Name: The Hole Board Modificado - Medir Comportamento, Cognição e Interação Social em camundongos e ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Aprenda a usar o hole board modificado para avaliar comportamento e cognição em camundongos e ratos. Este método combina campo aberto e reconhecimento de objetos em um único paradigma eficiente.

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Os autores gostariam de reconhecer o trabalho de Annemarie Baars e José Lozeman-van 't Klooster na realização, assistência e ensino de experimentos usando a configuração mHB.

NOTA: Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Experimentação Animal do University Medical Center Utrecht e da Universidade de Utrecht, na Holanda. Além disso, as experiências com animais seguiu os princípios de cuidados com animais de laboratório e consulte as Diretrizes para o Cuidado e Uso de Mamíferos em Neurociências e Comportamento Research. 25 1. Experimental Set-up NOTA: O aparelho de MHB padrão é constituída por uma caixa cinzenta experimental PVC (100 x 50 x 50 cm) separado de um compartimento adicional (50 x 50 x 50 cm) em que os companheiros de grupo do animal experimental pode ser colocada durante o período de teste por um transparente, perfurado partição 1. Se a presença de companheiros de grupo é indesejado ou se os animais alojados individualmente são testados, substitua a partição transparente por uma divisória feita de PVC cinza (Figura 1;. Ver também Ohl et al (2001) 1). O MHB (with medidas diferentes) utilizados para testes cognitivos é descrito no ponto 5 do protocolo. <ol><li> Colocar a placa (60 x 20 x 0,5 cm, feito de PVC cinzento) no meio da caixa. NOTA: A placa pode conter 20 cilindros (ᴓ 1,5 cm) 14 cambaleou em duas linhas ou 23 cilindros (ᴓ três centímetros) 8 escalonados em três linhas. </li><li> Divida a área em torno da placa por linhas pretas em 10 retângulos (20 x 15 cm) e 2 quadrados (20 x 20 cm). </li><li> Posicione a luz do estágio acima da placa para criar um contraste maior na intensidade da luz entre a placa (o que representa uma área desprotegida comparável com o centro de um campo aberto ou o compartimento de luz de um teste de transição claro-escuro) e da caixa (área protegida) a fim de aumentar o carácter aversivo de 4,8 a placa. </li><li> Casa os animais sob uma hr 12 inverteu ciclo dia-noite (por exemplo, as luzes apagadas às 7:00 e luzes acesas às 07:00). NOTA: No entanto, o MHB também podeser usado sob o cronograma de luz convencional (veja a discussão sobre os potenciais deficiências) 1,6. </li><li> Realize o teste de comportamento na fase mais ativa dos animais (por exemplo, 10:00 - 14:00) 4,15. </li><li> Manter um período de habituação de 2 semanas após a chegada dos animais nas instalações. Durante este período têm a mesma pessoa que executa a experiência comportamental manipulação dos animais quatro vezes por semana, e incluem todos os procedimentos de manuseamento de ser realizadas durante o teste real. Manipulação dos animais exclusivamente durante o tempo do dia em que os animais serão expostos ao teste mais tarde. </li><li> Grave os experimentos para armazenamento de dados em vídeo e, a fim de otimizar os resultados e reduzir a variabilidade inter observador, praticar o placar comportamental por meio de uma gravação de vídeo de experiências anteriores 2. Certifique-se de padronizar todas as ações e procedimentos executados pelo observador. </li></ol> 2. Behavioral Testing - sem a presença de companheiros de grupo <ol><li> Realizar teste comportamental na sala os animais são alojados em regularmente (para evitar possíveis efeitos de transporte para um local de teste) e instalar todo o equipamento de teste antes da chegada dos animais nas instalações (para os animais habituar à presença do equipamento). </li><li> Escolher-se o animal pela base da cauda, ​​a partir da sua gaiola e colocá-lo directamente no MHB. </li><li> Colocar cada animal no aparelho no mesmo canto virado para a parede (como indicado na Figura 1). </li><li> Permitir que o animal para explorar livremente o MHB por um período de tempo (geralmente 5 min 1,6,16-18). </li><li> Já um observador experiente vivo marcar os parâmetros comportamentais, utilizando software de pontuação comportamental. Use os parâmetros listados na Tabela 1. Atenção: alguns parâmetros comportamentais (por exemplo, auto-estradas e comportamento exploratório) pode ser marcado automaticamente como por exemplo, </em&gt; Discutido por Henry et al. (2010) 19 após o ajuste necessário do MHB. </li><li> Limpe o equipamento com água da torneira e uma toalha de papel depois de cada julgamento, a fim de evitar um viés baseado em pistas olfactivas. Nota: Os efeitos de testes de ordem possíveis quando testando animais socialmente alojados deve ser mantido em mente 17,20. </li></ol> 3. Behavioral Testing - na presença do Grupo Mates <ol><li> No caso do grupo habitação, medir a interacção com o animal experimental e seus companheiros de gaiola, durante o teste. <ol><li> Coloque os companheiros de grupo no compartimento do grupo antes do teste do animal experimental para permitir a habituação (principalmente 10-30 min 1,12). Nota: Os testes sob condições de estresse social é possível através da colocação de uma gaiola-mate dominante no compartimento do grupo ao testar uma socialmente derrotado indivíduo 13. </li><li> Colocar o animal experimental no compartimento de teste e permitir libertarly explorar a MHB como descrito na seção 2. Nota: Os efeitos de testes de ordem possíveis quando testando animais socialmente alojados deve ser mantido em mente 17,20. </li><li> Já um observador experiente vivo marcar os parâmetros comportamentais, utilizando software de pontuação comportamental. Use os parâmetros listados na Tabela 1. </li><li> Limpe o equipamento com água da torneira e uma toalha de papel depois de cada julgamento, a fim de evitar um viés baseado em pistas olfactivas. </li></ol></li></ol> 4. Novel Objeto Recognition and Food Intake Inibição <ol><li> Familiarizar os animais com um objeto (por exemplo, um dado ou uma pelota de alimentos) em sua gaiola em casa dois dias antes do experimento. </li><li> Colocar o objecto familiarizados no aparelho 2 cm de distância a partir de um objecto novo (por exemplo, um parafuso ou comida não familiar) no canto transversalmente a partir do ponto de partida. </li><li> Medir o tempo que o animal leva a abordar o romance e familiar objeto / alimentos. Use os parâmetros em &lt;strong&gt; Tabela 1. </li><li> Limpe o equipamento com água da torneira e uma toalha de papel depois de cada julgamento, a fim de evitar um viés baseado em pistas olfactivas. </li></ol> 5. testes cognitivos <ol><li> Inserir uma placa menor (35 x 22 x 1 cm) com 10 cilindros no meio da caixa (Figura 1) para o ensaio de ratos 3,22. Reduzir o tamanho de caixa de 50 x 50 cm, para testar ratinhos 21 através da inserção de uma partição feita de PVC cinzento. </li><li> Perfumar todos os cilindros com um sabor animais são atraídos para (por exemplo, a baunilha) e isca todos com uma recompensa (por exemplo, um pedaço de amêndoa, uma recompensa altamente palatável para camundongos e ratos) debaixo de uma grade de modo que os animais não pode removê-lo. </li><li> Cilindros Cue (muitas vezes três), com um anel de cor (contrastando com o PVC cinza) e isca-los com uma recompensa removível (por exemplo, 0,05 g pedaço de amêndoa). </li><li> Familiarizar os animais com a recompensa diária nos dois dias antes do experimento emsua gaiola, oferecendo-o com uma pinça e certificando-se de que os animais comem. </li><li> Já um observador experiente vivo marcar os parâmetros comportamentais, utilizando software de pontuação comportamental. Medir os parâmetros listados na Tabela 2, para além dos parâmetros comportamentais mencionados na secção 2 (Tabela 1) com a excepção de os parâmetros relacionados com a inibição objeto reconhecimento ou ingestão de alimentos. </li><li> Fase 1: Com cada animal, executar quatro ensaios por dia com um intervalo inter-ensaio constante (por exemplo, 30-60 minutos) até que uma constante de tempo para concluir um ensaio for atingido (isto é, quando todos os três pedaços de amêndoas foram recolhidos). </li><li> Fase 2: Cue e isca três cilindros diferentes e colocar os animais na configuração para quatro ensaios para testar a capacidade de aprendizagem de reversão. </li><li> Limpe o equipamento com água da torneira e uma toalha de papel depois de cada julgamento, a fim de evitar um viés baseado em pistas olfactivas. </li></ol>

<ol><li>Ohl, F., Holsboer, F., Landgraf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+modified+hole+board+as+a+differential+screen+for+behavior+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Res.+Methods+Instrum.+Comput%22%5BJournal%5D)">The modified hole board as a differential screen for behavior in rodents.</a> Behav. Res. Methods Instrum. Comput. 33 (3), 392-397 (2001).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

O paradigma MHB pode ser usado para medir as dimensões múltiplas do comportamento não-condicionado. O protocolo pode ser ligeiramente alterada dependendo do objectivo da experiência. Neste protocolo, discutir as definições, os tempos e as medições normalmente usado em nosso laboratório. No entanto, pequenos desvios para as medições do aparelho têm sido utilizados no passado, e também a quantidade de cilindros sobre o bordo pode variar de 3. Muitas vezes, estudos empregar um tempo de teste de 5 min por julgamento, mas outras vezes teste pode também ser apropriada, ou seja, terminando o teste assim como um teste cognitivo foi concluída com sucesso ou em estender o tempo de teste se os animais são extremamente ansiosas ou deficiência física. O tempo do dia de testes foi escolhida para estar sob condição de luz vermelha desde roedores são animais noturnos e são mais ativos na fase escura cedo. Roedel et al. (2006) revela os efeitos de luz ou ensaios fase escura sobre o desempenho comportamental e cognitivoem ratos DBA no MHB 16. Outros estudos realizaram experiências MHB sob condições de luz branca 1,6, no entanto, deve notar-se que o ensaio sob condições de luz branca pode induzir a inibição do comportamento e perturbação cognitiva (como mostrado em ratinhos DBA) 16. As Tabelas 1 e 2 contêm uma grande quantidade de parâmetros comportamentais a ser medido. Durante a análise de dados isto pode levar a alguns parâmetros que indicam um aumento significativo de, por exemplo, &#39;a placa de latência primeira entrada », mas não em outros parâmetros do mesmo sistema de motivação (neste caso,&quot; Prevenção &quot;). Em alguns casos, isso pode levar a resultados inconclusivos. Guilloux et al. (2011) introduziu escores z comportamentais integrados à fenotipagem comportamental em ratos 24. Com o uso de escores z comportamentais integrados os vários parâmetros podem ser combinados para um single-score z descrevendo uma motivatio especialsistema nal. Os escores z subsequentes podem por sua vez ser mais facilmente comparados através de testes comportamentais e experimentos. Além das características descritas deste paradigma, uma utilização mais profunda tornou-se evidente no estudo de Salomons et al. (2012). A habituação à novidade de duas linhagens de camundongos (balc / cJ e 129P3 / J) na MHB foi comparado, apresentando uma diferença de flexibilidade comportamental indicando um perfil comportamental não-adaptativo dos ratos 129P3 / J 4, espelhando prejudicada capacidades de adaptação e, provavelmente, até mesmo ansiedade patológica. Concluindo, o MHB permite a medição de múltiplas dimensões comportamentais em um único experimento. Através da combinação de características de uma placa tradicional buraco e teste de campo aberto, comportamento incondicionada, a interação social, cognição e capacidades de adaptação, ou seja, o bem-estar pode ser investigado. Este teste pode por exemplo, ser utilizada para avaliar alterações comportamentais devidos ao pharmacological- e / oumanipulações genéticas, reprodução seletiva e capacidades adaptativas. Em comparação com a bateria de testes clássicos, o número de animais necessários é claramente reduzida e esforço experimentado pelos animais durante o teste é extremamente baixo.

A placa de orifício modificado (MHB) é utilizado para avaliar o comportamento de vários dimensões não condicionado, principalmente em ratos e ratazanas 1. Uma série de testes amplamente usados ​​medir um único parâmetro de comportamento que não cobre completamente todo o fenótipo de uma dimensão comportamental. A MHB foi desenvolvido com base no conceito de que os roedores podem mostrar seu rico repertório comportamental apenas em um ambiente de teste rica 2 e, assim, permite observações etológicas complexos. O conjunto compreende-se as características da placa de orifício tradicional e o teste de campo aberto, resultando num paradigma complexo que ultrapassa as desvantagens de uma bateria de teste (ou seja, na redução do número de animais utilizados 1,3,4, contornando o possíveis efeitos da ordem de teste 5, e reduzir o tempo-efeito e os custos 6). Em contraste com a maioria dos testes comportamentais (por exemplo, Hånell &amp; Marklund, 2014) 7 &lt;/ Sup&gt;, uma vantagem da MHb é que os animais não precisam de ser privados de alimentos a fim de aumentar a motivação para resolver a tarefa. Além disso, o isolamento social pode ser contornado durante o teste, colocando companheiros de grupo do animal experimental num (group-) compartimento separado do compartimento de teste por uma divisória perfurada transparente, permitindo a visual, auditiva e olfativa contato 8,9. A MHB foi (farmacologicamente) validado para ambos os camundongos e ratos 1,6. A ampla gama de comportamentos podem ser medidos, como o comportamento de evitação, avaliação de risco, excitação, exploração, atividade locomotora, habituação, afinidade social e cognição 2,8-10. Além disso, o MHB pode ser combinado com um teste de inibição da ingestão de alimentos, bem como teste de reconhecimento de objecto novo 10,11. Finalmente, o MHB também pode ser utilizado para efectuar experiências de stress sociais testando animais socialmente vencidos ao colocar um indivíduo dominante emo compartimento do grupo 12,13. Este protocolo para camundongos e ratos dará uma visão geral das múltiplas aplicações do MHB.

<table><tbody><tr>Aparelho <td></td><td></td><td>cognitivo mHB</td><td>A caixa para testes cognitivos tem 50x50 cm, inserindo uma divisória de PVC cinza no mHB padrão. Uma placa menor (35x22x1 cm) com 10 cilindros é colocada no meio da caixa. Todos os cilindros são perfumados com um sabor pelo qual os animais são atraídos (por exemplo, baunilha) e todos são iscados com uma recompensa (por exemplo, um pedaço de amêndoa) sob uma grade para que os animais não possam removê-lo. Os cilindros (geralmente três) são sinalizados com um anel colorido (contrastando com o PVC cinza) e são iscados com uma recompensa removível (por exemplo, 0,05 g de amêndoa).&nbsp;</td></tr><tr><td>Sabor</td><td></td><td></td> de baunilha <td>Sabor de baunilha dissolvido em água (0,02%)</td></tr><tr><td>Câmera de câmera</td><td></td><td></td><td>que gera saída de qualidade suficiente para remarcar o comportamento do vídeo.&nbsp;</td></tr><tr><td>Luz de palco</td><td></td><td></td><td>Uma luz de teatro que permite ajustar a intensidade da luz e as dimensões da superfície que está iluminada.&nbsp;</td></tr><tr><td>Software de</td><td></td><td></td> pontuação comportamental <td>Software de pontuação comportamental.</td></tr></tbody></table>

the hole board modificado - medir comportamento, cognição e interação social em camundongos e ratos

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Este protocolo descreve o conselho buraco modificado (MHB), que combina características de uma placa de orifício tradicional e campo aberto e é projetado para medir múltiplas dimensões do comportamento incondicionado em pequenos mamíferos de laboratório (por exemplo, camundongos, ratos, musaranhos e pequenos primatas). Este paradigma é uma alternativa viável para a utilização de uma bateria de testes de comportamento, uma vez que uma ampla gama de perfil comportamental comportamental de um animal pode ser feito com um único ensaio. O aparelho é constituído por uma caixa, que representa a área &quot;protegida&quot;, separado de um compartimento de grupo. A bordo, em que pequenos cilindros são escalonados em três linhas, é colocado no centro da caixa, o que representa a área &#39;desprotegida&#39; do set-up. As capacidades cognitivas dos animais pode ser medido por iscagem alguns cilindros na placa e medindo a memória de trabalho e de referência. Outro comportamento incondicionada, como activity-related-, ansiedade-related- e comportamento social, pode ser observado usando esse paradigma. Flexibilidade comportamental e a capacidade de se habituar a um ambiente novo, adicionalmente, pode ser observado sujeitando os animais para ensaios múltiplos no MHB, revelando uma visão sobre as capacidades adaptativas dos animais. Devido ao testar os efeitos de ordem em uma bateria de teste comportamental, os animais naive deve ser utilizada para cada experiência individual. Ao testar múltiplas dimensões comportamentais em um único paradigma e, assim, contornar esse problema, o número de animais experimentais utilizados é reduzido. Além disso, evitando o isolamento social durante o ensaio e sem a necessidade de alimentar privar os animais, o MHB representa um sistema de teste comportamental, induzindo qualquer caso, de muito baixa quantidade de stress.

A grande quantidade de parâmetros que podem ser medidos no MHB fazer esta configuração especialmente adequado para medir várias dimensões comportamentais. Um exemplo é a identificação de adaptação comportamental a um ambiente novo por exposição repetida ao teste. . Salomons et al (2010) estudaram a habituação de duas linhagens puras de camundongos (BALB / cJ e 129P3 / J) para a MHB sob duas condições diferentes de luz (luz vermelha: o contraste entre a caixa e alimentação: 45 lux vs. luz branca: contraste entre a caixa e alimentação: 115 lux (ver também seção de protocolo 1.3)) 4. Ratinhos balc / cJ mostram uma diminuição (habituating) a latência até à primeira entrada do bordo (ver Tabela 1) em condições de luz vermelha, como mostrado na Figura 2A. Em contraste, os ratos 129P3 / J não mostram sinais de habituação sobre ensaios. A figura 2B mostra o experimento em condições de luz branca. Camundongos BALB / cJ mostrar novamente uma latência decrescente para a primeira entrada placa sobre ensaios ainda que a umnimals mostram um padrão de habituação mais lenta em comparação com a condição de luz vermelha. Camundongos 129P3 / J não só mostrar novamente prejudicada habituação, mas também uma tendência de sensibilização sob a condição de luz branca. Da mesma forma, em um estudo realizado por Salomons (2012) 129P2 / OlaHsd ratos mostraram uma flexibilidade comportamental prejudicada em resposta a novidade em comparação com camundongos BALB / cOlaHsd 23. A diferença na capacidade de habituação torna-se assim aparente entre duas linhagens puras de ratos quando testado no MHB 4. A versão cognitiva do MHB pode por exemplo ser utilizado para medir alterações cognitivas em ratinhos. Van der Kooij et al. (2010) usou este set-up para medir o funcionamento cognitivo de camundongos C57BL / 6J com leve isquemia-hipoxia cerebral (45 min de hipóxia; HI-45), HI grave (75 min de hipóxia; HI-75) e sham- camundongos de controle 9. A capacidade para completar os ensaios (isto é, encontrar os furos iscados dentro de 5 min) é mostrado na Figura 3A. </strong&gt; O número de erros de memória de curto prazo (revisita a um buraco com isca), erros de memória de longo prazo (visitas a um buraco não iscas) e erros de omissão (nenhuma visita a um buraco com isca) são apresentados na Figura 3B-D respectivamente. A fim de confirmar que o grupo HI-45 não teve nenhum comprometimento cognitivo, este grupo foi testado contra os falsos-controles em uma tarefa de reversão. Os três orifícios iscados foram nomeados para três cilindros diferentes e os animais foram testados para 4 ensaios. O efeito de reversão se torna evidente quando se compara a última prova da primeira fase com o primeiro ensaio da fase de reversão. A duração para completar os quatro ensaios de inversão dá uma indicação sobre o desempenho global. A Figura 4 mostra o tempo de latência para concluir o ensaio para os dois grupos e um claro efeito global do tratamento é evidente. Isto significa que, na tarefa de reversão de fato há um prejuízo na flexibilidade cognitiva (re-learning) no grupo HI-45, que será<html> veio detectável utilizando a MHB 9. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig1.jpg" /> Figura 1. Visão esquemática do conselho buraco modificado. (A) O set-up consiste em um compartimento de teste (box) com no meio da (não protegido) bordo indicado com linhas em ziguezague e compartimento do grupo. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig5.jpg" /> = Novela objeto, <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig6.jpg" /> = Objeto familiar, <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig7.jpg" /> = Ponto de partida. (B) Visão esquemática da versão cognitiva do conselho buraco modificado para ratos. (C) Vista lateral de um cilindro, como utilizado na versão cognitiva do conselho buraco modificado. Um pedaço de amêndoa é colocada por baixo da grelha de todos os cilindros.target = &quot;_ blank&quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig2.jpg" /> Figura 2. A luz vermelha ou condições de luz branca. (A) de latência até a primeira entrada bordo (média + SEM) de BALB / cJ e camundongos 123P3 / J medida em condições de luz vermelha (caixa 0-5 lux e tábua de 45 lux). A ANOVA de medidas repetidas com ajuste Huyn-Feldt revelou uma cepa (P = 0,025), o julgamento (P &lt;0,001) e ensaio de interacção x tensão (P &lt;0,001) efeito a análise post hoc:. Entre as linhagens: * = P &lt;0,0026, entre dois ensaios consecutivos: $ = P &lt;0,0026 (BALB / cJ) (B) A latência da primeira entrada bordo (média + SEM) sob condições de luz branca (caixa 0-5 lux e tábua de 120 lux).. A ANOVA de medidas repetidas com ajuste Huyn-Feldt revelou uma cepa (P = 0,031), o julgamento (P &lt;0,001) e interação x tensão julgamento (P &lt;0,001) effe. ct análises post-hoc: entre as linhagens: * = P &lt;0,0026, entre dois ensaios consecutivos: $ = P &lt;0,0026 (BALB / cJ) e T = P &lt;0,0026 (123P3 / J). Esta figura foi modificada a partir de 2010 4 Salomons et al.. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52529/52529fig2highres.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig3.jpg" /> Figura 3. teste cognitivo na MHB (fase 1). Todos os números mostram a média + SEM. (A) A latência para concluir o julgamento (SEC) dos ratos de controle sham, HI-45 e HI-75. (B) Número de erros de omissão, visitas furo (C) Não iscados e (D) revisita para furos de iscas. * = P &lt;0,05, ** = P &lt;0,01, *** = P &lt;0,001 vs sham HI-75, # = P &lt;0,05, ## = P &lt;0,01, ### = P &lt;0,001HI-45 vs. HI-75. Este valor foi modificado a partir do Van der Kooij et al., 2010 9. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52529/52529fig3highres.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig4.jpg" /> Figura 4. Reversão tarefa de aprendizagem (fase 2). Latência para concluir um julgamento (sec) na tarefa de aprendizado reverso (média + SEM). Efeitos de julgamento: # = P &lt;0,05, ## = P &lt;0,01 (tarefa primeira reversão julgamento vs. julgamento anterior). O efeito do tratamento: * = P &lt;0,05, ** = P &lt;0,01 (HI-45 vs. sham). Este valor foi modificado a partir al. Van der Kooij et de 2010 9. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Sistema </td><td> Atividade </td><td> Parâmetro medido </td></tr><tr><td> Avoeu danço </td><td> Entrada Board </td><td> Frequência, latência (s), duração (%) e a duração média (s) sobre o bordo </td></tr><tr><td> Avaliação de risco </td><td> Atende esticada </td><td> Frequência e latência (s) de esticados posturas corporais (incluindo membros posteriores) </td></tr><tr><td> Excitação </td><td> Grooming </td><td> Frequência, a latência (s), duração (%) e duração média (s) auto-limpeza </td></tr><tr><td></td><td> Defecação </td><td> Frequência e latência (s) de boli produzido </td></tr><tr><td></td><td> Micção </td><td> Frequência e latência (s) de micções </td></tr><tr><td> Dirigido exploração </td><td> Visitas Buraco </td><td> Frequência e latência (s) de visitas do cilindro </td></tr><tr><td></td><td> Novel exploração objeto </td><td> Frequência, a latência (s), duração (%) e duração média (s) explorar a novela objeto </td></tr><tr><td> Exploração sem direção </td><td> Elevando o caixa &lt;/ Td&gt; <td> Frequência e latência (s) de levantamentos na caixa (patas dianteiras não tocar na parede) </td></tr><tr><td></td><td> Placa Empinar </td><td> Frequência e latência (s) de levantamentos no conselho </td></tr><tr><td></td><td> Exploração Buraco </td><td> Frequência e latência (s) de explorações de cilindro </td></tr><tr><td> Memória </td><td> Familiar exploração objeto </td><td> Frequência, a latência (s), duração (%) e duração média (s) explorar a objeto familiar </td></tr><tr><td> Afinidade social </td><td> A interação do grupo </td><td> Frequência, latência (s), duração (%) e a duração média (s) que interage com o compartimento do grupo </td></tr><tr><td> Atividade locomotora </td><td> Cruzamento de linha </td><td> Frequência e latência (s) de cruzamentos de linha </td></tr></tbody></table> Tabela 1: Lista de parâmetros comportamentais <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td> Sistema de memória </td><td> Parâmetro </td><td> Descrição </td></tr><tr><td> A memória de longo prazo </td><td> Escolha errada </td><td> Visita ao cilindro não-iscas; nariz abaixo da borda </td></tr><tr><td> Erro de omissão </td><td> Omissão de um cilindro com isca </td><td> Nenhuma visita a um cilindro com isca </td></tr><tr><td> A memória de curto prazo </td><td> Escolha repetida </td><td> Revisitar a cilindro de iscas; nariz abaixo da borda </td></tr><tr><td> O desempenho geral </td><td> O tempo total de ensaio </td><td> Tempo até que todos os cilindros iscas foram visitados </td></tr></tbody></table> Tabela 2: Lista de parâmetros cognitivos

Este protocolo descreve a placa de furo modificada, que é uma configuração de teste comportamental que compreende as características de um campo aberto e uma placa de furo tradicional. Essa configuração permite a análise diferencial do comportamento incondicionado de pequenos mamíferos de laboratório, bem como a análise das habilidades cognitivas.

The Hole Board Modificado - Medir Comportamento, Cognição e Interação Social em camundongos e ratos

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

O objetivo geral dos experimentos a seguir é medir o comportamento incondicionado de pequenos mamíferos de laboratório e analisar suas habilidades cognitivas. Isso é alcançado colocando os animais em um tabuleiro de buracos modificado para observar e pontuar seu comportamento incondicionado na presença ou ausência de seus companheiros de gaiola. Além disso, um objeto novo ou familiar, ou um pellet de alimento, pode ser colocado no aparelho antes do teste, o que pode ser usado para medir o reconhecimento de objetos ou a inibição da ingestão de alimento.Uma terceira aplicação deste método consiste em colocar o animal na versão cognitiva do tabuleiro modificado, em que a recompensa é associada a um identificador de cor contrastante. Para medir as habilidades cognitivas do sujeito em teste, os resultados mostram um espectro de comportamento não condicionado. Como o método combina múltiplas dimensões comportamentais em um único paradigma, que contém características de um tabuleiro de buracos tradicional e do teste de campo aberto, a principal vantagem desta técnica é que ela supera as desvantagens de uma bateria de testes, reduzindo o número de animais utilizados, evitando possíveis efeitos da ordem dos testes e diminuindo o tempo e os custos. Os testes devem ser realizados na sala habitual de alojamento durante a fase escura, fase em que o animal é mais ativo; para os fins deste vídeo, os testes são realizados sob condições de luz intensa.Os testes comportamentais devem ser realizados com animais que foram habituados ao seu ambiente e ao manuseio pelo experimentador. Coloque a placa contendo os cilindros no centro da caixa experimental. Em seguida, posicione uma luz de palco acima da placa para criar um contraste na intensidade luminosa entre a placa e a caixa, aumentando o caráter aversivo da placa.Para começar, coloque o objeto familiar no aparelho a dois centímetros de distância de um objeto novo, em um canto oposto ao ponto de partida. Em seguida, retire o animal a ser testado da gaiola de origem e coloque-o voltado para a parede em um canto específico do aparelho. Permita que o animal explore livremente por aproximadamente cinco minutos.Um observador experiente deve pontuar os parâmetros comportamentais utilizando um software de pontuação comportamental. Utilize os parâmetros listados nesta tabela e também meça o tempo que o animal leva para se aproximar do objeto novo e familiar ou do alimento novo e familiar. Limpe o equipamento com água da torneira e uma toalha de papel após cada ensaio.Para evitar um viés baseado em pistas olfativas, coloque os companheiros de grupo no compartimento de grupo por 10 a 30 minutos antes de testar o animal experimental, a fim de permitir a habituação. Em seguida, coloque o animal experimental no compartimento de teste e permita que explore livremente a placa modificada por cinco minutos ou pelo tempo necessário ao seu próprio protocolo. Novamente, um observador experiente deve pontuar em tempo real os parâmetros comportamentais utilizando software de pontuação comportamental, com base nos parâmetros listados na Tabela 1, como anteriormente.Antes de iniciar este experimento, familiarize os animais com uma recompensa altamente palatável. Aqui, utiliza-se um pedaço de amêndoa. Ofereça a recompensa com pinça na gaiola de origem uma vez ao dia durante dois dias consecutivos antes do experimento e insira uma divisória para reduzir o tamanho da caixa para 50 por 50 centímetros.Para o teste, posicione um tabuleiro menor no centro da caixa com os camundongos. Este diagrama mostra a configuração do tabuleiro de buracos modificado. Em seguida, aromatize todos os 10 cilindros com um aroma ao qual os animais são atraídos, como baunilha, e isca todos os cilindros com a recompensa colocada sob uma grade, de modo que não possa ser removida.Cilindros Q3 com um anel colorido que contrasta com o PVC e iscas esses cilindros com uma recompensa removível. Novamente, coloque o animal no mesmo canto do aparelho e tenha um observador experiente pontuando em tempo real. Os parâmetros comportamentais utilizando software de pontuação comportamental.Meça os parâmetros listados na tabela dois, além daqueles previamente mostrados na tabela um, com exceção dos parâmetros relacionados ao reconhecimento de objetos ou à inibição da ingestão de alimento. Realize quatro sessões de treinamento diariamente, com um intervalo interensaio constante, até que um tempo constante para a coleta das três peças de amêndoa seja estabelecido. Limpe o equipamento com água da torneira e um papel toalha após cada ensaio, a fim de evitar um viés baseado em pistas olfativas ao testar a aprendizagem de inversão.Uma vez que o animal esteja completamente treinado, apresente o estímulo e isca três cilindros diferentes ou quantos cilindros forem necessários de acordo com o seu próprio protocolo e teste o animal no número exigido de tentativas. As quatro primeiras imagens mostram os resultados do paradigma de teste cognitivo que mede o funcionamento cognitivo de camundongos C57 black six J com hipóxia-isquemia cerebral leve, identificada como HI 45, hipóxia-isquemia grave, identificada como HI 75, e camundongos controle simulados. Este gráfico mostra a latência média para completar as quatro tentativas de um dia de teste.Este gráfico mostra o número de revisitas a um orifício com isca em cada dia de teste. Uma medida dos erros de memória de curto prazo. Aqui, são mostradas as visitas a orifícios sem isca.Esta é uma medida de erros de memória de longo prazo. Aqui, são apresentados os dados referentes ao número de erros de omissão. Um erro de omissão é definido como o número de cilindros com isca não visitados.Para confirmar que o grupo I 45 não apresentava comprometimento cognitivo, esse grupo foi testado em comparação com os controles simulados. Em uma tarefa de inversão, os três orifícios com recompensa foram designados a três cilindros diferentes, e os animais foram testados em quatro ensaios. O efeito de inversão torna-se evidente ao comparar o último ensaio da primeira fase com o primeiro ensaio da fase de inversão.Esta imagem mostra a latência para completar o teste em ambos os grupos, e um claro efeito geral do tratamento é evidente. Isso significa que há uma flexibilidade cognitiva prejudicada no grupo HI 45, que foi detectável utilizando o tabuleiro modificado com a tarefa de inversão. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como usar o tabuleiro modificado tanto na versão geral quanto na versão cognitiva.

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Research

JoVE Journal

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