Name: Laboratório de Fisiologia Demonstração: Taxa de filtração glomerular em um Rat (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: Aprenda a medir a taxa de filtração glomerular, fluxo urinário e excreção de sódio e potássio em ratos. Este protocolo demonstra técnicas essenciais para o ensino da fisiologia renal.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

A fonte de financiamento para a demonstração laboratório estava concessão NIGMS: GM077119. Agradecemos ao Dr. Joseph R. Haywood e Dr. Peter Cobbett pelo apoio do Short Couse em Integrative e Órgão Sistemas de Farmacologia. Agradecemos também a Senhora Hannah Garver por seu apoio técnico da demonstração laboratorial.

Antes de qualquer procedimento animal, o cuidado com os animais e uso comitê institucional (IACUC) deve aprovar o protocolo. Este protocolo foi aprovado pela Michigan State University IACUC. 1. Preparação de pré-laboratório de solução de FITC-inulina <ol><li> Aqueça 20 ml de solução salina a 70 ° C e agita-se lentamente em 100 mg de FITC-inulina (5 mg / ml de FITC-inulina) de inulina é até que todo dissolvido. </li><li> Solução arrefecer até à TA e adicionar 800 mg de albumina de soro de bovino (40 mg / ml de BSA, em pó liofilizada, essencialmente livre globulina, baixa endotoxina, ≥98% de pureza por electroforese em gel de agarose). </li><li> Filtra-se a solução de inulina-BSA com papel de filtro (grau 1). Coloque a solução filtrada em uma seringa de 20 ml com um filtro de seringa com ponta (0,2 um) e cobrir com folha de a proteger da luz. </li></ol> 2. Anestesia e Cirurgia <ol><li> Coloque o rato em uma câmara de indução preenchido com 5% de isoflurano para induzir a anestesia. Grave bodpeso y (250-350 g) e colocar o rato numa plataforma cirúrgica aquecido concebido para manter 37 ° C a temperatura do corpo durante todo o experimento. Segurar cuidadosamente o rato para a plataforma com fita de laboratório sobre as patas. Manter a anestesia com 1-2% de isoflurano com classe médica 100% O 2 a taxa de fluxo de ar de 0,8-1,0 L / min. </li><li> Inserir um cateter cônico (OD ponta intravascular, 2.7F) na artéria femoral para pressão arterial e monitoramento da freqüência cardíaca, e coleta de sangue. </li><li> Inserir um cateter (PE-50) na veia femoral para infusão de inulina. Prenda o cateter ao tecido com 5-O trançado de seda de sutura cirúrgica 6 circundante. </li><li> Fixe o cateter arterial a um transdutor de pressão calibre de tensão. Pressão arterial e freqüência cardíaca registro usando o software de aquisição de dados e exibição em uma tela de computador em tempo real. Esta técnica é demonstrado em detalhe em vídeo 6. </li><li> Expor a bexiga através de uma incisão suprapúbica. Corte um pequenoorifício na ponta da bexiga e da inserção de uma cânula (PE-190) com uma ponta de calor queimado no interior da bexiga para a recolha de urina. Fixe a cânula para a bexiga com uma sutura em bolsa. </li></ol> 3. urina e coleta de sangue <ol><li> Colocar a seringa de FITC-inulina em uma bomba de seringa com velocidade de fluxo definido de 1 ml / h por 100 g de peso corporal (3 ml / h durante um rato pesando 300 g). Fixe a seringa para o cateter na veia femoral. Iniciar a infusão de inulina e permitir um período de equilíbrio de 1-2 horas. Manter seringa coberto de uma camada para proteger da luz. </li><li> Determinar se o ritmo de fluxo de urina é estável e adequado para a análise de amostras (20 ul / min) através da recolha de uma amostra de urina de uma pré-pesados ​​para um frasco de recolha período de 10 min. Determinar o volume de urina por gravimetria com uma balança digital. Um volume de urina suficiente durante um período de recolha de 10 min é de 0,2 ml. Continuar a recolher amostras de urina até duas coleções consecutivos indicam uma taxa de fluxo de urina de 20 l / mou mais. </li><li> Amostras pré-droga <ol><li> Recolher uma amostra de urina durante um período de 20 min. Recolher uma amostra de sangue (0,5 ml) a partir do cateter arterial, no ponto médio do período de recolha de urina. Tenha o cuidado de limpar completamente o cateter arterial de solução salina antes de coletar uma amostra de sangue em um frasco contendo uma coleção U heparina. Use frascos de coleta com marcações de volume para facilitar a recolha de 0,5 ml de sangue arterial. </li><li> Lave o catéter arterial com heparina-solução salina (20 U / mL) para limpar o cateter de sangue (aprox. 0,1 mL). O comprimento do cateter arterial deve ser tão curto quanto possível, para limitar o volume de solução salina de heparina-necessária para descarregar. Nota: as amostras de sangue diluído produzir cálculos imprecisos de TFG e excreção fracionada de Na e K. </li><li> Aguarde 10 minutos e repita a cobrança de uma segunda urina Pré-drogas e amostra de sangue. </li></ol></li><li> Após a coleta de duas amostras de pré-droga, administrar um diurético drug, a furosemida (10 mg / kg), através do cateter arterial. Lave o cateter arterial com solução salina heparinizada para limpar o cateter de drogas. Ter o cuidado de evitar a injecção de ar através do cateter arterial. Anote o tempo da injeção de furosemida. </li><li> As amostras post-droga: Em cada um dos três pontos de tempo a seguir, recolher uma amostra de urina durante um período de recolha de 10 min, e uma amostra de sangue (0,5 ml) no ponto médio do período de recolha de urina. <ol><li> Para Sample Post-Drogas 1 - coletar cinco minutos após a furosemida. </li><li> Para Post-Drogas Amostra 2 - recolher dez minutos após a furosemida. </li><li> Para Sample Post-Drogas 3 - recolher quinze minutos após a furosemida. </li></ol></li><li> Depois de todas as amostras foram coletadas, eutanásia do rato em conformidade com os procedimentos institucionais por toracotomia e remoção do coração. Remova ambos os rins. Decapsulate (remover a membrana que envolve) e apagar os rins para remover o excesso de sangue. Pesar os rins. </li></ol><ol><li> Meça todos os volumes de amostras de urina por gravimetria com uma balança digital, e pesos recordes. </li><li> Amostras de sangue total de centrifugação, utilizando uma centrífuga de bancada (1800 x g) para separar o plasma. Transferir as amostras de plasma para pequenos frascos rotulados. </li><li> Analisar as concentrações de sódio e potássio em amostras de urina e plasma com um analisador de sódio / potássio. </li><li> Medição de FITC-inulina no plasma e urina <ol><li> Dilui-se a urina de pré-droga (de 1: 200 a 1: 400), e na urina pós-fármaco (1:10) com tampão HEPES (500 mM, pH 7,4). </li><li> Adicionar 40 ul de padrão ou de amostra ul e 60 de tampão HEPES numa placa de 96 cavidades (uma amostra por cavidade) e deixa-se misturar durante 10 min enquanto se coberto com folha de alumínio. </li><li> Gerar uma curva padrão para FITC-inulina, relativamente às concentrações de 6,25, 12,5, 25, 50, 100, 200, 400 ug / ml (Figura 1). Determinar a fluorescência de FITC-inulina em amostras e padrões usando um leitor de microplacas com excitação e comprimentos de onda de emissão de 485 e 538 nm, respectivamente. </li><li> Encaixe os valores fluorescentes para os padrões de uma análise de regressão função logística de 4 paramter. Os parâmetros da função de regressão são usados ​​para calcular a concentração de FITC-inulina em amostras de plasma e de urina (Tabela 1). </li></ol></li></ol> 5. Pós-laboratório Análise de Resultados: Cálculos <ol><li> Calcular Urina Taxa de Fluxo (UV; ml / min): [volume de urina recolhida (ml)] ÷ [tempo da recolha (min)] </li><li> Calcular Taxa de Filtração Glomerular (GFR; ml / min): [a concentração de inulina urina (ug / ml) x UV (ml / min)] ÷ [inulina conc plasma. (Ug / ml)] </li><li> Calcular filtrada Carga de sódio (pmol / min): concentração de sódio no plasma (nmol / ml) x TFG (ml / min) </li><li> Calcular excreção de sódio Classificação (U Na V; umol / min): concentração de sódio na urina (pmol / ml) x UV (ml / min) </li><li> Calcule Fractional excreção de sódio (FE Na;%): [L Na V (pmol / min)] ÷ [Carga de sódio filtrado (pmol / min)] x 100 </li><li> Calcular carga filtrada potássio (pmol / min): a concentração de potássio no plasma (nmol / ml) x TFG (ml / min) </li><li> Calcular excreção de potássio Classificação (L K V; umol / min): concentração de potássio da urina (pmol / ml) x UV (ml / min) </li><li> Calcule Fractional excreção de potássio (K FE;%): [U K V (mmol / min)] ÷ [Load potássio filtrado (mmol / min)] x 100 </li></ol>

<ol><li>Silverthorn, D. U. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSilverthorn%2C+DU+%22Human+Physiology%3A+An+integrated+approach%22">Human Physiology: An integrated approach</a>. , Pearson. (2012).</li>
<li>Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHall%2C+JE+%22Guyton+and+Hall+Textbook+of+Medical+Physiology%22">Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology</a>. , 303-344 (2011).</li>
<li>Levey, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+renal+function+in+chronic+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Measurement of renal function in chronic renal disease.</a> Kidney International. 38 (1), 167-184 (1990).</li>
<li>Thurau, K., Valtin, H., Schnermann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Kidney.</a> Annual Review of Physiology. 30, 441-524 (1968).</li>
<li>Shannon, J. A., Smith, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+excretion+of+inulin%2C+xylose%2C+and+urea+by+normal+and+phoriziniaed+man%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The excretion of inulin, xylose, and urea by normal and phoriziniaed man.</a> Journal of Clinical Investigation. 14, 393-401 (1935).</li>
<li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling%2C+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).</li>
<li>Sterner, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+%27true%27+glomerular+filtration+rate+in+healthy+adults+using+infusion+of+inulin+and+comparing+it+with+values+obtained+using+other+clearance+techniques+or+predictive+equations%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Urology+and+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Determining 'true' glomerular filtration rate in healthy adults using infusion of inulin and comparing it with values obtained using other clearance techniques or predictive equations.</a> Scandinavian Journal of Urology and Nephrology. 42, 278-285 (2008).</li>
<li>Toto, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conventional+measurement+of+renal+function+utilizing+serum+creatinine%2C+creatinine+clearance%2C+inulin+and+para-aminohippuric+acid+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Nephrology+and+Hypertension%22%5BJournal%5D)">Conventional measurement of renal function utilizing serum creatinine, creatinine clearance, inulin and para-aminohippuric acid clearance.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 4 (6), 505-509 (1995).</li>
<li>Matavelli, L. C., Kadowitz, P. J., Navar, L. G., Majid, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+hemodynamic+and+excretory+responses+to+intra-arterial+infusion+of+peroxynitrite+in+anesthetized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Renal hemodynamic and excretory responses to intra-arterial infusion of peroxynitrite in anesthetized rats.</a> Americam Journal of Physiology. 296, F170-F176 (2009).</li>
<li>Davidson, W. D., Sackner, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplification+of+the+anthrone+method+for+the+determination+of+inulin+in+clearance+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Laboratory%2C+%26+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Simplification of the anthrone method for the determination of inulin in clearance studies.</a> Journal of Laboratory, & Clinical Medicine. 62, 351-356 (1963).</li>
<li>Symes, A. L., Gault, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+of+inulin+in+tissues+using+anthrone%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Assay of inulin in tissues using anthrone.</a> Clinical Biochemistry. 8 (1), 67-70 (1975).</li>
<li>Shalmi, M., Lunau, H. E., Petersen, J. S., Bak, M., Christensen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suitability+of+tritiated+inulin+for+determination+of+glomerular+filtration+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Suitability of tritiated inulin for determination of glomerular filtration rate.</a> Americam Journal of Physiology. 260 (2 Pt 2), F283-F289 (1991).</li>
<li>Denton, K. M., Anderson, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+untrafiltration+in+rabbits+with+superficial+glomeruli%5BTitle%5D)+AND+%22EUropean+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glomerular untrafiltration in rabbits with superficial glomeruli.</a> EUropean Journal of Physiology. 419 (3-4), 235-242 (1991).</li>
<li>Jobin, J., Bonjour, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+unrestrained+rats+with+inulin+infused+by+implanted+osmotic+pumps%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of glomerular filtration rate in conscious unrestrained rats with inulin infused by implanted osmotic pumps.</a> Americam Journal of Physiology. 248 (5 Pt 2), F734-F738 (1985).</li>
<li>Lorenz, J. N., Gruenstein, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+nonradioactive+method+for+evaluating+single-nephron+filtration+rate+using+FITC-inulin%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A simple, nonradioactive method for evaluating single-nephron filtration rate using FITC-inulin.</a> Americam Journal of Physiology. 276 (1 Pt 2), F172-F177 (1999).</li>
<li>Qi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+determination+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice+using+FITC-inulin+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance.</a> Americam Journal of Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).</li>
<li>Bivona, B. J., Park, S., Harrison-Bernard, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+filtration+rate+determinations+in+conscious+type+II+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Americam+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Glomerular filtration rate determinations in conscious type II diabetic mice.</a> Americam Journal of Physiology. 300 (3), F618-F625 (2011).</li>
<li>Rosen, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anaesthesia+and+surgery+on+renal+hemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Effects of anaesthesia and surgery on renal hemodynamics.</a> British Journal of Anesthesiology. 44, 252-258 (1972).</li>
<li>Cousins, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+and+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Anaesthesia+and+intensive+care%22%5BJournal%5D)">Anesthesia and the kidney.</a> Anaesthesia and intensive care. 11 (4), 292-320 (1983).</li>
<li>Walter, S. J., Zewde, T., Shirley, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+anaesthesia+and+standard+clearance+procedures+on+renal+function+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Journal+of+Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">The effect of anaesthesia and standard clearance procedures on renal function in the rat.</a> Quarterly Journal of Experimental Physiology. 74, 805-812 (1989).</li>
<li>Rieg, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+method+for+measurement+of+glomerular+filtration+rate+in+conscious+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A high-throughput method for measurement of glomerular filtration rate in conscious mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), (2013).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes. As opiniões ou afirmações contidas neste documento são os pontos de vista particulares do autor e não devem ser interpretadas como funcionário ou como refletindo os pontos de vista do Departamento do Exército ou do Departamento de Defesa.

Um marcador apropriado para a medição de GFR deve atender quatro critérios: ser livremente filtrada no glomérulo, ser independente para proteínas do plasma, e nem ser absorvido nem secretada no néfron. A inulina é um polímero de frutose, que satisfaz estes critérios. Como resultado, a depuração renal da inulina é considerada o padrão ouro para medir GFR 7. A técnica demonstrada representa a abordagem tradicional da determinação da eliminação renal de inulina utilizando recolhas de urina cronometrados durante ...

A função mais importante do rim é a regulação homeostática da água extracelular e do conteúdo eletrolítico. Os rins regulam de perto a água extracelular, o sódio (Na) e o potássio (K) para manter os níveis fisiológicos normais. Distúrbios na função renal podem resultar em distúrbios metabólicos graves que podem ser fatais. O processo renal básico ocorre no néfron e começa com a filtração do plasma no glomérulo e termina com a excreção de urina. Outros processos que determinam a concentração final de água, Na e K na urina são secreção e reabsorção dentro do néfron. As medições da taxa de filtração glomerular (TFG) e da excreção fracionada de Na e K são críticas na avaliação da função renal na saúde e na doença. O leitor é encaminhado para artigos de revisão e livros didáticos publicados anteriormente para uma discussão mais completa da função renal1-4. 
TFG pode ser medida como a depuração renal em estado estacionário da inulina que é filtrada no glomérulo, mas não secretada ou reabsorvida ao longo do néfron5. Embora essa técnica exija anestesia, preparação cirúrgica e um experimento terminal, ela é considerada o padrão-ouro da medição da TFG. Usando inulina marcada com isotiocianato de fluoresceína (FITC), a concentração plasmática e urinária de FITC-inulina pode ser facilmente medida em pequenos volumes e usada para calcular a TFG durante vários pontos de tempo de um experimento. A excreção fracionada de Na e K pode ser determinada a partir da concentração de Na e K no plasma e na urina. 
A compreensão conceitual de como medir a função renal pode ser facilmente demonstrada em um pequeno laboratório projetado para permitir que os alunos participem ativamente de alguns aspectos do experimento. Este vídeo mostra a preparação pré-laboratorial, a demonstração da função renal e a avaliação pós-laboratorial dos resultados. As técnicas cirúrgicas necessárias para a realização de medidas da TFG são demonstradas em um rato anestesiado. Além disso, exemplos de cálculos para TFG e excreção fracionada de Na e K são mostrados antes e depois da administração de um medicamento diurético.

<table><tbody><tr><td>Sutura Cirúrgica de Seda Trançada 5-0</td><td>Surgical Specialties Corp</td><td>SP1033</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Ensaio, 96-Well</td><td>Costar&nbsp;</td><td>3922</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de Soro Bovino</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>A2934-25G</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Beckman Coulter</td><td>MicroFuge 18, 357160</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de Amostra Cônicos</td><td>Dot Scientific Inc.&nbsp;</td><td>#711-FTG</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores com Ponta de Algodão</td> Software de Aquisição de Dados <td>Solon Manufacturing Co</td><td>56200</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ADInstruments</td><td>LabChart Pro 7.0</td><td></td></tr><tr><td>Balança Digital&nbsp;</td><td>Denver Instrument</td><td>APX-4001</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Inulina</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>F3272-1G</td><td></td></tr><tr><td>Esponjas de Gaze</td><td>Covidien</td><td>2146</td><td></td></tr><tr><td>Cama Cirúrgica Aquecida</td><td>EZ-Anestesia</td><td>EZ-212</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sagnet</td><td>NDC 25021-402-10</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Chemical Co</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Abbott Animal Health</td><td>IsoFlo, 5260-04-05</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador de Isoflurano</td><td>EZ-Anestesia</td><td>EZ-190F</td><td></td></tr><tr><td>Micro Dissecação Fórceps</td><td>Biomedical Research Instruments Inc.</td><td>Leitor de Microplacas 70-1020</td><td></td></tr><tr><td>- Fluoroskan</td><td>ThermoScientific</td><td>Ascent FL, 5210460</td><td></td></tr><tr><td>NOVA 5+ Analisador de Sódio/Potássio</td><td>NOVA BioMedical</td><td>14156</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas Olsen-Hegar com Tesoura</td><td>Ferramentas de Ciência Fina</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>PE-190 (para cateter de bexiga)</td><td>BD Medical</td><td>427435</td><td></td></tr><tr><td>Transdutor de Pressão& nbsp;</td><td>ADInstruments</td><td>MLT1199</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex Culture Tubes</td><td>Corning Inc.</td><td>99445-12</td><td></td></tr><tr><td>Cateter de Artéria Cônica Femoral de Rato</td><td>Aplicações Estratégicas Inc.</td><td>RFA-01</td><td></td></tr><tr><td>Salix Furosemida 5%</td> <td>Intervet</td> <td># 34-478</td><td></td></tr><tr><td>Estrabismo Tesoura</td><td>Fine Science Tools</td><td>14075-11</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Cirúrgica para Estudantes</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>91402-12</td><td></td></tr><tr><td>Luvas Cirúrgicas</td><td>Kimberly-Clark</td><td>Sterling Nitrile Gloves</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de seringa</td><td>Razel Scientific</td><td>R99-E</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps de Tecido</td><td>Fine Science Tools</td><td>91121-12</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Tecido</td><td>George Tiemann&nbsp; Co</td><td>105-420</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">5-0 Sutura Cirúrgica de Seda Trançada Surgical Specialties Corp SP1033 Placa de Ensaio, 96-Well Costar&nbsp; 3922 Albumina de Soro Bovino Sigma Chemical Co A2934-25G Centrífuga Beckman Coulter MicroFuge 18, 357160 Tubos de Amostra Cônicos Dot Scientific Inc.&nbsp; #711-FTG Aplicadores com Ponta de Algodão Software de Aquisição de Dados Solon Manufacturing Co 56200 ADInstruments LabChart Pro 7.0 Digital Balança&nbsp; Denver Instrument APX-4001 FITC-Inulina Sigma Chemical Co F3272-1G Esponjas de Gaze Covidien 2146 Cama Cirúrgica Aquecida EZ-Anesthesia EZ-212 Heparina Sagnet NDC 25021-402-10 HEPES Sigma Chemical Co H3375 Isoflurano Abbott Animal Health IsoFlo, 5260-04-05 Vaporizador de Isoflurano EZ-Anesthesia EZ-190F Micro Dissecting Forceps Biomedical Research Instruments Inc. 70-1020 Leitor de Microplacas - Fluoroskan ThermoScientific Ascent FL, 5210460 NOVA 5+ Analisador de Sódio/Potássio NOVA BioMedical 14156 Olsen-Hegar Porta-agulhas com Tesoura Ferramentas de Ciência Fina 12002-12 PE-190 (para cateter de bexiga) BD Medical 427435 Transdutor de Pressão&nbsp; ADInstruments MLT1199 Pyrex Culture Tubes Corning Inc. 99445-12 Cateter de Artéria Cônica Femoral de Rato Strategic Applications Inc. RFA-01 Salix Furosemida 5% Intervet #34-478 Tesoura de Estrabismo Fine Science Tools 14075-11 Tesoura Cirúrgica para Estudantes Fine Science Tools 91402-12 Luvas Cirúrgicas Kimberly-Clark Sterling Luvas de Nitrilo Bomba de seringa Pinça de Tecido Razel Scientific R99-E Fine Science Tools 91121-12 Tesoura de Tecido George Tiemann&nbsp; Co 105-420</td></tr></tbody></table>

laboratório de fisiologia demonstração: taxa de filtração glomerular em um rat

Physiology Lab Demonstration: Glomerular Filtration Rate in a Rat

As medidas da taxa de filtração glomerular (TFG) e da excreção fracionada de sódio (Na) e potássio (K) são críticas na avaliação da função renal na saúde e na doença. A TFG é medida como a depuração renal da inulina no estado estacionário, que é filtrada no glomérulo, mas não secretada ou reabsorvida ao longo do néfron. A excreção fracionada de Na e K pode ser determinada a partir da concentração de Na e K no plasma e na urina. A depuração renal da inulina pode ser demonstrada em um animal anestesiado que possui cateteres na artéria femoral, veia femoral e bexiga. Os equipamentos e suprimentos usados para este procedimento são aqueles comumente disponíveis em uma instalação central de pesquisa e, portanto, tornam este procedimento um meio prático para medir a função renal. O objetivo deste vídeo é demonstrar os procedimentos necessários para realizar uma demonstração laboratorial na qual a função renal é avaliada antes e depois de um medicamento diurético. A técnica apresentada pode ser utilizada para avaliar a função renal em modelos de doença renal em ratos.

O diurético usado no laboratório demonstração foi furosemida que muito rapidamente inibe a reabsorção de Na e K filtrada pelo rim, resultando em aumento de Na, K, e a excreção de água dentro de minutos após a administração da droga. Por seu mecanismo primário, furosemida deve ter efeitos mínimos sobre a TFG e da carga filtrada de Na e K, mas vai aumentar o fluxo de urina, e fração de excreção de Na e K. Os resultados representativos da Tabela 3 mostram que, num rato anestesi...

O objetivo deste protocolo é demonstrar os princípios e técnicas para medir e calcular a taxa de filtração glomerular, a taxa de fluxo de urina e a excreção de sódio e potássio em um rato. Esta demonstração pode ser usada para fornecer aos alunos uma compreensão conceitual geral de como medir a função renal.

Laboratório de Fisiologia Demonstração: Taxa de filtração glomerular em um Rat

Measurements of glomerular filtration rate (GFR), and the fractional excretion of sodium (Na) and potassium (K) are critical in assessing renal function ...

physiology-lab-demonstration-glomerular-filtration-rate-in-a-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Uma técnica de alta resolução utilizando microscopia intavital 2-fotão para visualizar e quantificar directamente filtração gloemrular nos glomérulos superfície. Este método permite a determinação direta de características de permeabilidade de macromoléculas em estados normais e doentes.

Quantificar glomerular Permeabilidade de Macromoléculas fluorescentes Usando Microscopia 2-Photon em Munique Ratos Wistar

Medição da taxa de filtração glomerular (TFG) é o padrão ouro para avaliação da função renal. Aqui, nós descrevemos um método de alto rendimento que permite a determinação da taxa de filtração glomerular em ratinhos conscientes utilizando uma única injecção de bolus, a determinação de isotiocianato de fluoresceína (FITC)-inulina no plasma e no cálculo da TFG por um modelo de decaimento exponencial de duas fases.

Um Método de alta capacidade para medição de Taxa de filtração glomerular em ratos conscientes

Alterações nos níveis de cálcio intracelular nos podócitos são um dos meios mais importantes para controlar a função de filtração dos glomérulos. Aqui, explicamos uma abordagem de alto rendimento que permite a detecção do manuseio de cálcio em tempo real e da atividade de canais iônicos únicos nos podócitos dos glomérulos recém-isolados.

Single-channel Análise e cálcio Criação de imagem do Podócitos do recentemente isolados glomérulos

A determinação da taxa de filtração glomerular (TFG) é o padrão-ouro para avaliar a função renal geral. No entanto, os procedimentos tradicionais para medir esse parâmetro são complicados e exigem um grande investimento de tempo. Aqui descrevemos um método mais rápido e minimamente invasivo para determinar a TFG por via transcutânea.

Avaliação transcutânea da função renal em roedores conscientes

Este protocolo descreve um rim completo check-up que deve ser realizado em modelos do rato da doença glomerular. Os métodos permitem análise detalhada funcional, estrutural e mecanicista da função glomerular, que pode ser aplicada a todos os modelos do rato da doença glomerular.

Avaliação da função renal em modelos do rato da doença Glomerular

O foco principal do presente protocolo é eficientemente isolar culturas viáveis glomérulos primário com contaminantes mínimas para uso em uma variedade de aplicações a jusante. Os glomérulos isolados mantém relações estruturais entre tipos de células do componente e podem ser cultivadas ex vivo por um curto período de tempo.

Um método eficiente de crivagem para isolar intactos glomérulos do rim de rato adulto

Aqui descrevemos um protocolo para medir a taxa de filtração glomerular (TFG) em consciente, movimentando-se livremente ratos usando um monitor de TFG transdérmica.

Transdermal medição da taxa de filtração Glomerular em ratos

Aqui, nós apresentamos um protocolo para testar a permeabilidade glomerular nos ratos usando um Tracer altamente sensível, nonradioativo. Este método permite análises repetitivas da urina com volumes pequenos da urina.

Medição altamente sensível da permeabilidade glomerular em camundongos com isotiocianato de fluoresceina-polisacarose 70

Aqui, apresentamos um protocolo utilizando microscopia de 2 fótons em ratos Wistar Fromter de Munique com glomérulos superficiais para quantificar os efeitos da obstrução ureteral prolongada na dinâmica e função glomerular.

Usando a microscopia de 2-fótons para quantificar os efeitos da obstrução ureteral unilateral crônica nos processos glomerulares

O presente protocolo descreve uma medida contínua a longo prazo do fluxo sanguíneo renal em ratos conscientes e o registro simultâneo da pressão arterial com cateteres implantados (cheios de líquido ou por telemetria).

Medição Contínua a Longo Prazo do Fluxo Sanguíneo Renal em Ratos Conscientes

A taxa de filtração glomerular (TFG) é o marcador ideal para avaliar a função renal. No entanto, o método de medição padrão usando injeção de inulina com análise seriada de sangue e urina é impraticável. Este artigo delineia um método prático para medir a TFG por via transdérmica em leitões.

Medição Transdérmica da Taxa de Filtração Glomerular em Leitões Ventilados Mecanicamente

Aprenda a medir a taxa de filtração glomerular, fluxo urinário e excreção de sódio e potássio em ratos. Este protocolo demonstra técnicas essenciais para o ensino da fisiologia renal.

Laboratório de Fisiologia Demonstração: Taxa de filtração glomerular em um Rat

Explorar mais vídeos