Name: Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Aprenda a avaliar a função olfatória em camundongos usando o teste de habituação/deshabitação a odores. Este método detecta discriminação entre odores sociais e não sociais, essencial para estudos comportamentais em neurociência.

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Este trabalho é apoiado por uma bolsa do Baylor University Research Council e por uma bolsa de pesquisa da Epilepsy Foundation.

Os ratos machos adultos utilizados na experiência seguinte foram gerados e alojado na Universidade de Baylor a uma temperatura ambiente de 22 ° C, com uma luz de 14 h e 10 h escuro (20:00-06:00 h) ciclo diurno. Os ratos tiveram acesso ad libitum a comida e água. Todos os procedimentos para os ratos estavam em conformidade com os Institutos Nacionais de Saúde Diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório eo protocolo animal foi aprovado pela Universidade de Baylor Animal Care e do Comitê Use. Os ratinhos foram testados no final da manhã / tarde. Para todos os procedimentos abaixo o pesquisador deve usar luvas para eliminar odores e evitar a contaminação. 1. Preparação de Odores não-sociais <ol><li> Prepare odores não sociais frescos cada dia de testes. Nota: O investigador deve usar luvas para preparar os odores. <ol><li> Encha três tubos de centrífuga com 10 ml de água cada. </li><li> Pipetar 100 mL de extrato de banana em um 15 ml &amp; #160; tubo cónico e 100 ul de extracto de amêndoa para um segundo tubo de 15 ml de uma diluição de 1: 100. Nota: O terceiro tubo de 15 ml conterá somente água. </li></ol></li></ol> 2. Preparação de Odores Sociais <ol><li> Prepare odores sociais frescos na manhã de testes irá ocorrer. Obter odores sociais de duas gaiolas que não tenham sido limpos durante pelo menos três dias, e contêm um número igual de ratinhos. Obter odores sociais de ratos do mesmo sexo como o sujeito de teste. Nota: Estes estão a ser armazenados a temperatura ambiente e deve ser usada dentro de 4-6 horas para manter o odor forte e consistente. <ol><li> Determine quantas odor sociais cotonetes precisam ser criados: cada rato que está sendo testado será apresentado com três swabs de odor Social 1, e três de odor sociais 2. </li><li> Prepare odores sociais limpando um cotonete de uma forma em zigue-zague através da parte inferior de uma gaiola suja. Sacudir qualquer excesso cama agarrado à ponta. </li><li> Loja swabs em grandes frascos de vidro com tampas ou em copos cobertos com parafilme. Designar um recipiente para um odor sociais e um segundo para o odor sociais 2. </li></ol></li><li> Manter gaiolas de origem odor fora da sala de ensaio experimental. </li></ol> 3. A aclimatação do mouse Teste <ol><li> Calçar luvas e pesar o mouse para ser testado e coloque individualmente em uma gaiola limpa com uma tampa de arame em cima e garrafa de água removida. </li><li> Permitir que o mouse para se aclimatar à nova gaiola por 45 min em uma sala diferente de sala de ensaios. Certifique-se de que não existem odores ou ruídos no quarto. </li><li> Como teste leva cerca de 45 min, escalonar os tempos de aclimatação, colocando a próxima mouse para ser testado em uma gaiola limpa para se aclimatar à direita antes de testar o mouse atual. </li></ol> 4. Preparação da sala de teste <ol><li> Coloque compressas de algodão frescos, fita de laboratório, os frascos contendo swabs odor sociais, os tubos de nsobre-sociais odores, uma micropipeta, dois temporizadores, e um frasco de resíduos com uma tampa na sala de testes. </li><li> Certifique-se de que a sala de ensaios é razoavelmente livre de odores, ruídos altos e luz brilhante. Não use perfumes ou loções perfumadas. Nota: O observador não deve ser mascar chicletes ou balas durante o período de testes e deve tentar limitar a sua exposição a fortes alimentos de odor. </li></ol> 5. Procedimento de Teste <ol><li> Traga o mouse aclimatados em sua gaiola na sala de ensaio e colocar a gaiola em cima do balcão, a uma altura que seja confortável para visualização enquanto estiver sentado. </li><li> Apresente cada odor 3 vezes em uma fila para 2 min cada vez. Utilizar a ordem de apresentação que pode ser encontrada na Tabela 1. <ol><li> Pipetar 50 ul de odorante no perfume a ser testado para a ponta da mecha de algodão e volte a fechar a fonte de odor. Levante a parte superior da gaiola de arame e insira a extremidade sem cheiro, de madeira do swab na abertura da garrafa de água, empurrandog o comprimento através do lado de baixo do fio para o topo. Evite tocar a ponta de algodão para nada, incluindo dedos, de modo que a contaminação odor é evitado. </li><li> Continue a puxar o cotonete com a abertura da garrafa de água até cerca de 1 polegada do fim algodão trava para baixo na gaiola. Apor o fim da haste de madeira para o lado da gaiola usando fita laboratório. Nota: Tenha cuidado para não deixar a tampa cair de volta para a jaula, fazendo um ruído alto que iria perturbar o mouse teste. </li><li> Começar imediatamente temporização para 2 min. Use um temporizador para cronometrar o 2 min de apresentação. Grave o tempo acumulado gasto cheirando o odor durante 2 min julgamento. Contagem comportamento sniffing do animal usando um cronômetro separado. Sniffing ativo é definido quando o nariz do animal é orientada para a ponta de algodão com seu nariz ~ 2 centímetros ou mais perto da ponta. </li><li> Após a conclusão de cada julgamento, levantar a tampa do fio e retire o cotonete, puxando-a para baixo através da ONUderside da tampa (o que evita a contaminação de odores, impedindo que a ponta de algodão de tocar o fio). Selar o swab usado em uma garrafa de 500 ml de resíduos. </li><li> Preparar e inserir o próximo swab e começar a cronometragem. Permitir que cerca de 1 min entre cada intervalo inter-julgamento. Continue até que cada perfume tem sido apresentado três vezes seguidas, durante 2 minutos de cada vez. </li></ol></li><li> Uma vez que o rato tenha completado todos os ensaios, esvaziar o frasco de resíduos contendo as cotonetes utilizadas em uma lata de lixo do lado de fora da sala de teste. Devolver o mouse para sua gaiola. </li></ol> 6. Análise <ol><li> Analisar os dados para cada grupo por condição odor usando ANOVA two-way seguido por Newman-Keuls ou um teste similar post hoc para determinar habituação significativa (menos tempo farejando sucessivas mesmos cheiros), e dishabitutation (mais tempo farejando um novo cheiro). </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor-guided+behavior+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">Odor-guided behavior in mammals.</a> Experientia. 42, 257-271 (1986).</li>
<li>Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+views+on+the+distinct+but+related+roles+of+the+main+and+accessory+olfactory+systems+in+responsiveness+to+chemosensory+signals+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Horm+Behav%22%5BJournal%5D)">Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice.</a> Horm Behav. 46, 247-256 (2004).</li>
<li>Keverne, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+olfactory+and+vomeronasal+systems+for+male+sexual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Importance of olfactory and vomeronasal systems for male sexual function.</a> Physiol Behav. 83, 177-187 (2004).</li>
<li>Gregg, B., Thiessen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+olfactory+discrimination+of+urines+for+the+Mongolian+gerbil%2C+Meriones+unguiculatus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">A simple method of olfactory discrimination of urines for the Mongolian gerbil, Meriones unguiculatus.</a> Physiol Behav. 26, 1133-1136 (1981).</li>
<li>Yang, M., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+behavioral+assessment+of+mouse+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Simple behavioral assessment of mouse olfaction.</a> Curr Protoc Neurosci. Chapter 8 (Unit 8 24), (2009).</li>
<li>Pan, Y. W., Kuo, C. T., Storm, D. R., Xia, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+and+targeted+deletion+of+the+ERK5+MAP+kinase+in+adult+neurogenic+regions+impairs+adult+neurogenesis+in+the+olfactory+bulb+and+several+forms+of+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Inducible and targeted deletion of the ERK5 MAP kinase in adult neurogenic regions impairs adult neurogenesis in the olfactory bulb and several forms of olfactory behavior.</a> PLoS ONE. 7, e49622(2012).</li>
<li>Wesson, D. W., Levy, E., Nixon, R. A., Wilson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+dysfunction+correlates+with+amyloid-beta+burden+in+an+Alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Olfactory dysfunction correlates with amyloid-beta burden in an Alzheimer's disease mouse model.</a> J Neurosci. 30, 505-514 (2010).</li>
<li>Fadool, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+channel+gene-targeted+deletion+produces+%27Super-Smeller+Mice%27+with+altered+glomeruli%2C+interacting+scaffolding+proteins%2C+and+biophysics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 channel gene-targeted deletion produces 'Super-Smeller Mice' with altered glomeruli, interacting scaffolding proteins, and biophysics.</a> Neuron. 41, 389-404 (2004).</li>
<li>Arakawa, H., Arakawa, K., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scent+marking+behavior+in+male+C57BL%2F6J+mice%3A+sexual+and+developmental+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Scent marking behavior in male C57BL/6J mice: sexual and developmental determination.</a> Behav Brain Res. 182, 73-79 (2007).</li>
<li>Baum, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differentiation+of+pheromone+processing%3A+links+to+male-typical+mating+behavior+and+partner+preference%5BTitle%5D)+AND+%22Horm+Behav%22%5BJournal%5D)">Sexual differentiation of pheromone processing: links to male-typical mating behavior and partner preference.</a> Horm Behav. 55, 579-588 (2009).</li>
<li>Ferguson, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+amnesia+in+mice+lacking+the+oxytocin+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Social amnesia in mice lacking the oxytocin gene.</a> Nat Genet. 25, 284-288 (2000).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+sociability+in+BTBR+T%2Btf%2FJ+mice+is+independent+of+partner+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Low sociability in BTBR T+tf/J mice is independent of partner strain.</a> Physiol Behav. 107, 649-662 (2012).</li>
<li>Best, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-associative+learning+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Non-associative learning in larval zebrafish.</a> Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).</li>
<li>Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modulation+of+memory+formation+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2011).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nat Methods. 11, 629-632 (2014).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Os resultados apresentados neste artigo são ideais para camundongos. Os ratinhos demonstram uma forte resposta a um odor de novo, em seguida, rapidamente habituar. Um dos passos chave no presente método é a preparação dos odores. O investigador deve tomar muito cuidado para isolar os odores um do outro para evitar a contaminação. Outro aspecto importante é a apresentação do cotonete. O investigador precisa solucionar a melhor localização da ponta de algodão para que o rato pode investigar a ponta, mas não rasga na ponta...

Ratos são dependentes olfato para navegar novos ambientes, encontrar comida, para o reconhecimento de outras pessoas, e comportamento sexual 1-3. É essencial que os investigadores determinar se ou não os animais experimentais têm um sentido de cheiro funcionamento antes de administrar testes comportamentais que envolvem a comida, a interacção social, ou quaisquer odores destinados a induzir uma resposta a partir do ratinho. A anosmia ou a incapacidade de distinguir entre diferentes odores, poderia resultar em falsos positivos ou negativos em uma ampla variedade de paradigmas de comportamento, de modo a capacidade de um rato para detectar e distinguir os odores deve ser estabelecida antes de outros tipos de testes comportamentais são efectuadas. O teste de habituação / dishabituation olfativo foi descrita pela primeira vez na década de 1980 4. O ensaio foi adaptado para utilização em ratinhos pelos Drs. Mu Yang e Jacqueline Crawley 5. Este é um teste simples e barato, que permite ao investigador ESTABlish que um rato pode detectar e diferenciar entre odores. Além de testar olfacto, este teste permite ao investigador observar o comportamento geral do rato e deve ser feita no início de um regime de testes. Observações qualitativas sobre a locomoção do rato, sinais de ansiedade, nível de atividade, e resposta a odores sociais contra os odores dos alimentos pode sinalizar novas áreas em que os testes poderiam ser realizados. Neste teste, compressas de algodão embebido em vários odores são apresentados a um mouse três vezes em uma fileira. Com cada apresentação repetida de um odor, o rato vai habituar ao cotonete, gastando menos tempo investigando-o com cada apresentação subsequente. Quando um novo odor é apresentado, dishabituation ocorre, e um mouse típico vai gastar mais tempo a investigar o cotonete, indicando que ele pode discriminar entre os actuais e anteriores odores 5. Este teste é administrado a um rato de cada vez e inclui um 45 min acclimation período seguido de 45 minutos de teste. Embora este teste é fácil de transportar para fora, pode ser utilizado para investigar perguntas sofisticadas sobre o sistema olfactivo do rato. Outros testes populares de olfacto, tais como o teste de alimentos enterrado, simplesmente determinar a presença ou ausência de anosmia. No entanto, o teste de discriminação e habituação olfactiva permite ao investigador para determinar que um mouse não só tem a capacidade de detectar odores, mas pode discriminar entre diferentes odores. O padrão de habituação e dishabituation foi usado para estabelecer novos mutantes que podem discriminar entre os odores 6,7. Em um estudo surpreendente, Fadool e seus colegas usaram misturas complexas de odores para mostrar que os ratos com supressão segmentadas gene do canal Kv1.3 são &quot;super smellers&quot; que podem discriminar odores muito similares melhor do que ratos normais 8. Ao examinar um novo modelo de nocaute do mouse é útil Establish na presença de um comportamento normal para tarefas sensoriais básicos. Quando feito no início de um regime de testes, a discriminação odor e teste de habituação dá um investigador a oportunidade de observar quaisquer comportamentos incomuns. Estas observações podem evitar resultados falsos positivos ou negativos em testes posteriores que são atribuíveis ao confundindo características do mutante. Como os investigadores continuam a investigar o comportamento social a necessidade de verificar a função olfativa básico torna-se cada vez mais importante. Além de examinar o olfato em linhas mutantes, este teste pode ser usado para tratar de questões específicas, como se um tratamento farmacológico aumenta especificamente a resposta de um animal a estímulos odor sociais ou se os seus aumentos de resposta a todos os estímulos odor.

<table><tbody><tr><td>Gaiola de rato</td><td>Allentown</td> Gaiola <td></td><td>de rato padrão</td></tr><tr><td>Tampa de arame</td><td>Allentown</td><td>BCU Rato WBL 2500</td><td></td></tr><tr><td>Roupa de cama</td><td>Harlan</td><td>7090 Sani-Chips</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes</td><td>VWR</td><td>89031-270</td><td>Cabo de madeira de 6"</td></tr><tr><td>Extrato de banana</td><td>McCormick</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Extrato de amêndoa</td><td>McCormick</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fita de laboratório</td><td>VWR</td><td>89098-062</td><td></td></tr><tr><td>Cronômetro</td><td>VWR</td><td>62374-000</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de nitrilo</td><td>VWR</td><td>82026</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivo de cronometragem</td><td>VWR</td><td>61161-350</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 15 ml</td><td>VWR</td><td>89003-294</td><td></td></tr><tr><td>Copos de 2 L&nbsp;</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm</td><td>PM-992</td><td>4" x 250'</td></tr><tr><td>Frasco de 1 L com tampa</td><td>VWR</td><td>89000-240</td><td></td></tr></tbody></table>

testes para odor discriminação e habituação em ratos

 Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

Este vídeo demonstra uma técnica para estabelecer a presença de um sistema olfativo funcionando normalmente em um camundongo. O teste ajuda a determinar se o camundongo pode discriminar entre odores não sociais e odores sociais, se o camundongo se habitua a um odor apresentado repetidamente e se o camundongo demonstra deshabituação quando apresentado a um novo odor. Como muitos testes de comportamento social medem a resposta do animal experimental a um camundongo familiar ou novo, os falsos positivos podem ser evitados estabelecendo que os animais podem detectar e discriminar entre odores sociais. Existem considerações semelhantes em testes de aprendizagem, como o condicionamento do medo, que usa o odor para criar um novo ambiente ou pistas olfativas como estímulo associativo. Déficits no sistema olfativo prejudicariam a capacidade de distinguir entre contextos e formar uma associação com uma sugestão olfativa durante o condicionamento do medo. 
No teste de habitação/deshabituação de odores, o camundongo é repetidamente apresentado a vários odores. Cada odor é apresentado três vezes por dois minutos. O investigador registra o tempo de cheiração direcionado ao odor como a medida da capacidade de resposta olfativa. Um camundongo típico mostra uma diminuição na resposta ao odor ao longo de apresentações repetidas (habituação). O experimentador então apresenta um novo odor que provoca um aumento do cheiro em direção ao novo odor (deshabituação). Após repetidas apresentações do novo odor, o animal novamente mostra habituação. Este protocolo envolve a apresentação de água, dois ou mais odores não sociais e dois odores sociais. Além de reduzir os fatores de confusão experimentais, este teste pode fornecer informações sobre a função dos sistemas olfativos de novas linhagens de camundongos knockout, knock-in e knockout condicional.

Seguindo o protocolo descrito, os resultados foram registados utilizando dez adultos (dia pós-natal 90-120) ratos machos C57BL / 6J e oito macho estirpe FVB mista-fundo (dia pós-natal 50-70). O teste foi realizado por um único investigador ao longo de vários dias. Cada ponto nos gráficos representa a média de tempo gasto a investigar um odor. Quando o cotonete embebido em água é introduzido pela primeira vez, os ratos gastar uma grande quantidade de tempo a investigar este romance objeto <st...

Este manuscrito descreve um protocolo para examinar o sistema olfativo de roedores. O teste de habituação/deshabituação olfativa permitirá que os investigadores determinem se um camundongo se habitua a um odor apresentado repetidamente e se o camundongo demonstra deshabituação quando apresentado a um novo odor.

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

O objetivo geral deste procedimento é fornecer um método para investigar a capacidade de camundongos detectar, habituar e desabituar-se a odores tanto novos quanto sociais. Isso é realizado primeiramente preparando uma série de odores novos não sociais, como extratos à base de frutas e nozes, e odores sociais, como cama de gaiola. O segundo passo é apresentar os odores aos camundongos, começando com três odores novos e seguidos por dois odores sociais diferentes.Em cada ensaio, o comportamento de farejamento dos camundongos é avaliado e registrado. Em última análise, o teste de olfação para discriminação e habituação é utilizado para demonstrar que o animal é capaz de responder a um odor novo, pode habituar-se ao odor e, em seguida, demonstrar a capacidade de desabituar-se ao odor quando exposto a outro odor novo ou odor social. Este método pode ser usado para responder perguntas fundamentais na área de neurociência, como se o animal não está respondendo a um animal novo ou estímulo novo porque é incapaz de detectar o odor.Comece a preparar os odores não sociais colocando luvas e preenchendo três tubos cónicos de 15 mililitros com 10 mililitros de água. Adicione com pipeta 100 microlitros de extrato de amêndoa no primeiro tubo, 100 microlitros de extrato de banana no segundo tubo e deixe o terceiro tubo apenas com água para ser usado como controle. Em seguida, obtenha duas gaiolas diferentes de camundongos que não tenham sido limpas há pelo menos três dias e que contenham números iguais de camundongos do mesmo sexo dos animais de teste.Use um cotonete para limpar a parte inferior da gaiola suja em movimentos zigue-zague. Agite qualquer material de forração aderido ao cotonete e coloque-o com a ponta voltada para baixo em um pote de vidro grande com tampa bem ajustada. Repita este processo até obter três cotonetes de ambas as gaiolas para cada camundongo que será testado.Guarde os frascos à temperatura ambiente e utilize os swabs dentro de quatro a seis horas. Para manter um odor forte e consistente, mova as gaiolas com as amostras de odor para uma sala fora da área de teste no dia do experimento. Não use fragrâncias ou loções perfumadas e evite comer qualquer alimento com odor forte.Coloque os odores sociais e não sociais preparados na sala de testes, juntamente com algodão em bastão novo, fita laboratorial, um frasco para resíduos com tampa e dois cronômetros imediatamente antes do procedimento de teste. Coloque luvas limpas e pese o primeiro camundongo. Em seguida, transfira o camundongo para uma gaiola limpa com tampa de arame e sem garrafa d'água.Coloque a gaiola em uma área sem odores ou ruídos incomuns e permita que o camundongo se acostume com a nova gaiola por 45 minutos. Ao final do período de aclimatação, leve o camundongo em sua gaiola para a área de teste e comece a aclimatar outro camundongo. Coloque o camundongo aclimatado em sua gaiola sobre a bancada em uma altura confortável para visualização quando sentado.Em seguida, prepare um dos odores na ordem descrita no protocolo textual para os odores não sociais, aplicando 100 microlitros do aroma na ponta de um cotonete novo. Imediatamente antes do uso. Para os odores sociais, retire e utilize um dos cotonetes previamente preparados de seus respectivos frascos.Levante a tampa de arame da gaiola e insira a extremidade sem cheiro do cotonete na abertura da garrafa d'água pelo lado inferior da tampa de arame. Evite tocar a ponta de algodão em qualquer superfície, incluindo os dedos, para evitar contaminação por odores. Quando restar cerca de uma polegada do cotonete com cheiro dentro da gaiola, fixe a extremidade de madeira do cotonete no lado inferior da gaiola usando fita laboratorial.Em seguida, abaixe suavemente a tampa de volta sobre a gaiola. Para evitar perturbar o camundongo experimental, comece imediatamente a cronometrar dois minutos. Usando o primeiro cronômetro e o segundo relógio, registre o tempo acumulado que o camundongo experimental passa cheirando o odor.A cheirada ativa é definida como o posicionamento do nariz do camundongo em direção ao cotonete quando este está a uma distância de até dois centímetros do cotonete. Quando o ensaio terminar, levante a tampa de arame e remova cuidadosamente o cotonete puxando-o para baixo através da parte inferior da tampa. Para evitar o contato da tampa com a extremidade do cotonete que contém o odor, feche o cotonete usado no frasco de resíduos enquanto o camundongo descansa por um minuto, e prepare o próximo cotonete doador.Apresente cada odorante três vezes seguidas durante dois minutos. Quando todos os ensaios forem concluídos, esvazie o frasco de resíduos contendo os cotonetes usados em uma lixeira fora da sala de teste e devolva o camundongo à sua gaiola de origem. Cada um dos odorantes foi primeiramente apresentado a camundongos com fundo genético C 57 black six J, com apresentações sucessivas de cada odor. Os camundongos passaram menos tempo investigando o odor que sugeria habitação. O mesmo padrão de habitação e discriminação pode ser observado com os odores sociais, assim como com os odores não sociais. No entanto, os camundongos passaram mais tempo investigando os odores sociais.Quando os mesmos odores não sociais foram apresentados a um macho da linhagem de fundo misto FVB, observou-se um padrão semelhante de habituação. Cada novo odor introduzido foi recebido com um aumento na fungação ativa, que diminuiu com cada apresentação do mesmo odor. No entanto, os camundongos FVB mostraram um padrão diferente com os odores sociais, pois não houve diminuição significativa no tempo gasto fungando com a exposição repetida.Os dados sugerem que os camundongos não habituam a apresentações repetidas dos dois odores sociais. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como testar a capacidade de um camundongo detectar um odor novo ou social, habituar-se a esse odor e, em seguida, deshabituar-se a esse odor quando apresentado um odor novo.

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Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Fundamentais, ainda propriedades únicas do sistema olfativo dos roedores, levaram ao seu estudo crescente entre os biólogos. A avaliação relativamente simples de sua função é, então, também é necessário. Aqui nós descrevemos testes sensíveis para a caracterização da sensibilidade olfativa do mouse e preferência.

Teste Comportamental olfativo no rato adulto

O comprometimento da função olfativa é uma característica comum em muitos distúrbios neurodegenerativos, incluindo as doenças de Parkinson, Alzheimer e Huntington. No presente artigo, descrevemos um conjunto de testes para avaliar a discriminação e detecção de olfato em camundongos que podem ser usados para medir as habilidades olfativas em modelos de camundongos de doenças neurodegenerativas.

Ensaios olfativas para o Rato modelos de doenças neurodegenerativas

Apresentamos um teste olfativo simples e imparcial em camundongos. Com este protocolo, a discriminação olfativa, a preferência, a evitação e a sensibilidade a um novo odor em comparação com a água podem ser avaliadas em sessões comportamentais únicas. Este método é indicado para um único experimentador e a análise é baseada no processamento de vídeo assistido por computador.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Anormalidades cognitivas que mudam de atenção são uma característica central de muitas doenças psiquiátricas. Aqui, apresentamos o desenvolvimento de um novo sistema automático para o estudo efetivo das habilidades de mudança de atenção, funções executivas e outras habilidades cognitivas em camundongos com alta validade translacional para estudos humanos.

Um operante intra / extra-dimensional Set-shift-Tarefa para ratos

Aqui, treinamos os ratos em uma tarefa de aprendizagem associativa para testar a discriminação do odor. Este protocolo permite também para estudos sobre aprendizagem-induzido mudanças estruturais no cérebro.

Uma objetiva e reproduzível teste de aprendizagem olfactiva e discriminação em ratos

Este artigo fornece uma descrição detalhada de um novo protocolo de viés de julgamento do mouse. Evidências da sensibilidade dessa tarefa olfativa de escavação ao estado afetivo também são demonstradas e sua utilidade em diversos campos de pesquisa é discutida.

Avaliação do viés de julgamento do rato através de uma tarefa de escavação olfativa

Este artigo fornece uma descrição detalhada do teste de alimentos enterrados e do experimento de discriminação de odor social para avaliar os efeitos da exposição a poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos.

Estudando os efeitos de poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos

Este protocolo descreve a construção de um olfatômetro para experimentos de comportamento olfativo go/no-go. Instruções passo a passo, juntamente com imagens, são fornecidas para garantir a construção bem-sucedida do olfatômetro. Informações para solucionar problemas encontrados durante o processo também estão incluídas.

Construindo um olfatômetro para estudos de comportamento olfativo de roedores

Aqui, apresentamos um protocolo de teste de preferência olfativa que permite a avaliação de vieses olfativos negativos em relação a estímulos de odor apetitivos e aversivos em modelos de depressão em camundongos.

Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

Este artigo apresenta um protocolo para um teste de condicionamento do medo contextual e cued usando um sistema de vídeo de análise para avaliar o medo de aprendizagem e memória em camundongos.

Contextual e Cued Medo Condicionado Teste Usando um sistema de análise de vídeo em Ratos

Aprenda a avaliar a função olfatória em camundongos usando o teste de habituação/deshabitação a odores. Este método detecta discriminação entre odores sociais e não sociais, essencial para estudos comportamentais em neurociência.

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

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