Geração eficiente de hiPSC Neurais Lineage Repórteres Knockin específica usando o CRISPR / Cas9 e Cas9 Duplo Nickase Sistema

O objetivo geral deste procedimento é gerar células-tronco pluripotentes induzidas por humanos específicas da linhagem ou repórteres knockin HIPC usando recombinação homóloga mediada por CRISPR Cas nove. Isso é feito primeiro projetando e construindo vetores de segmentação. O segundo passo é projetar e construir RNAs de guia único para o sistema CRISPR Cas nove ou o sistema CAS nove N double Nick case.

2 93 PÉS. As células são então transfectadas com os RNAs guia único e o vetor de expressão CAS nove e o DNA é extraído e amplificado para avaliação por um ensaio T seven ENDONUCLEASE um. A etapa final é realizar a previsão in silico de potenciais locais fora do alvo. Sites. Em última análise, as PSCs HI serão transfectadas com o vetor de direcionamento e os nove componentes do sistema CRISPR Cas para formar linhagens celulares repórteres de linhagem neural.