Geração eficiente de hiPSC Neurais Lineage Repórteres Knockin específica usando o CRISPR / Cas9 e Cas9 Duplo Nickase Sistema

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28 de maio de 2015

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Ferramentas de edição de genoma, como o sistema CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (associado a CRISPR), melhoraram muito a eficiência do direcionamento de genes em células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (hiPSCs). Este manuscrito descreve um protocolo para geração de repórter hiPSC específico de linhagem usando recombinação homóloga assistida por sistema CRISPR/Cas.

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Geração de Repórter Knockin

Chapters in this video

0:05

Título

1:54

Design de Vetores de Targeting

2:41

Design e Construção de Vetores de sgRNAs para o Sistema CRISPR/Cas9

5:20

Design e Construção de sgRNA para Cas9n Double Nickase

8:06

Avaliação de sgRNAs por Endonuclease T7 1

11:03

Predição In Silico de Potenciais Sítios Off-Target

12:32

Resultados: O Ensaio T7E1 é Utilizado para Avaliar sgRNAs Antes da Transfecção de hiPSCs

13:56

Conclusão

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