grau laboratorial, uma escova e uma pá para limpar o equipamento entre as sessões e álcool isopropílico a 70% para eliminar odores de rato entre as sessões.Para a medição na idade adulta, os ratos têm pelo menos 90 dias de idade quando esta fase do experimento começa; durante três dias consecutivos, um animal e seu companheiro de gaiola são colocados no aparelho por 30 minutos para se aclimatarem ao equipamento. Antes de cada sessão, todas as aparas de madeira são removidas. O aparelho é limpo com álcool isopropílico e novas aparas de madeira são fornecidas, mantendo o equipamento limpo e desinfetado com um agente de limpeza apropriado.Se necessário, as lascas de madeira devem cobrir completamente o fundo do aparelho. Durante a sessão de aclimatação, todas as luzes do ambiente são desligadas ao final da terceira sessão de aclimatação. Mantenha os animais individualmente em novas gaiolas com lascas de madeira frescas, alimento e água.A interação social é registrada no dia seguinte, 24 horas após a separação dos animais, com o objetivo de avaliar o comportamento social. Comece limpando o equipamento e substituindo as lascas de madeira. Posicione uma ou mais câmeras para gravar a interação. Em nosso laboratório, utilizamos as características únicas dos padrões da pelagem como forma de identificar os animais individuais; alternativas para marcar os animais são descritas no texto. Após a conclusão da gravação da interação social, identifique os comportamentos de interesse em nosso laboratório.Quantificamos comportamentos direcionados ao parceiro e outros comportamentos direcionados ao ambiente. Em nossos estudos anteriores, luta e outras medidas de investigação social, como farejamento anal, farejamento genital ou allogrooming, distinguiram de forma confiável animais expostos ao etanol de animais expostos à sacarose. Nos clipes de vídeo a seguir, são apresentados exemplos de cada comportamento de interesse.Luta ocorre quando um ou ambos os animais estão envolvidos em uma tentativa de atacar o parceiro e frequentemente resulta em um dos membros do par imobilizando o outro animal de lado ou de costas. A luta é frequentemente precedida por perseguição e também pode ser precedida por outros comportamentos, como boxe, passar por baixo, bem como cheirar a região genital. O registro dos comportamentos é encerrado quando os animais se separam.Ocasionalmente, os animais podem iniciar rapidamente uma nova rodada de luta caso tenham se separado claramente um do outro. A segunda rodada seria codificada como uma instância separada. Como a luta exige a participação de ambos os animais do par, as medidas devem ser equivalentes para o par durante a codificação.Você também pode desejar anotar quais animais acabaram imobilizando em vez de serem imobilizados, bem como qual animal se envolveu em perseguição e saltos. Pode ser útil também codificar separadamente os comportamentos que compõem os episódios de luta. Se for necessária uma análise mais detalhada na luta, ambos os animais se erguem sobre os membros posteriores e empurram um ao outro com as quatro patas.Em episódios de cruzamento ou passagem por baixo, um animal deliberadamente sobe sobre ou mergulha sob o parceiro. Nesse comportamento, um animal cheira a região ânogenital do parceiro. Uma função do cheiramento ânogenital é a identificação.O farejamento do corpo refere-se ao farejamento do corpo do parceiro e geralmente é direcionado para o lado ou flanco do parceiro. A alo-limpeza é a limpeza do parceiro por outro indivíduo. A limpeza é tipicamente direcionada para a nuca e a região da cabeça.No comportamento de levantar, o animal ergue-se sobre as patas traseiras; comportamentos semelhantes, como cavar e farejar no leito, são ações comuns direcionadas ao ambiente que fornecem uma medida do comportamento voltado para o substrato utilizado no aparelho. Para codificação e quantificação dos comportamentos, utilizamos um programa personalizado em MATLAB desenvolvido em nosso laboratório. As principais características deste programa são a reprodução do vídeo em velocidade variável, botões de alternância associados a cada comportamento de interesse, cujo estado ligado ou desligado indica a presença ou ausência do comportamento, codificação temporal automática do início e do término de cada comportamento e saída de dados, incluindo duração total, frequência e latência até a primeira ocorrência de cada comportamento. Após a conclusão da codificação para todos os animais, os dados resultantes de duração, frequência e latência são analisados com um pacote estatístico. No exemplo apresentado aqui, pode-se observar que a frequência, duração e latência até a primeira ocorrência de luta, bem como a duração do farejamento anal e genital, diferiram significativamente entre animais expostos à sacarina e ao etanol.Outras medidas comportamentais não diferenciaram os grupos. Os métodos apresentados neste vídeo otimizaram o processo de análise do comportamento social após exposição pré-natal ao etanol, transformando-o em um protocolo simples e eficiente. Além da utilidade dessa abordagem para diferenciar ratos expostos a níveis moderados de etanol durante o desenvolvimento pré-natal de animais não expostos, esses métodos podem ser facilmente adaptados para a avaliação de outros protocolos de exposição ao etanol, incluindo variações no momento, dose, duração e idade no momento da análise comportamental.Além disso, os comportamentos específicos quantificados durante a análise podem ser adaptados para capturar os principais efeitos da exposição ao etanol em várias fases do desenvolvimento.

moderate-prenatal-alcohol-exposure-quantification-social-behavior

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

A fim de compreender os mecanismos moleculares dos danos induzida por etanol de desenvolvimento, temos desenvolvido um modelo de peixe-zebra de exposição ao etanol e estão explorando as características físicas, as alterações celulares e genéticas que ocorrem após a exposição ao...

Avaliar as alterações teratogênicos em um modelo de Zebrafish de exposição fetal ao álcool

O delineamento experimental proposto aqui se concentrar em estudar os efeitos da exposição ao álcool na apoptose e da aplicação de peptídeo neurotrófico durante a gravidez no cérebro fetal. Uma descrição detalhada da criação para a coleção de cérebros fetais é descrito. As técnicas para a determinação da apoptose são também descritos em detalhe.

Métodos experimentais para testar os efeitos de Peptide Neurotrophic, ADNF-9, contra a apoptose induzida pelo álcool durante a gravidez em camundongos C57BL / 6

Nós demonstramos a construção de câmaras de vapor de álcool, utilizando materiais facilmente disponíveis que abrigam simultaneamente seis gaiolas de rato. Descrevemos ainda mais a sua utilização em um modelo do rato de exposição fetal ao álcool equivalente a todos os 3 trimestres de gestação humana. Este paradigma expõe animais durante a gestação e pós-natal dias 1-12.

Construção de vapor Chambers usada para expor Ratos ao álcool durante o equivalente a todos os três trimestres de Desenvolvimento Humano

O exercício cardiovascular e estimulantes experiências em um ambiente complexo ter benefícios positivos em várias medidas de neuroplasticidade dentro do cérebro de roedores. Este artigo irá discutir a implementação destas intervenções como um "superintervention", que combina corrida roda e complexidade ambiental e abordará as limitações dessas intervenções.

Corrida roda e complexidade ambiental como uma intervenção terapêutica em um modelo animal de FASD

Condicionamento de rastreamento eyeblink clássico (ECC) foi utilizado para avaliar aprendizagem associativa de hipocampo-dependente em ratos adultos que foram administrados uma alta concentração (11,9% v/v) de álcool durante o desenvolvimento cerebral neonatal precoce. Em geral, procedimentos ECC são som ferramentas de diagnóstico para a detecção de disfunção cerebral em muitas configurações psicológicas e biomédicas.

O uso do condicionamento de rastreamento Eyeblink clássico para avaliar disfunção Hippocampal em um modelo do rato de transtornos do espectro do álcool Fetal

Este trabalho descreve um protocolo para quantificar os níveis de etanol em um embrião de zebrafish usando cromatografia de gás espacial da cabeça de métodos de exposição adequados ao processamento de embriões e análise de etanol.

Quantificação dos níveis de etanol em embriões de zebrafish usando cromatografia de gás espacial da cabeça

Apresentado aqui está um protocolo para o modelo 2BC/CIE de dependência de álcool em camundongos para estudar o transtorno por uso de álcool.

Exposição Crônica Intermitente ao Vapor de Etanol Emparelhada com Escolha de Duas Garrafas para Modelar o Transtorno por Uso de Álcool

O objetivo do protocolo atual é delinear as etapas necessárias para estabelecer e usar um ensaio de preferência social para peixes-zebra adultos e demonstrar que ele pode ser usado para caracterizar defeitos sociais induzidos por etanol.

Modelagem de distúrbios do espectro alcoólico fetal em peixe-zebra para caracterizar o impacto de um ambiente embrionário adverso no comportamento social adulto

Este protocolo descreve um paradigma padrão de consumo doméstico de duas garrafas de acesso intermitente para modelar o consumo de álcool em ratos. Além disso, fornece instruções passo a passo para aumentar o protocolo padrão com um sistema de detecção de lambedura DIY que permite a análise microestrutural do comportamento de beber.

Modelagem do consumo de álcool em roedores usando o consumo de álcool em gaiola doméstica de escolha de duas garrafas e análise microestrutural

À medida que as restrições legislativas mudam, resultando em maior acessibilidade aos produtos canabinóides, é extremamente importante desenvolver modelos para estudar o impacto dessas exposições, principalmente durante a gravidez. Um modelo pré-clínico de exposição pré-natal moderada a canabinóides por meio de ingestão voluntária foi desenvolvido, permitindo investigações mais aprofundadas.

Modelo pré-clínico de exposição pré-natal ao delta-9-tetrahidrocanabinol para avaliar seu impacto nos resultados do neurodesenvolvimento

Aprenda a expor ratos a álcool pré-natal moderado e quantificar alterações no comportamento social na idade adulta. Este protocolo ajuda pesquisadores a estudar efeitos do álcool no desenvolvimento cerebral.

Moderado pré-natal álcool Exposição e quantificação do comportamento social em ratos adultos

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