Determinando Membrane Topology Protein Usando Fluorescência Protease Protection (FPP)

O objetivo geral deste procedimento é determinar a topologia das proteínas integrais da membrana. Isso é obtido pela expressão de efusão, proteína entre a proteína fluorescente verde ou GFP e as caudas amino ou carboxila da membrana. Proteína de interesse em células para fins de controle, proteínas fluorescentes solúveis, como RFP, podem ser expressas.

Em seguida, a membrana plasmática está sujeita à permeação seletiva. Usando a escavação em detergente, as proteínas fluorescentes solúveis sairão da célula, enquanto as proteínas fluorescentes ligadas à membrana serão retidas dentro da célula. A etapa final é a aplicação de uma protease nas células permanentes e a determinação da retenção ou perda do sinal fluorescente.