Name: Medições de alta precisão de zinco isotópicas Aplicadas à mouse Órgãos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Aprenda a medir razões isotópicas de zinco em órgãos de mouse com alta precisão usando cromatografia de troca iônica e espectrometria de massa. Este método auxilia no diagnóstico de doenças relacionadas ao desequilíbrio de zinco.

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FM reconhece financiamento da ANR através de um chaire d&#39;Excellence IDEX Sorbonne Paris Cité, o INSU através de uma subvenção PNP, o Institut Universitaire de France, bem como o programa Labex UniverEarth na Sorbonne Paris Cité (ANR-10-LabX-0023 e ANR -11-IDEX-0005-02). Agradecemos também o financiamento do Conselho Europeu de Investigação no âmbito da Comunidade Europeia H2020 programa-quadro / ERC convenção de subvenção # 637503 (Pristine).

NOTA: Os procedimentos que envolvem animais foram aprovados pelo cuidado e uso Comitê Institucional Animal (IACUC) na Université Paris Diderot. 1. Preparação de Materiais <ol><li> Sub-ferver 1 L de destilar os ácidos (HNO 3, HBr) a fim de purificá-los a partir de impureza. </li><li> Limpe os copos e adaptador de ponta em um quente (~ 100 ° C) HNO 3 banho de ácido concentrado durante pelo menos dois dias. </li><li> Lave as pontas de pipeta em um resfriado 3 N HNO 3 banho por vários dias e enxaguar individualmente três vezes com água deionizada. </li></ol> Preparação 2. Amostra <ol><li> Anestesiar os ratos por injecção intraperitoneal de cetamina e xilazina. Avaliar anestesia pelo método toe pitada. </li><li> Recolhe-se o sangue por punção cardíaca, uma na presença de heparina em tubos de 1,5 ml. </li><li> Separa-se o plasma a partir de células de sangue por centrifugação (10 min, 1500 xg) e transferir o plasma para o polipropileno cfrascos ryogenic usando dicas de polipropileno. </li><li> Remover o sangue restante a partir de órgãos de corte da veia hepática e injectando DPBS através do coração. Avaliar a morte do mouse por deslocamento cervical. </li><li> Colher os órgãos com instrumentos de aço inoxidável estéreis, libertá-los de gordura em torno se houver, e snap-congelá-los em frascos de polipropileno criogênicas. </li></ol> 3. Chemical Purificação <ol><li> Em primeiro lugar, dissolve-se as amostras com uma mistura de ~ 1 ml de concentrado (30%) de H 2 O 2 e ~ 1 ml de concentrado (~ 15 M) HNO3. Será que todos estes passos dentro de um exaustor. <ol><li> Coloque todo o órgão de interesse em uma proveta de 15 ml Teflon. Em seguida, adicione o H 2 O 2 / HNO 3 a 5 o copo. Manter o vaso aberto durante alguns minutos, a fim de evitar salpicos, devido à reacção de oxidação da matéria orgânica e a libertação de CO 2. </li><li> Finalmente, colocar o copo sobre uma placa quente a about 100 ° C durante um par de horas ou até que a solução é perfeitamente claro. </li></ol></li><li> Abrir o recipiente e secar a solução sobre uma placa quente a cerca de 100 ° C. </li><li> Uma vez que a amostra é seca, adicionar 1 ml de HBr 1,5 N para as amostras; fechar a proveta e deixou-se dissolver numa placa quente a 100 ° C durante um par de horas. </li><li> Enquanto isso prepare os 500 colunas ul. <ol><li> Adicionar 500 mL de resina malha AG1X8 200-400 para a coluna e colocá-lo na prateleira coluna com uma taça de lixo abaixo dela. Lavou-se a resina alternando: 5 ml de 18,2 mohms ⋅ cm de água, 5 ml de 0,5 N HNO 3, 5 ml de água, 5 ml de 0,5 N HNO 3, e, em seguida, 5 ml de água. Condiciona-se a resina com 5 ml de HBr 1,5 N. </li></ol></li><li> Retirar os copos da chapa quente e colocá-los em um banho de ultra-som para cerca de 30 min, e em seguida, deixar as taças esfriar a temperatura ambiente. </li><li> Uma vez que o recipiente é arrefecido e a resina é lavada, abrir o recipiente. Coloque o adaptador de ponta para tele seringa, adicione uma ponta de pipeta; Pipete a 1 ml de amostra e carregá-lo sobre a resina (muito lentamente a fim de não agitar a resina). </li><li> Uma vez todo o líquido passa através da coluna, adicionam-se 5 ml de HBr 1,5 N. </li><li> Uma vez que os 5 ml de HBr 1,5 N passar através da coluna, substituir o recipiente de lixo, com uma proveta de 15 ml limpo. </li><li> Adicionar 5 ml de 0,5 N HNO 3 2,5 ml de cada vez. Nesta fase, o Zn é eluído a partir da resina. </li><li> Uma vez 5 ml de HNO 3 passa através da coluna, retirar o copo e colocá-lo sobre uma placa quente a 100 ° C até seca. </li><li> Retirar a coluna do suporte da coluna; lixo a resina (usar uma nova resina para cada amostra). </li><li> Uma vez que a amostra é seca, repetir o protocolo com o mesmo volume de ácidos sobre uma coluna mais pequena (100 ul) e, em seguida, colocá-la numa placa quente até seca. A amostra está agora pronto para espectrometria de massa. </li></ol> 4. espectroscopia de massa de Medição <ol><li> Analisar o compo isotópica Znsição num espectrómetro de massa de plasma indutivamente acoplado-colector multi (MC-ICP-MS). <ol><li> Com os parâmetros de máquina resumidos na Tabela 1. </li></ol></li><li> Posicione os copos de Faraday para coletar a massa (m / z) de 62 Ni, 63 Cu, Zn 64, 65 Cu, Zn 66, 67 Zn e 68 Zn. </li><li> Preparar uma solução contendo 500 ppb Zn em 0,1 M HNO3 para análise isotópica. </li><li> Analisar a solução de 500 ppb de Zn usando uma câmara de pulverização combinada com 100 ul / min nebulizador de teflon. Para cada amostra, medir 30 scans (1 bloco de 30 ciclos), em que o tempo de integração de cada digitalização é 8,389 sec. </li><li> Corrija o fundo subtraindo o zero intensidades sobre-pico a partir de uma solução em branco (o M HNO3 0,1 solução usada para re-dissolver as amostras). </li><li> Controlo e à possível interferência isobárica 64 Ni correto medindo a intensidade do pico de 62 Ni.Suponha que a taxa de 62 64 Ni / Ni é ​​natural (0,2548), este valor correto a partir do viés de massa instrumental, e depois remover o Ni 64 na massa 64 como: 64 Zn reais = 64 Zn medido - 64 = 64 Ni Zn medido - (64 Ni / 62 Ni) naturais x 62 Ni medido. </li><li> Corrigir a polarização massa instrumental por escalonamento cada uma das amostras com uma solução de 500 ppb padrão da norma JMC Lyon Zn (ou outro padrão disponíveis, tais como IMMR-3702). Realizar o escalonamento padrão dividindo a relação de 66 Zn / 64 Zn de amostra pelo valor médio da relação de 66 Zn / 64 Zn de os dois padrões medidos antes e depois da amostra de menos de 1 e multiplicado por 1.000 (ver equação 1). Precisão externo típico no padrão JMC Lyon Zn é de 0,05 permil / amu (2 desvio padrão, 2 sd). </li></ol>

<ol><li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li>
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<li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li>
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<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+Cu%2C+Fe%2C+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep%2C+with+emphasis+on+cellular+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li>
<li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li>
<li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS%3A+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Geol%22%5BJournal%5D)">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li>
<li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Atom.+Spec%22%5BJournal%5D)">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A reprodutibilidade das medidas é avaliada através de análises replicadas das mesmas amostras realizadas durante as diferentes sessões de análise. Por exemplo 6, que foram replicados da mesma rocha terrestre 7 vezes e obtivemos os resultados reportados na Tabela 2. Como esperado a partir da teoria de fracionamento isotópico 10 e tal como medido em qualquer material sistema solar até agora (por exemplo, meteorito 11-13, plantas 3...

A medição de alta precisão (melhor do que 100 ppm / unidade de massa atômica) de zinco composição dos isótopos estáveis ​​só foi possível por cerca de 15 anos, graças ao desenvolvimento de multi-coletor de código-fonte plasma massa-espectrómetros e desde então tem sido aplicado principalmente em Terra e ciências planetárias. Os aplicativos para a área médica são novos e têm um forte potencial como biomarcadores para doenças que modificam o metabolismo de zinco (por exemplo, a doença de Alzheimer). Este artigo relata um método para medir com alta precisão as proporções de isótopos estáveis ​​naturais de zinco em vários órgãos do mouse. O mesmo seria aplicável a amostras humanas. O método consiste na dissolução dos órgãos, a purificação química de zinco a partir do resto dos átomos, e, em seguida, a análise da proporção isótopo num espectrómetro de massa. A qualidade de Zn medições isotópicas está dependente da qualidade da purificação química (pureza de Zn, baixo amostra em brancoared para a quantidade de Zn presente na amostra, maior rendimento de produtos químicos do processo) e no controlo da polarização instrumental. O elevado grau de pureza da fracção de Zn final é necessária para remover ambas as interferências isobáricas e não-interferência isobárica que criam um efeito de matriz. Nuclides isobáricas criar interferências diretas (por exemplo, 64 Ni). Interferências não-isobáricas gerar o chamado efeito de &quot;matriz&quot; e alterar a precisão analítica das medições, alterando o estado de ionização por comparação com o padrão de zinco puro a que as amostras são comparados com um. Um baixo em branco (&lt;10 ng) indica que não existe contaminação das amostras por Zn externo que distorceria a composição isotópica medido. Como isótopos de Zn pode ser fraccionado durante a cromatografia de permuta iónica 2, o conjunto de todos os átomos de Zn assegura que não ocorre fraccionamento isotópica, o que implica que o processo químico deve ter um rendimento total. Finalmente, a correção do fracionamento isotópico instrumental durante a medição espectrometria de massa é feita através do método de &quot;bracketing padrão&quot;. Portanto, as principais dificuldades para a obtenção de medições precisas está controlando a contaminação externa (ou seja, baixo em branco), produzindo uma purificação química rendimento total que é limpo de quaisquer outros átomos ou moléculas, e corrigir o fracionamento isotópico instrumental na massa espectrômetro. Neste artigo vamos descrever o nosso protocolo analítico para separar Zn dos órgãos do rato, bem como as medidas de espectrometria de massa. A extração é feita usando uma baixa quantidade de ácidos diluídos (HBr / HNO3 media) em micro-colunas (0,5 ul e 0,1 ul) de resina de troca aniônica. Tem um rendimento total e as medições tem uma reprodutibilidade externa melhor do que 50 ppm em relação a 66 Zn / 64 Zn. Outra vantagem da metanfetaminaOD é que ele é muito rápido. O método é, portanto, muito bem adaptado para ciências médicas, em que é necessário analisar um grande número de amostras em comparação com geosciences, onde estes foram desenvolvidos métodos analíticos.

<table><tbody><tr><td>Espectrômetro de massa de plasma indutivamente acoplado de coleção múltipla</td><td>Thermo-Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Resina de troca aniônica AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>Copos de Teflon</td><td>Savillex&nbsp;</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>Colunms de teflon feitos internamente feitos com teflon</td><td></td><td></td><td></td> retrátil</tr></tbody></table>

medições de alta precisão de zinco isotópicas aplicadas à mouse Órgãos

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

Nós apresentamos um procedimento para medir com alta precisão as taxas de isótopos de zinco em órgãos do mouse. O zinco é composto por 5 isótopos estáveis ​​(64 Zn, 66 Zn, 67 Zn 68, Zn e Zn 70), que são naturalmente fraccionados entre órgãos do mouse. Nós primeiro mostrar como dissolver os diferentes órgãos, a fim de libertar os átomos de Zn; este passo é realizado por uma mistura de HNO 3 e H 2 O 2. Em seguida, purificar os átomos de zinco a partir de todos os outros elementos, em particular de interferências isobáricas (por exemplo, NI), por cromatografia de troca aniônica em um diluído HBr / HNO meio 3. Estas duas primeiras etapas são realizadas em um laboratório limpo usando produtos químicos de alta pureza. Finalmente, as proporções de isótopos são medidos utilizando um multi-colector espectrómetro de massa acoplado indutivamente de plasma, em baixa resolução. As amostras são injectados usando uma câmara de pulverização e o fraccionamento isotópica induzida pelo espectrómetro de massa é o corrected, comparando o rácio das amostras para o rácio de um padrão (técnica de escalonamento padrão). Este procedimento típico completo produz uma razão isotópica com uma reprodutibilidade 50 ppm (2 sd).

Em 1,5 N HBr, as principais espécies de zinco (ZnBr3-) forma complexos muito fortes com a resina de troca aniônica, enquanto a maioria dos outros elementos não interagem com a resina. O zinco é, então, recuperado, alterando a forma diluída de HNO 3, mudando a especiação de Zn para o Zn2 + que é libertado a partir da resina de 6,7. As taxas de isótopos são tipicamente expressos em partes por mil desvios relativos a um padrão: <img a...

Apresentamos a técnica para medir com alta precisão as proporções de isótopos de zinco em órgãos de camundongos.

Medições de alta precisão de zinco isotópicas Aplicadas à mouse Órgãos

We present a procedure to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs. Zinc is composed of 5 stable isotopes (64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

O objetivo geral deste procedimento é medir as razões isotópicas de zinco em órgãos de camundongos com alta precisão. Isso é realizado primeiramente dissolvendo os diferentes órgãos em ácidos para liberar todos os átomos em solução, seguido pelo tratamento da solução para correção de aberrações; o material seco é então ressuspenso em brometo de hidrogênio e a cromatografia de troca iônica é utilizada para purificar o zinco de todos os outros elementos da amostra, empregando uma coluna de gravidade previamente condicionada. O zinco é eluído da resina utilizando ácido nítrico.O passo final é medir as razões dos isótopos de zinco utilizando um espectrômetro de massas com plasma acoplado indutivamente com múltipla coleta. Em última análise, a composição isotópica é utilizada para diagnosticar doenças que modificam o equilíbrio de zinco no organismo, mediante a medição da distribuição de equilíbrio dos isótopos de zinco em diferentes órgãos. Assim, este método foi desenvolvido para fornecer informações sobre a distribuição natural e os mecanismos de transporte de zinco entre os órgãos de camundongos.Pode ser aplicado a qualquer animal e, em última instância, pode ser usado para diagnosticar doenças que modificam o equilíbrio de zinco entre órgãos, como a doença de Alzheimer. Inicie este procedimento com o preparo dos materiais e da amostra conforme detalhado no protocolo textual para realizar trabalhos de purificação química em uma capela de exaustão, preparando uma mistura de aproximadamente um mililitro de peróxido de hidrogênio a 30% e aproximadamente um mililitro de ácido nítrico concentrado. Coloque o órgão inteiro de interesse em um béquer de teflon de 15 mililitros.Em seguida, adicione a mistura ao béquer. Mantenha o béquer aberto por alguns minutos para evitar respingos devido à reação de oxidação da matéria orgânica e à liberação de dióxido de carbono. Por fim, coloque o béquer em uma placa aquecedora a cerca de 100 graus Celsius por algumas horas ou até que a solução fique perfeitamente transparente.Em seguida, abra o béquer e seque a solução em uma placa aquecedora a cerca de 100 graus Celsius. Uma vez que a amostra esteja seca, adicione um mililitro de brometo de hidrogênio à amostra. Feche o béquer e deixe dissolver em uma placa aquecedora a 100 graus Celsius por algumas horas.Enquanto isso, prepare as colunas de 500 microlitros. Adicione 500 microlitros da resina Ag one x 8 200 400 mesh à coluna e coloque-a no suporte de colunas com um béquer de resíduos abaixo. Lave a resina alternando cinco mililitros de água de 18,2 mega ohm centímetro e cinco mililitros de ácido nítrico 0,5 normal duas vezes, depois lave com cinco mililitros de água.Por fim, condicione a resina com cinco mililitros de brometo de hidrogênio. Em seguida, retire o béquer da placa aquecedora e coloque-o em um banho ultrassônico. Deixe o béquer esfriar até a temperatura ambiente por cerca de 30 minutos. Assim que o béquer estiver resfriado e a resina for lavada, abra o béquer.Coloque o adaptador de ponta na seringa e adicione uma ponta de pipeta. Em seguida, pipete um mililitro da amostra e carregue-a lentamente na resina para não agitar a resina. Depois que todo o líquido passar pela coluna, adicione cinco mililitros de brometo de hidrogênio.Deixe o brometo de hidrogênio passar pela coluna e, em seguida, substitua o béquer de resíduos por um béquer limpo de 15 mililitros. Em seguida, adicione cinco mililitros de ácido nítrico, 2,5 mililitros de cada vez. Nesta etapa, o zinco é removido da resina.Uma vez que o ácido nítrico tenha passado pela coluna, remova o béquer e coloque-o em uma placa aquecedora a 100 graus Celsius até secar completamente. Remova a coluna do suporte e descarte a resina. Após a amostra estar seca, repita o protocolo com o mesmo volume de ácidos em uma coluna menor de 100 microlitros e, em seguida, coloque-a em uma placa aquecedora até secagem total.A amostra está agora pronta para espectrometria de massas. Analise a composição isotópica de zinco em um espectrômetro de massas com plasma acoplado indutivamente e múltiplos coletores. Configure o equipamento utilizando os parâmetros resumidos no protocolo textual.Posicione as copas de Faraday para coletar na razão massa/carga do níquel 62, cobre 63, zinco 64, cobre 65, zinco 66, zinco 67 e zinco 68. Em seguida, analise uma solução de 500 partes por bilhão de zinco em ácido nítrico 0,1 molar utilizando uma câmara de pulverização combinada a um nebulizador de teflon de 100 microlitros por minuto. Para cada amostra, realize 30 varreduras nas quais o tempo de integração de cada varredura é de 8,389 segundos.Corrija o fundo subtraindo as intensidades zero no pico de uma solução em branco controle e corrija possível interferência isobárica de níquel 64. Ao medir a intensidade do pico de níquel 62, assuma que a proporção de níquel 64 para níquel 62 é natural. Corrija este valor referente ao viés instrumental de massa e, em seguida, remova o níquel 64 na massa 64 conforme descrito no protocolo do texto. Corrija o viés instrumental de massa realizando o enquadramento de cada uma das amostras com uma solução padrão de 500 partes por bilhão do padrão de zinco JMC Leon. Mostrado.Aqui estão resultados típicos obtidos com este método como um gráfico de três isótopos de Delta Zinco 68 versus Delta Zinco 66. Para diferentes órgãos, todos os órgãos se posicionam ao longo de uma reta com inclinação dois. Isso mostra que a fracionamento isotópico é dependente da massa e que os órgãos de camundongo são distintos isotopicamente.Curiosamente, os glóbulos vermelhos e os ossos apresentam enriquecimento em zinco delta 66 em comparação com o soro, o cérebro e o fígado. Essa fracionamento é bem explicado pela distribuição de equilíbrio dos isótopos entre diferentes ambientes de ligação do zinco em órgãos distintos. Após assistir ao vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como obter medições isotópicas de zinco de alta precisão em órgãos de camundongos.Não se esqueça de que a principal dificuldade é evitar a contaminação da sua amostra com zinco externo, e é essencial trabalhar em um laboratório limpo e utilizar reagentes químicos de alta pureza.

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Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

A metástase do câncer de ovário é caracterizada por numerosas lesões intraperitoneais difusas, de modo que a quantificação visual precisa da carga tumoral é um desafio.  Aqui, descrevemos um método para quantificação in situ e ex vivo da carga tumoral metastática usando células tumorais marcadas com proteína fluorescente vermelha (RFP) e imagens ópticas.

A quantificação da Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metástase

Aqui, descrevemos um protocolo para radiomarcação e teste in vivo de derivados tridentados de quelato de 99mTc(I) e tetrazina para pré-direcionamento e química bio-ortogonal.

Preparação e Avaliação de<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc-rotulados tridentadas Quelatos de Pré-alvo Usando Bioorthogonal Química

Este protocolo descreve o uso de um analisador de composição do corpo e sistema de monitoramento animal metabólico para caracterizar a composição corporal e parâmetros metabólicos em camundongos. Um modelo de obesidade induzido pelo alto teor de gordura alimentar é usado como um exemplo para a aplicação dessas técnicas.

Composição corporal e análise de enjaulamento metabólico em ratos de alta gordura Fed

Linhas celulares primárias ou estabelecidas cultivadas são comumente usadas para abordar questões biológicas e mecanísticas fundamentais como uma abordagem inicial antes de usar modelos animais. Este protocolo descreve como preparar extratos de células inteiras e frações subcelulares para estudos de zinco (Zn) e outros oligoelementos com espectroscopia de absorvância atômica.

Espectroscopia de absorvância atômica para medir piscinas de zinco intracelular em células de mamíferos

O objetivo do protocolo é demonstrar as técnicas utilizadas para investigar a doença viral, isolando e quantificando o vírus Zika, de múltiplos órgãos em um camundongo após a infecção.

Isolamento e quantificação do vírus Zika de múltiplos órgãos em um mouse

Apresentamos um método robusto, econômico e flexível para medir mudanças no número de hepatócitos e ploidy nuclear em amostras de tecido fixo/criopreservado que não requerem citometria de fluxo. Nossa abordagem fornece uma poderosa assinatura amostral de citologia hepática ideal para rastrear a progressão de lesões hepáticas e doenças.

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A tomografia microcomputada de fundição dupla de resina, ou DUCT, permite a visualização, digitalização e segmentação de dois sistemas tubulares simultaneamente para facilitar a análise 3D da arquitetura de órgãos. O DUCT combina a injeção ex vivo de duas resinas radiopacas seguidas de tomografia microcomputada e segmentação dos dados tomográficos.

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Este artigo demonstra como preparar e administrar ferro isotópico não radioativo ligado à transferrina para estudos de transporte de ferro na gravidez de camundongos. A abordagem para quantificar o ferro isotópico em compartimentos fetoplacentários também é descrita.

Quantificando o transporte de ferro através da placenta de camundongo in vivo usando isótopos de ferro não radioativos

Este artigo detalha a metodologia para radiomarcação de um anticorpo monoclonal anti-CD19 humano-específico e como usá-lo para quantificar células B no sistema nervoso central e tecidos periféricos de um modelo de esclerose múltipla em camundongos usando imagens PET in vivo, contagem gama ex vivo e abordagens de autorradiografia.

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