Name: O cateterismo cardíaco em camundongos para medir o volume Pressão do relacionamento: Investigando o efeito Bowditch (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Aprenda a medir a contratilidade cardíaca in vivo em camundongos por meio de cateterismo e análise pressão/volume em diferentes frequências cardíacas. Este método permite investigar o efeito Bowditch.

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Este estudo foi apoiado por bolsas do NIH HL091986 (JPD) e HL094692 (MTZ).

NOTA: Este protocolo animal foi aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso do animal Institucional (IACUC) no The Ohio State University. Este procedimento pode ser usado em qualquer rato em que o diâmetro interno da artéria carótida é grande o suficiente para inserir o cateter. Use ratos que estão acima de 16 g (com mais de ~ 2 meses). 1. Preparação do rato por cateterismo <ol><li> Vede todas instrumentos cirúrgicos e materiais em uma bolsa de esterilização. Esterilizar a bolsa em uma máquina autoclave. Manter um campo estéril durante todo o procedimento e usar luvas estéreis. </li><li> Anestesiar ratos com cetamina (55 mg / kg), além de xilazina (15 mg / kg) por injecção intraperitoneal. NOTA: Todo o procedimento de medição tanto a pressão / volume em diversas freqüências cardíacas e ESPRV leva menos de 20 min. Se for necessário um tempo adicional (ou seja, mais de 30 min), ¼ dar uma dose adicional de anestesia a cada 30 min. </li><li> Remova o cabelo no r anterioregion de pescoço e peito área usando o cabelo removendo loção (por exemplo, Nair) e cole os membros do mouse sobre a plataforma de espuma. Confirme o estado de anestesia profunda por uma pitada dedo do pé. </li><li> Insira uma sonda rectal para monitorizar a temperatura do corpo (37 ± 1 ° C), e manter usando uma almofada de aquecimento regulada-termo (localizado entre a cobertura cirúrgica e plataforma). </li><li> Prepara-se uma duração de 4-0 (~ 10 cm). Laço de sutura em torno dos incisivos superiores e fita para plataforma. Isto irá manter a linha reta pescoço. </li><li> Esterilizar a área cirúrgica esfregando a área com Betadine e álcool 75% três vezes. </li></ol> 2. Cateterismo <ol><li> Prepara-se o cateter pelo presoaking a ponta em solução salina ou água destilada (37 ° C) durante pelo menos 30 min antes da utilização (de acordo com as instruções do fabricante) para aclimatar o diafragma sensor de pressão para o ambiente biológico húmido e impedir a dispersão do sinal de pressão e negativo registos de pressão. </li><li> Adicione uma incisão longitudinal 0,8 centímetros entre a mandíbula inferior e esterno na região anterior do pescoço. Com as tesouras finas, separar o tecido conjuntivo da pele-muscular para expor a traqueia localizado sob o músculo stemohyoideus. </li><li> Separou-se a gordura e tecido muscular no lado direito da traqueia com uma pinça curvos para expor a artéria carótida direita. NOTA: A artéria carótida é a maior artéria na região anterior do pescoço, contém sangue vermelho brilhante, e é pulsátil. Não confundir com a veia jugular que corre paralela à artéria carótida. A veia jugular é vermelho escuro e não pulsátil. Além disso, durante o isolamento da artéria carótida, o usuário deve estar ciente de não danificar o nervo pneumogastric. </li><li> Remover a gordura a partir da artéria carótida direita com as pinças curvas. Se existe ramificação do vaso que vai impedir esta técnica operacional, cortá-los com um cautério Bovie dissociar a artéria carótida.Separe o máximo de tecido possível, sob a artéria carótida usando uma pinça curva. </li><li> Corte dois cinco centímetros 6-0 fios de seda. Passe cada fio de seda sob a artéria carótida direita. </li><li> Posição um segmento perto da parte proximal eo outro perto da parte distal da artéria. Faça um nó apertado na rosca na parte distal, e fazer um nó frouxo na linha na parte proximal. </li><li> Bloquear o fluxo de sangue por aperto a parte proximal da artéria usando uma pinça vascular pequena pinça hemostática (colocar a braçadeira abaixo o segmento proximal). A região selada da artéria vai ser enchido com sangue, tornando mais fácil executar o passo 2.8. </li><li> Perfurar um pequeno buraco na artéria carótida direita entre os dois tópicos (mas mais perto do segmento distal) com uma agulha de 26 G. Inserir o cateter na artéria carótida. Aperte ligeiramente o nó frouxo na parte proximal da artéria carótida para o cateter para manter no lugar. NOTA: Usando a punção com agulha é preferido em relaçãoa tesoura incisão. Ao fazer um nó apertado na parte distal da artéria em primeiro lugar, e depois de prender a parte proximal, artéria vai ser totalmente cheio com sangue. Isto torna muito fácil para picar através do vaso sanguíneo. Além disso, o tamanho da agulha (26 L) perfura a artéria com um furo que se adapta muito bem ao tamanho do cateter. Quando se utiliza o método de incisão tesoura, que era mais difícil de controlar o tamanho da incisão. No entanto, o método escolhido deve ser dependente de qual o cirurgião sente-se mais confortável. </li><li> Comece a gravar sinais de pressão como no passo 3. </li><li> Solte a braçadeira pinça hemostática e continuar a inserção do cateter para dentro do ventrículo esquerdo. Se alguma resistência é experiente quando o avanço do cateter, puxe-o suavemente para trás e tentar avançar novamente. Para um rato pesando 18-25 g ~, o comprimento estimado do cateter que é inserido é de 18 mm. NOTA: O sinal de pressão arterial irá flutuar 70-120 mm Hg. Uma vez que tele é cateter no ventrículo esquerdo a forma do sinal muda de pressão e a pressão irá variar de 0 a 120 mm de Hg (mostrado na Figura 1). A função do coração vai se estabilizar dentro de 2-3 min após a inserção do cateter. </li><li> Monitorar continuamente a temperatura corporal, nível de anestesia, e taxa de respiração. </li></ol> 3. Aquisição de Dados <ol><li> Use software LabChartPro 7 (ou software similar). Use a opção de WorkFlow do LabChart Módulo PV loop. Usando este módulo, selecione a configuração padrão de pressão e volume Loops. </li><li> Set-up de três canais: um canal de pressão, um canal para o volume, e um canal para a freqüência cardíaca. Definir intervalos de escala de parâmetros acima como 0-150 mm Hg, 0-100 0-800 ul e batida / min, respectivamente. </li><li> Pressione a tecla Iniciar para gravar. </li></ol> 4. Efeito Bowditch <ol><li> Fazer uma incisão de 1 cm na área precórdio paralelo ao manubrium. Corte a camada de músculo e expose o espaço intercostal com uma tesoura. </li><li> Usando um estimulador pulso quadrado, definir os seguintes parâmetros: Tensão de 2 V, duração de 2 ms, e ativar o modo de repetição. </li><li> Segurar o eléctrodo negativo com uma pinça e inseri-la através do quarto espaço intercostal para a região apical do coração. Segurar o eléctrodo positivo com uma pinça e inseri-la através do segundo espaço intercostal para a região do átrio direito do coração. </li><li> Ligue o estimulador e mudar a freqüência para estimular o coração a partir de 4 Hz (240 batimentos / min) até 10 Hz (600 batimentos / min). A cada nova freqüência cardíaca, estimular o coração para 1 min antes da coleta de dados. </li></ol> 5. Gerando o ESPVR e PRSW <ol><li> Cortar a pele e o tecido muscular perpendicular ao manubrium na região abdominal com uma tesoura. Abra o enterocoelia e expor o fígado. </li><li> Arraste o costarum Arcus para a cabeça usando tração metálico. </li><li> Com cuidado, empurre para baixo com o fígadoum cotonete. Tenha cuidado para não empurrar demais para afetar a cavidade torácica. Isso vai mudar a função do coração. </li><li> Cortar o ligamento falciforme do fígado com uma tesoura para expor a veia cava inferior suprahepática (IVC). </li><li> Use pinças curvas para apertar rapidamente da VCI durante 5 segundos para bloquear o retorno do sangue para o átrio direito. A pressão ventricular esquerda e volume irá cair devido à entrada reduzida para o coração. Em gerar esses valores, não use loops de abaixo de 60 mm Hg. A 60 mm Hg é em referência a pressão sistólica. NOTA: Esse valor é fixado em 60 mm Hg, porque isso irá causar uma queda significativa na pressão de perfusão para diminuir consideravelmente a perfusão coronária e afetar a contratilidade. </li></ol> 6. Volume Calibration <ol><li> Heparinizar o rato com 0,1 ml de 1: 5,000 solução de heparina (diluído com solução salina normal) por injecção intraperitoneal. </li><li> Remover o cateter da artéria carótida. Quando o cateter é retirado from a artéria carótida, sangue heparinizado vai escoar do buraco onde o cateter foi inserido. </li><li> Recolha este sangue para calibragem de volume usando uma seringa de 1 ml. Encher cada poço na cuvete de calibração. </li><li> Remover coração para sacrificá o mouse via sangria. </li><li> Posicione o cateter em cada poço e obter um valor estável unidade de volume relativo (RVU). Gerar uma curva padrão, utilizando os vários volumes padrão e valores RVU de cada poço. </li><li> Converter o RVU gravadas ul. </li></ol> 7. Processamento de Dados <ol><li> Para examinar o efeito Bowditch, selecione no estado estacionário vestígios pressão / volume de cada frequência cardíaca. Clique na análise de base para obter dados. </li><li> Para dados ESPVR e PRSW, selecione os primeiros vestígios ~ 15 pressão / volume, clique em análise de oclusão no software para gerar o ESPVR (inclinação da pressão desenvolvida pela LV no volume diastólico final) e PRSW (a regressão linear de trabalho sistólico com o fim-diastólicavolume) pistas. </li><li> Submeter a atenção para a forma dos laços. Verifique se o circuito é fechado sem pontos angulares ou torções. Este é um sinal de colocação do cateter imprópria ou excesso de ruído. Verifique periodicamente laços durante a experiência para garantir que os dados de pressão e volume adequados estão sendo gerados. </li></ol>

<ol><li>Janssen, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+contraction-relaxation+coupling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Myocardial contraction-relaxation coupling.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 299, H1741-H1749 (2010).</li>
<li>Roman, M. J., Devereux, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+noninvasive+measures+of+contractility+in+dilated+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Comparison of noninvasive measures of contractility in dilated cardiomyopathy.</a> Echocardiography. 8, 139-150 (1991).</li>
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<li>Kass, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+influence+of+load+versus+inotropic+states+on+indexes+of+ventricular+contractility%3A+experimental+and+theoretical+analysis+based+on+pressure-volume+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Comparative influence of load versus inotropic states on indexes of ventricular contractility: experimental and theoretical analysis based on pressure-volume relationships.</a> Circulation. 76, 1422-1436 (1987).</li>
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<li>Barouch, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+regulates+the+heart+by+spatial+confinement+of+nitric+oxide+synthase+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide regulates the heart by spatial confinement of nitric oxide synthase isoforms.</a> Nature. 416, 337-339 (2002).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+nitric+oxide+synthase+signaling+within+cardiac+myocytes+targets+phospholamban%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal nitric oxide synthase signaling within cardiac myocytes targets phospholamban.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 294, C1566-C1575 (2008).</li>
<li>Georgakopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+murine+left+ventricular+pressure-volume+relations+by+miniaturized+conductance+micromanometry%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">In vivo murine left ventricular pressure-volume relations by miniaturized conductance micromanometry.</a> Am J Physiol. 274, H1416-H1422 (1998).</li>
</ol>

Não há interesses financeiros concorrentes.

Um passo crítico para esta técnica para obter uma medida confiável da contratilidade é a colocação do cateter adequado para a LV. Se o cateter não é colocado corretamente, quando o LV contrai as paredes podem entrar em contato com o cateter, resultando em valores muito elevados, e não fisiológico, causando pressão laços PV de forma irregular. Se necessário, o cateter pode ser girada para realizar o posicionamento correcto. Outro passo chave para esta técnica é certificar-se o mouse receberam anestesia adequada. Se o mou...

A finalidade do coração de bombear o sangue é todo o corpo para satisfazer as necessidades metabólicas do organismo. Uma vez que estas exigências são constantemente flutuante (por exemplo, durante o exercício), o coração tem de se adaptar (ou seja, aumentar o débito cardíaco). O coração criou numerosas vias para realizar esta façanha. A maneira privilegiada no coração consegue isso é através de um aumento da freqüência cardíaca (isto é, efeito Bowditch) 1. Isto é, como um aumento da frequência cardíaca, isso resulta em um aumento da contractilidade e um aumento do débito cardíaco. Assim, a função do coração é extremamente dependente da freqüência cardíaca. Infelizmente, a doença de coração (por exemplo, enfarte do miocárdio, hipertrofia, etc) resulta no mau funcionamento do coração em que o coração não será, consequentemente, capaz de satisfazer as necessidades metabólicas do corpo. A doença cardíaca é a principal causa de morbidade e mortalidade na sociedade ocidental. Os modelos animais que recapitulam muitos cardiomy humanoopathies são utilizados para investigar os mecanismos moleculares e para testar terapias potenciais. Para discernir esses mecanismos e determinar se a terapia pode ser viável, os investigadores devem avaliar a função cardíaca in vivo. Existem várias maneiras de avaliar a função cardíaca in vivo (por exemplo, o ecocardiograma, ressonância magnética, etc.), que rotineiramente medir a fração de ejeção, fração de encurtamento, o débito cardíaco, etc. No entanto, estes parâmetros são altamente dependentes de pós-carga, pré-carga e freqüência cardíaca Além disso a contractilidade 2. Medindo contratilidade é indispensável para compreender as propriedades intrínsecas do coração em seu ambiente nativo. A taxa máxima (dP / dt max) de desenvolvimento de pressão nos leva um passo mais perto de compreender a contratilidade. Infelizmente, dP / dt é também dependente da frequência cardíaca e condições de carga 3. Por isso foram desenvolvidas técnicas para medir a carga (e frequência cardíaca, consulte below) índices independentes de contratilidade do miocárdio (ou seja, o volume sistólico final relação de pressão (ESPVR) e pré-carga recrutável trabalho acidente vascular cerebral (PRSW)) 4-6. ESPVR descreve a pressão máxima que pode ser desenvolvida pelo ventrículo em qualquer dado volume do VE. A inclinação da ESPVR representa a elastância sistólica final (EEE). PRSW é a regressão linear de trabalho acidente vascular cerebral (área fechada pelo laço PV) com o volume diastólica final. Estes procedimentos são uma medida mais exata e precisa da contratilidade em comparação com parâmetros hemodinâmicos tais como fração de ejeção, débito cardíaco e volume sistólico. ESPVR PRSW e pode ser obtido através do bloqueio temporário da veia cava inferior (IVC). O bloqueio da VCI pode ser realizada com uma caixa fechada para evitar o efeito da alteração da pressão intrapleural sobre a função cardíaca. O aumento da freqüência cardíaca também aumenta a contração e relaxamento 1. Assim, quando se compara a função cardíaca entre experimentaOs grupos L (por exemplo, ± dP / dt), as frequências cardíacas precisa ser semelhante. No entanto, as taxas similares do coração normalmente não ocorrem em cada animal devido a várias condições (doença, intervenção investigação, etc.). Deve notar-se que a anestesia (injectável e inalado) diminui a frequência cardíaca. Como a frequência cardíaca é um dos principais determinantes da contratilidade, a anestesia irá afectar consideravelmente a contratilidade. Por esta razão, nós descrevemos o nosso procedimento. Além disso, uma característica de muitas cardiomiopatias é uma diminuição da reserva contrátil (isto é, um efeito de diminuição da Bowditch). Por conseguinte, a função cardíaca deve ser medida ao longo de uma gama de frequências cardíacas. Aqui nós descrevemos como usar um estimulador (com uma caixa fechada) para conseguir estes efeitos. Além disso a frequência cardíaca, o óxido nítrico (NO) é também um importante modulador da contractilidade 7. O NO é produzido por meio de enzimas denominadas NO sintase (NOS). Nós e outros mostraram que camundongos com nocaute de neuronal NOS (NOS1 <sup&gt; - / - contração dos miócitos) ter anulado e in vivo hemodinâmica cardíaca 8,9. Este rato irá ser utilizado para demonstrar a medição da contractilidade do ventrículo esquerdo via o procedimento de análise de pressão LV / volume realizada em várias frequências cardíacas.

<table><tbody><tr><td>Xlyzine 100&nbsp; mg/ml</td><td>Ana Sed</td><td>4821</td><td></td></tr><tr><td>Katamin 50&nbsp; mg/ml</td><td>Ketalar</td><td>310006</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>6003922</td><td></td></tr><tr><td>4-0 fio de seda</td><td>Especialidades cirúrgicas</td><td>SP102</td><td></td></tr><tr><td>6-0 fio de seda</td><td>Especialidades cirúrgicas</td><td>MBKF270</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de Curva</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Tesouras</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Braçadeira vascular</td><td>Fine Science Tools</td><td>18555-03</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Instrumentos de precisão mundial</td><td>PZM-3</td><td></td></tr><tr><td>Cateter de pressão</td><td>Instrumentos Millar</td><td>SPR-839</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de pressão e volume</td><td>Instrumentos Millar</td><td>MPVS-300</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab4/35</td><td>Instrumentos AD</td><td>N12128</td><td></td></tr><tr><td>LabchartPro 7</td><td>instrumentos</td><td></td><td></td>AD</tr><tr><td>Controlador de temperatura</td><td>CWE</td><td>TC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Estimulador</td><td>Grama</td><td>SD-5</td><td></td></tr><tr><td>Luva estéril</td><td>Micro-Touch</td><td>1305018821</td><td></td></tr><tr><td>Loção removedora de pêlos</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine esfoliação cirúrgica</td><td>Veterinário</td><td>NDC 6761815401</td><td></td></tr><tr><td>Álcool</td><td>Decon Laboratories</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>Bovie cautery</td><td>Bovie</td><td>AA29</td><td></td></tr><tr><td>1&nbsp; ml Seringa (26&nbsp; Agulha G)</td> <td>BD</td><td>8017299</td><td></td></tr></tbody></table>

o cateterismo cardíaco em camundongos para medir o volume pressão do relacionamento: investigando o efeito bowditch

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Os modelos animais que imitam desordens cardíacas humanas foram criadas para testar potenciais estratégias terapêuticas. Um componente-chave para avaliar estas estratégias é examinar os seus efeitos sobre a função cardíaca. Existem várias técnicas para medir em mecânica vivo cardíacos (por exemplo, ecocardiografia, relações pressão / volume, etc.). Em comparação com a ecocardiografia, ventricular em tempo real à esquerda (LV) Pressão / análise de volume através de cateterismo é mais precisa e perspicaz na avaliação da função do VE. Além disso, a análise do VE pressão / volume fornece a capacidade de gravar instantaneamente alterações durante as manipulações de contractilidade (por exemplo, estimulação β-adrenérgico) e insultos patológicos (por exemplo, isquemia / reperfusão). Para além da máxima (+ dP / dt) e mínimo (-dP / dt) taxa de variação de pressão no VE, uma avaliação precisa da função ventricular esquerda através de vários índices independentes de carga (por exemplo, a pressão sistólica finalrelação volume e pré-carga de trabalho do curso recrutável) pode ser alcançado. A frequência cardíaca tem um efeito significativo na contractilidade do VE de tal modo que um aumento no ritmo cardíaco é o principal mecanismo para aumentar o débito cardíaco (isto é, efeito Bowditch). Assim, quando se comparam hemodinâmica entre os grupos experimentais, é necessário dispor de frequências cardíacas semelhantes. Além disso, uma característica de muitos modelos de cardiomiopatia é uma diminuição da reserva contrátil (isto é, uma diminuição do efeito Bowditch). Consequentemente, a informação vital pode ser obtida através da determinação dos efeitos de aumento da frequência cardíaca na contractilidade. Os nossos dados e outros tem demonstrado que o óxido nítrico sintase neuronal (NOS1) rato de abate diminuiu contractilidade. Aqui nós descrevemos o procedimento de medição de pressão LV / volume com o aumento da freqüência cardíaca, utilizando o modelo knockout rato NOS1.

A inserção correcta do cateter no interior do ventrículo esquerdo é um passo importante para atingir os valores de pressão e de volume apropriados. Mostrado na Figura 1, usando LabChart Pro 7, representa a mudança da forma de onda de pressão (forma e valores) como o cateter da artéria vai para o ventrículo. Após a inserção correcta do cateter no ventrículo esquerdo, a pressão (P) e o volume (V) Os valores obtidos, em seguida, ser utilizada para gerar os loops PV (mostrado na...

Este artigo descreve a medição da função ventricular esquerda murina por meio da análise de pressão/volume em diferentes frequências cardíacas.

O cateterismo cardíaco em camundongos para medir o volume Pressão do relacionamento: Investigando o efeito Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

O objetivo geral deste procedimento é medir a contratilidade cardíaca in vivo em diferentes frequências cardíacas. Isso é realizado primeiramente preparando o camundongo para cateterização. Em seguida, um cateter é inserido no ventrículo esquerdo através da artéria carótida.Em seguida, um estimulador é conectado ao coração do camundongo e este é estimulado em diferentes frequências cardíacas, enquanto os dados são registrados. Por fim, o sangue é coletado no local da inserção do cateter e o volume é calibrado. Em última instância, a análise de laços de pressão-volume é utilizada para investigar o efeito BO.A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como o ecocardiograma, é que a pressão e o volume, um tamanho LI é uma medição mais processual e precisa da contração e, portanto, uma técnica mais informativa para medir a função cardíaca. Após preparar o camundongo para cateterização, de acordo com o protocolo descrito no texto, na região anterior do pescoço, faça uma incisão longitudinal de 0,8 centímetro entre a mandíbula inferior e o esterno com uma tesoura fina. Separe o tecido conjuntivo muscular da pele para expor a traqueia localizada sob o músculo esternocleidomastoideo.Em seguida, utilize pin&ccedil;as curvas ao longo do lado direito da traqueia para separar a gordura e o tecido muscular, expondo a art&eacute;ria car&oacute;tida direita. A seguir, remova a gordura da art&eacute;ria car&oacute;tida. Depois, se houver ramos presentes no vaso, utilize uma bisturi el&eacute;trico Bovie para cort&aacute;-los e dissociar a art&eacute;ria car&oacute;tida.Use a pin&ccedil;a curva para separar o m&aacute;ximo poss&iacute;vel do tecido sob a art&eacute;ria car&oacute;tida. Agora corte dois fios de seda seis zero com cinco cent&iacute;metros de comprimento e passe cada um deles sob a posi&ccedil;&atilde;o da art&eacute;ria car&oacute;tida. Um fio pr&oacute;ximo &agrave; parte proximal e o outro pr&oacute;ximo &agrave; parte distal da art&eacute;ria.Faça um nó firme na extremidade distal do fio e um nó solto na extremidade proximal. Usando um pequeno grampo vascular hemostático, bloqueie o fluxo sanguíneo prendendo a parte proximal da artéria. A região selada da artéria se encherá de sangue.Em seguida, com uma agulha de calibre 26, perfure um pequeno orifício na artéria carótida direita entre os dois fios e insira o cateter na artéria carótida. Aperte levemente o nó solto na parte proximal da artéria carótida sobre o cateter para mantê-lo no lugar. Seguindo as orientações do protocolo descrito no texto, inicie o registro dos sinais de pressão.Em seguida, solte a pinça hemostática e continue inserindo o cateter para frente, dentro do ventrículo esquerdo. Se for sentida resistência, puxe suavemente o cateter para trás e tente avançá-lo novamente. O cateter será inserido aproximadamente 18 milímetros em um camundongo de 18 a 25 gramas.Monitore continuamente a temperatura corporal, o nível de anestesia e a frequência respiratória. Para medir o efeito b&oacute;ico, fa&ccedil;a uma incis&atilde;o de um cent&iacute;metro na &aacute;rea precordial paralela ao man&uacute;brio utilizando tesoura. Corte a camada muscular e exponha o espa&ccedil;o intercostal.Usando um simulador de pulso quadrado, defina os seguintes parâmetros: tensão de dois volts, duração de dois milissegundos e ative o modo de repetição com pinça. Segure o eletrodo negativo e insira-o através do quarto espaço intercostal até a região apical do coração. Usando uma pinça para segurar o eletrodo positivo, insira-o através do segundo espaço intercostal até o átrio direito, região do coração.Ligue o estimulador e altere a frequência para estimular o coração de quatro hertz até 10 hertz. Em cada nova frequência cardíaca, estimule o coração antes da coleta de dados; usando tesoura, corte a pele e o tecido muscular perpendicularmente ao manúbrio na região abdominal. Abra o entero CLIA e exponha o fígado com tração metálica.Arraste o acus caster em direção à cabeça. Agora, usando um cotonete, empurre suavemente o fígado para baixo, tomando cuidado para não afetar a cavidade torácica, o que alteraria a função cardíaca. Use tesoura para cortar o ligamento falciforme do fígado e expor a veia cava inferior supra-hepática ou VCI com pinça curva.Aperte rapidamente a VCI por cinco segundos para bloquear o retorno do sangue ao átrio direito; a pressão e o volume ventriculares esquerdos diminuirão devido à redução do fluxo sanguíneo para o coração art. Para calibrar o volume por injeção intraperitoneal, heparinize o camundongo com 0,1 mililitros de uma solução de heparina na proporção de 1 para 5.000. Remova o cateter da artéria carótida.O sangue heparinizado começará a vazar pelo orifício onde o cateter foi inserido. Usando uma seringa de um mililitro, colete esse sangue para calibração de volume. Encha cada poço em um vete de calibração.Após eutanasiar o camundongo de acordo com o protocolo descrito, posicione o cateter e obtenha um valor estável de unidade de volume relativo ou RVU. Utilize os diversos volumes padrão e valores de RVU de cada poço para gerar uma curva padrão. Conforme mostrado nesta figura, a forma da onda de pressão muda em formato e valor à medida que o cateter inserido avança da artéria para o ventrículo.Após a correta inserção do cateter no ventrículo esquerdo, as pressões p e volumes V obtidos são utilizados para gerar os laços PV, como visto aqui, utilizando os mecanismos de valores de pressão que alteram a contratilidade, os quais podem ser investigados. Neste exemplo, o aumento da frequência cardíaca de 300 para 600 batimentos por minuto elevou a pressão do VE de 80 para 100 milímetros de mercúrio, enquanto os volumes diastólico e sistólico do VE diminuíram. Ilustrada nesta figura está a dependência da frequência cardíaca nas taxas máxima e mínima de desenvolvimento da pressão DPDT em camundongos selvagens (WT) e camundongos com nulificação do OS um (OS one knockout); camundongos OS um apresentam taxas máxima e mínima de desenvolvimento da pressão reduzidas em comparação com camundongos selvagens.Portanto, a eliminação da NOS um resulta em um efeito barco reduzido. Por fim, como visto aqui, a contratilidade independente da carga é analisada utilizando valores calculados para N ELASTINAS sistólicas e PRSW em camundongos WT e com eliminação da OS um. Esses dados sugerem que camundongos com eliminação da NOS um apresentam contratilidade reduzida em comparação com camundongos WT controle.Após assistir a este vídeo, você agora deverá ter uma boa compreensão de como realizar medições precisas da contratilidade cardíaca in vivo e, portanto, da função cardíaca em diferentes frequências cardíacas.

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Research

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Medicine

Medicina

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