Métodos para comparar Nutrientes na beebread Feito por africanizadas e mel europeu abelhas e os efeitos sobre Títulos Hemolinfa Proteína

O objetivo geral do experimento a seguir é quantificar os nutrientes do pólen e do pão de abelha, feitos por duas subespécies de abelhas e medir o consumo de títulos de proteína. Isso é conseguido apresentando às abelhas europeias e africanas a mesma fonte de pólen em uma área confinada e permitindo que as abelhas armazenem o pólen em suas colônias como pão de abelha. Em seguida, o pão de abelha é dado às abelhas europeias e africanas recém-emergidas em gaiolas.

Em seguida, as abelhas nas gaiolas são amostradas após quatro, sete e 11 dias de alimentação, e a quantidade de pão de abelha restante em cada gaiola é medida para estimar o consumo. Finalmente, a concentração de nutrientes, incluindo proteínas e aminoácidos no pólen e no pão de abelha feito por abelhas europeias e africanizadas, é medida e comparada entre as raças de abelhas. Os resultados mostram que o pão de abelha difere do pólen nas concentrações de proteínas e alguns aminoácidos, bem como nos títulos de proteínas da hemolinfa.

Este método pode ajudar a responder a questões-chave em estudos de nutrição de abelhas, como o papel da fonte de pólen nos nutrientes do pão de abelha e como esses nutrientes são adquiridos por abelhas de diferentes subespécies e genótipos. Demonstrando as técnicas está Emily Watkins de Young, que é uma estudante técnica em meu laboratório Para começar depois de colocar armadilhas de pólen em colônias de abelhas, colete o pólen, use um moedor de café para moer o pólen em um pó fino, estabeleça cinco colônias, cada uma de abelhas africanas ou um HB e abelhas europeias, ou EHB em uma área de voo fechada ou EFA, de modo que as abelhas se alimentam apenas do pólen fornecido para evitar que as operárias se desloquem entre as colônias EHB e A HB. Divida o EFA em seções separadas para que as abelhas não possam cruzar entre elas em cada seção do EFA coloque colônias individuais de EHB ou HB com 3.500 a 4.000 abelhas operárias favo de cera com mel de néctar, ninhada imatura e favo vazio alimentam o pólen moído para as colônias, colocando uma bandeja em cada seção do EFA e espalhando aproximadamente 60 gramas de pólen nas bandejas.

Dessa forma, as abelhas forjadoras podem coletar o pólen como cargas curriculares e armazená-lo em suas colônias como pão de abelha para alimentar as abelhas em gaiolas. Coloque as estruturas da ninhada operária selada de uma colônia HB e EHB em gaiolas de emergência separadas em uma sala ambiental ajustada a 32 a 24 graus Celsius e 40% de umidade relativa. Quando as operárias emergem em nossas aproximadamente 24 horas de idade, ele estabelece 12 gaiolas de bioensaio de plexiglass e adiciona 100 abelhas operárias EHB ou HB recém-emergidas a cada gaiola, coloca uma seção de favo com um número conhecido de bbr europeu ou EBB ou pão B africanizado ou células AB, B em cada gaiola para gerar as seguintes condições de tratamento.

Um HB alimentado com A-B-B-E-H-B alimentado com A B, BAHB Fed EBB e EHB Fed. EBB adicione frascos de água e uma solução de sacarose a 30% formulada por volume para cada gaiola. Substitua o xarope de açúcar e os frascos de água diariamente durante o período de estudo de 11 dias.

Amostra 10, operárias EHB recém-emergidas e A HB antes de colocá-las nas gaiolas. Refira-se a eles como Bs do dia zero e faça com que sirvam como uma linha de base para as concentrações de proteínas da hemolinfa. Remova 10 abelhas de cada gaiola depois de terem se alimentado de EBB ou um B, B por quatro, sete e 11 dias.

Coloque as abelhas vivas em tubos de falcão individuais e coloque-as em bolsas de gelo. Selecione a subamostra de quatro abelhas para análise da concentração de proteína da hemolinfa após a amostragem das abelhas no dia 11, conte o número de células do favo que ainda contêm pão de abelha. Remova o pão de abelha restante das células em cada gaiola e armazene em tubos de microcentrífuga separados por gaiola.

Mantenha as amostras de BBR a 80 graus Celsius negativos até que sejam analisadas quanto ao pH, concentração de proteína solúvel e teor de aminoácidos. Para realizar a análise de proteínas, pegue seis amostras do pólen e uma amostra de EBB e A BB de cada gaiola. Misture 20 miligramas de pólen ou bbr com um mililitro de 0,1 molar PBS vórtice para misturar por 10 segundos e centrifugue a 571,2 G por um minuto.

Remova uma amostra de 25 microlitros do sobrenadante S e coloque-a em um poço de fundo plano de 96 poços, placa de poliestireno EIARIA. Replique cada amostra em três poços. Aqueça a extremidade de um tubo capilar de 20 microlitros e puxe a seção aquecida até formar uma ponta em forma de agulha.

Em seguida, extraia a hemolinfa das abelhas coletadas de cada gaiola, inserindo o tubo capilar na porção lateral direita do tórax, próximo ao ponto de fixação da asa. Colete linfa adicional, se necessário, inserindo o mesmo tubo na membrana entre as guias de tur do abdômen. Adicione um microlitro de hemolinfa a nove microlitros de PBS 0,1 molar.

Use um kit de ensaio de proteína Bradford e siga as instruções do fabricante para determinar a proteína solúvel total. As concentrações realizam análises de aminoácidos de acordo com o protocolo de texto conforme mostrado nesses gráficos, tanto o valor do pH quanto a concentração de proteína foram menores no bbr do que no pólen. Tanto o EHB quanto o A HB consumiram mais BB do que o EBB, conforme demonstrado aqui.

Os níveis de proteína solúvel na hemolinfa de A HB foram significativamente maiores do que os de EHB, independentemente do tipo de bbr consumidos. Essas diferenças nos níveis de proteína da hemolinfa ocorreram mesmo que EHB e A HB consumissem quantidades semelhantes de cada tipo de bbr. Dos 10 aminoácidos essenciais para as abelhas, todos, exceto a histamina, foram detectados no pólen.

Na maioria dos casos, as concentrações de aminoácidos medidas no pão de abelha foram maiores do que no pólen. Por exemplo, as concentrações de leucina e tionina foram cerca de 60% maiores em bbr em comparação com as concentrações de pólen e valina foram cerca de 25% maiores. Os níveis de glutamina do ácido alanina aspártico também foram maiores no bbr do que no pólen.

As concentrações de aminoácidos não diferiram muito entre A, B, B e EBB, com exceção da fenilalanina e cistina. Os níveis de fenilalanina foram cerca de duas vezes mais altos em A BB em comparação com EBB ou pólen. As concentrações de cistina foram menores no EBB em comparação com A, B, B ou pólen.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como avaliar as concentrações de proteína no pão de abelha, pólen e hemolinfa de abelha. Com essas técnicas, você pode determinar se o armazenamento e o consumo de alimentos e as concentrações de proteínas da hemolinfa são afetados por fatores genéticos ou ambientais.