Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

O objetivo geral deste procedimento é fornecer um método para investigar a capacidade de camundongos detectar, habituar e desabituar-se a odores tanto novos quanto sociais. Isso é realizado primeiramente preparando uma série de odores novos não sociais, como extratos à base de frutas e nozes, e odores sociais, como cama de gaiola. O segundo passo é apresentar os odores aos camundongos, começando com três odores novos e seguidos por dois odores sociais diferentes.

Em cada ensaio, o comportamento de farejamento dos camundongos é avaliado e registrado. Em última análise, o teste de olfação para discriminação e habituação é utilizado para demonstrar que o animal é capaz de responder a um odor novo, pode habituar-se ao odor e, em seguida, demonstrar a capacidade de desabituar-se ao odor quando exposto a outro odor novo ou odor social. Este método pode ser usado para responder perguntas fundamentais na área de neurociência, como se o animal não está respondendo a um animal novo ou estímulo novo porque é incapaz de detectar o odor.

Comece a preparar os odores não sociais colocando luvas e preenchendo três tubos cónicos de 15 mililitros com 10 mililitros de água. Adicione com pipeta 100 microlitros de extrato de amêndoa no primeiro tubo, 100 microlitros de extrato de banana no segundo tubo e deixe o terceiro tubo apenas com água para ser usado como controle. Em seguida, obtenha duas gaiolas diferentes de camundongos que não tenham sido limpas há pelo menos três dias e que contenham números iguais de camundongos do mesmo sexo dos animais de teste.

Use um cotonete para limpar a parte inferior da gaiola suja em movimentos zigue-zague. Agite qualquer material de forração aderido ao cotonete e coloque-o com a ponta voltada para baixo em um pote de vidro grande com tampa bem ajustada. Repita este processo até obter três cotonetes de ambas as gaiolas para cada camundongo que será testado.

Guarde os frascos à temperatura ambiente e utilize os swabs dentro de quatro a seis horas. Para manter um odor forte e consistente, mova as gaiolas com as amostras de odor para uma sala fora da área de teste no dia do experimento. Não use fragrâncias ou loções perfumadas e evite comer qualquer alimento com odor forte.

Coloque os odores sociais e não sociais preparados na sala de testes, juntamente com algodão em bastão novo, fita laboratorial, um frasco para resíduos com tampa e dois cronômetros imediatamente antes do procedimento de teste. Coloque luvas limpas e pese o primeiro camundongo. Em seguida, transfira o camundongo para uma gaiola limpa com tampa de arame e sem garrafa d'água.

Coloque a gaiola em uma área sem odores ou ruídos incomuns e permita que o camundongo se acostume com a nova gaiola por 45 minutos. Ao final do período de aclimatação, leve o camundongo em sua gaiola para a área de teste e comece a aclimatar outro camundongo. Coloque o camundongo aclimatado em sua gaiola sobre a bancada em uma altura confortável para visualização quando sentado.

Em seguida, prepare um dos odores na ordem descrita no protocolo textual para os odores não sociais, aplicando 100 microlitros do aroma na ponta de um cotonete novo. Imediatamente antes do uso. Para os odores sociais, retire e utilize um dos cotonetes previamente preparados de seus respectivos frascos.

Levante a tampa de arame da gaiola e insira a extremidade sem cheiro do cotonete na abertura da garrafa d'água pelo lado inferior da tampa de arame. Evite tocar a ponta de algodão em qualquer superfície, incluindo os dedos, para evitar contaminação por odores. Quando restar cerca de uma polegada do cotonete com cheiro dentro da gaiola, fixe a extremidade de madeira do cotonete no lado inferior da gaiola usando fita laboratorial.

Em seguida, abaixe suavemente a tampa de volta sobre a gaiola. Para evitar perturbar o camundongo experimental, comece imediatamente a cronometrar dois minutos. Usando o primeiro cronômetro e o segundo relógio, registre o tempo acumulado que o camundongo experimental passa cheirando o odor.

A cheirada ativa é definida como o posicionamento do nariz do camundongo em direção ao cotonete quando este está a uma distância de até dois centímetros do cotonete. Quando o ensaio terminar, levante a tampa de arame e remova cuidadosamente o cotonete puxando-o para baixo através da parte inferior da tampa. Para evitar o contato da tampa com a extremidade do cotonete que contém o odor, feche o cotonete usado no frasco de resíduos enquanto o camundongo descansa por um minuto, e prepare o próximo cotonete doador.

Apresente cada odorante três vezes seguidas durante dois minutos. Quando todos os ensaios forem concluídos, esvazie o frasco de resíduos contendo os cotonetes usados em uma lixeira fora da sala de teste e devolva o camundongo à sua gaiola de origem. Cada um dos odorantes foi primeiramente apresentado a camundongos com fundo genético C 57 black six J, com apresentações sucessivas de cada odor.

Os camundongos passaram menos tempo investigando o odor que sugeria habitação. O mesmo padrão de habitação e discriminação pode ser observado com os odores sociais, assim como com os odores não sociais. No entanto, os camundongos passaram mais tempo investigando os odores sociais.

Quando os mesmos odores não sociais foram apresentados a um macho da linhagem de fundo misto FVB, observou-se um padrão semelhante de habituação. Cada novo odor introduzido foi recebido com um aumento na fungação ativa, que diminuiu com cada apresentação do mesmo odor. No entanto, os camundongos FVB mostraram um padrão diferente com os odores sociais, pois não houve diminuição significativa no tempo gasto fungando com a exposição repetida.

Os dados sugerem que os camundongos não habituam a apresentações repetidas dos dois odores sociais. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como testar a capacidade de um camundongo detectar um odor novo ou social, habituar-se a esse odor e, em seguida, deshabituar-se a esse odor quando apresentado um odor novo.