Name: Usando o Eletrorretinograma na Avaliação da Função na Roedor Retina e os efeitos protetores do remoto Limb Pré-Condicionamento Isquêmico (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: Aprenda a usar o eletrorretinograma para avaliar a função retiniana em ratos adaptados ao escuro. Este método demonstra os efeitos protetores do pré-condicionamento isquêmico remoto contra danos induzidos por luz.

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Os autores agradecem o apoio da Sra Sharon Spana no monitoramento roedor, manipulação e experimentação. PhD apoio financeiro foi fornecido pela Universidade de Sydney e do Centro Australiano de Investigação de Excelência em Vision.

Este protocolo segue as diretrizes de cuidados de animais de University of Sydney. 1. Os eléctrodos Factura <ol><li> Construir o eléctrodo positivo (o qual entrará em contacto com a córnea) a partir de uma (5 cm) de comprimento curto de fio de platina de 1-2 mm de diâmetro. Moldá-lo em um loop de alguns mm de diâmetro. Conecte-se este ciclo com uma vantagem convencional, o tempo suficiente para chegar à fase de entrada do seu amplificador (ver Figura 4). </li><li> Construir o eléctrodo negativo (o que vai na boca do animal), utilizando um de Ag / AgCl sedimentar 1-2 mm de diâmetro, também ligada a uma guia convenção (ver Figura 4). </li><li> Como um eletrodo de referência (que entrará em garupa do animal), use uma agulha hipodérmica limpo (23 G), também ligado a uma vantagem de comprimento adequado (consulte a Figura 4). </li><li> O ideal é usar cabos de três chumbo fornecidos por fabricantes de instrumentos, para conectar os três eletrodos (U positivo94; córnea, negativo → boca, referência → traseiro) para o amplificador. </li></ol> 2. Conexão e Calibração do estímulo luminoso e ERG Set-up <ol><li> Criar (ou localizar) um pequeno laboratório de gravação, o que pode ser feito escuro. Equipar com uma ou ambas de uma luz sobre-o-banco de vermelho ou uma cabeça-lâmpada vermelha. </li><li> Use um luxímetro para confirmar que a luz vermelha iluminância atingir os olhos do rato durante a instalação não exceda 1 lux. Nota: Um filtro de densidade neutro pode ser usado para reduzir o brilho da lâmpada e a fonte de luz da lâmpada deve especificamente emitem luz vermelha. Adaptação das Trevas vai ser comprometida se fontes de luz emitem comprimentos de onda (visíveis) mais baixos. </li><li> Lacrar todos a luz difusa que entra no laboratório de gravação (isso muitas vezes exige persistência com fita opaco) e preparar um filtro de densidade neutra (este pode ser comprado em folhas) grande o suficiente para caber mais, e assim fraca, qualquer tela de computador que você terá na laboratório. Nota: luz e Strayà luz de uma tela são suficientes para prejudicar a adaptação ao escuro do olho de rato. </li><li> Ligue o amplificador para hardware de aquisição de dados. Conecte-se, leads negativos e positivos de referência para o amplificador. Verifique se o computador ea unidade de alimentação Ganzfeld LED estão bem conectados a uma fonte de terra. Nota: Alguns laboratórios têm-se especializado pontos de aterramento, conectado a um terreno de construção; uma tubulação de água é uma alternativa eficaz. </li><li> Calibrar a fonte de luz LED com um radiómetro de investigação de qualidade. Corrigir o sensor do medidor na posição em que o olho do animal será localizado durante uma experiência. </li><li> Programe os LEDs Ganzfeld para executar um protocolo de campo total ERG com aumentos passo a passo em energia flash, duração do flash, flash e repetição tempo entre flashes, denominado intervalo interstimuls (ISI), configurações. Por exemplo um protocolo de campo total ver Tabela 1. Nota: O ERG de campo total flashes aumentará de flashes ofuscantes repetitivas para bdireito pisca em uma forma sábia passo. O programa de flash duplo surge na sequência do protocolo de campo total e permite o isolamento dos bastonetes e cones respostas. </li></ol> 3. Dia Antes do ERG Experimentação <ol><li> Escuro adaptar ratos Sprague-Dawley, durante 12 h antes da gravação. É conveniente fazer isso no laboratório de gravação, uma vez que a luz difusa foi eliminada. </li></ol> 4. Dia do ERG Experimentação <ol><li> Organizar para que o animal delicadamente ser aquecido durante a gravação. Nós usamos uma plataforma de metal leve construído de modo que a cabeça do animal pode descansar no ponto correto no momento da entrada para o Ganzfeld. A plataforma tem embutido tubagem através da qual se bombeia a água pré-aquecida a 40 ° C num banho de água. Nota: A experiência mostra que este mantém a temperatura do núcleo do animal a 37 ° C. </li><li> Pesar o rato sob condições de pouca luz. Peso recorde e make up cetamina correta (60 mg / kg) e xilazina (5 mg / kg) dose. Contenha o rato gently e injetar anestésico por via intraperitoneal. </li><li> Nota momento da injecção. Uma vez que o animal está inconsciente (geralmente dentro de 5 min) verificar profundidade da anestesia levemente beliscar uma almofada do pé, para ver se uma resposta reflexa está presente. É melhor esperar até que esse reflexo é ausente ou fraco, antes de prosseguir. </li><li> Aplicar uma única gota de atropina e outro de proxmethacaine a córnea. </li><li> Corte um comprimento de 10 centímetros da linha preta. Faça um laço com um nó simples e deslizar o laço sobre o equador do olho. Aperte-o ligeiramente; o efeito é chamar o globo ocular ligeiramente para a frente, com o mínimo de pressão. Isso mantém a córnea resulta das pálpebras. </li><li> Aplicar olho carbómero gotas à superfície da córnea. Certifique-se de carbómero permanece sobre a superfície da córnea e não derramar sobre as pálpebras ou o rosto. </li><li> Coloque roupas de cama absorvente em cima da plataforma aquecida. </li><li> Posição rato na cama, com a cabeça no lugar recomendado na abertura do Ganzfeld. </li><li> Inserir intErnal sonda de temperatura no recto. Sonda de temperatura segura na posição gravando cabo de sonda para a cauda. </li><li> Insira o eletrodo de referência (a agulha 23 G) por via subcutânea na perna de trás, e se conectar ao amplificador. </li><li> Inserir o eléctrodo negativo (o sedimento de Ag / AgCl) de forma segura na boca. Para evitar que isso escorregar para fora da boca, apor o cabo de ligação a uma superfície estável. </li><li> Posicionar o eléctrodo positivo ao longo do centro da córnea. Usando um micromanipulador, garantir que o eletrodo toca a córnea suavemente. </li><li> Verifique a temperatura do corpo é a 37,0-37,5 ° C. </li><li> Uma vez que o animal está devidamente posicionado e eletrodos estão no lugar, armar toda a configuração (Ganzfeld e animal) com um material opaco (para preservar a adaptação ao escuro). Nós usamos um pano preto macio. </li><li> No software de aquisição fixado em uma taxa de amostragem de 2 KHz com um tempo de coleta de 100-1000 ms com 5 ms de amostragem pré-coleção. Defina os filtros passa banda para 1-1,000Hz e garantir que a amostragem é acionado para provar o período de ~ 250 ms após um flash. </li><li> Verifique a linha de base a gravação. Deve ser livre de ruídos estranhos, mas mostrar algum ruído amplificador e uma oscilação respiratória. </li><li> Se a linha de base mostra ruídos estranhos, começar solução de problemas. A maioria dos problemas são relacionados a derrapagem na posição do eletrodo, ou aterramento. Use uma gaiola de Faraday para garantir gravações são livres de ruídos estranhos. </li><li> Executar um flash de teste, 0,4 log scot cd.sm -2. Uma forma de onda ERG semelhante à Figura 2A deve aparecer. Em nossas respostas típicas de laboratório para um flash cd.sm scot 0,4 log -2 são (a onda: -474 ± 39 mV e b-ondas: 1512 ± 160 mV, n = 11). </li><li> Permitir animal escuro re-adaptar para 10 min. É conveniente utilizar estes 10 min para verificar novamente a linha de base. </li><li> Após a confirmação do sinal estável começar a gravar. </li><li> No fim da sessão de gravação, que vá corpo temperature foi mantida. Remover eletrodos. Reaplicar carbï¿½ero polímero de córneas. Permitir que o animal se recuperar em uma almofada de calor até que esteja totalmente móvel e ativo, antes de retornar à habitação animal. </li></ol> 5. A isquemia remoto <ol><li> Execute isquemia remoto em ambos os roedores acordado ou anestesiados. </li><li> Se o animal é anestesiado, colocá-lo em uma plataforma aquecida (acima) e coloque o manguito do esfigmomanômetro sobre a parte superior da traseira-membro, claro do joelho. </li><li> Se os animais estão acostumados a serem tratadas, é possível executar esse procedimento sem anestesia; isto requer duas pessoas. Uma pessoa restringe o animal delicadamente eo segundo aplica-se o manguito do esfigmomanômetro e opera o esfigmomanômetro. </li><li> Para animais acordados, use um pedaço de toalha de ~ 15 centímetros x 30-50 cm para embrulhar cuidadosamente o animal, com um hindlimb livre. Coloque o animal em sua parte traseira em (digamos) o antebraço esquerdo, com a cabeça enfiada entre o braço do suporte e torso, e lugara braçadeira como acabado de descrever. </li><li> Esvaziar a manga e assegurar a válvula de pressão de ar é fechada. Bombear o manguito até 160 mmHg em animais anestesiados, e 180 mmHg em animais acordados. Isso excede a pressão sistólica (geralmente 140 mmHg e 160 mmHg, respectivamente). </li><li> Manter essas pressões, conforme necessário, usando a bomba de mão. </li><li> Após o tempo previsto para a isquemia (nós usamos dois períodos de 5 min separados por 5 min de reperfusão), esvazie a pressão do balonete, desapertando a válvula de pressão de ar. </li><li> Confirmar o efeito de isquemia remoto com uma sonda de temperatura ligada a pele da pata. A temperatura da pele cai tipicamente 32-30 ° C, durante 5 minutos e recupera por reperfusão. </li></ol> 6. Danos Luz <ol><li> Certifique-se de que os ratos estão em uma noite de adaptação ao escuro, antes do procedimento danos leves. </li><li> No momento adequado seguinte isquemia (em nossos experimentos sem atraso), cada animal é colocado isoladamente em um caixas de acrílico, with água e alimentos em recipientes à base de chão. Nota: O dano induzido por luz só pode ser realizado em animais albinos. </li><li> Ligue uma luz branca pré-calibrado 1.000 lux em um horário padrão (geralmente 09:00) e manter esta condição durante 24 horas. </li></ol> 7. ERG Extração de Dados e Análise <ol><li> Adquirir formas de onda médios do ERG. Se necessário, corrigir para uma linha de base diferente de zero, por subtracção. </li><li> Medir a amplitude da onda-um (apresentada em meados de altas intensidades de estímulo), como a diferença de tensão entre a linha de base e a primeira (&lt;30 ms latência) da calha (Figura 1). </li><li> Medir a amplitude da onda b como a diferença de tensão entre o pico da onda e um-a positiva da onda seguinte, que ocorre tipicamente a uma latência de 80-100 mseg (Figura 1). </li><li> Isolar potenciais oscilatórios usando uma transformada de Fourier para filtrar dados 60-235 Hz, com uma banda de transição 90 Hz <sup&gt; 7. Se necessário, o sinal de potencial oscilatório isolado pode então ser subtraída da forma de onda não filtrada para confirmar a identidade da calha de uma onda. </li><li> O tempo implícita (latência) dos a- e b-picos de onda também pode ser uma medida útil (Figura 1). Use os flashes individuais para isolar a resposta rod. Subtrair a resposta de cones (flash 2) a partir da resposta mista (flash 1) para isolar a resposta da haste (Figura 2). </li><li> Normalizar a intensidade da luz indivíduo uma onda e amplitudes da onda-b (pós-tratamento / pós-tratamento-base) ou a média para os grupos de tratamento. Curvas intensidade-resposta traçar as amplitudes de grupo e erro contra energia flash. </li></ol>

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<li>Wachtmeister, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillatory+potentials+in+the+retina%3A+what+do+they+reveal%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Oscillatory potentials in the retina: what do they reveal.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 17 (4), 485-521 (1998).</li>
</ol>

Jonathan Stone é o diretor do CSCM Pty Ltd

O flash método ERG de adaptação ao escuro descrito acima é um método confiável para avaliar a função da retina em ratos. Tanto a uma onda e onda-b foram reduzidas em danos leves. Remoto pré-condicionamento isquêmico mitigado reduções de luz induzida por danos no um-ondas e b-ondas. Esta preservação da função da retina sugere que o pré-condicionamento isquêmico remoto tem induzido neuroproteção, assemelhando-se outras formas de pré-condicionamento de proteção, tais como hipóxia, isquemia e exercício 8-10. O si...

O ERG é um potencial eléctrico gerado pela retina em resposta a luz, e gravado a partir da superfície da córnea do olho. Quando as condições de gravação são geridos com cuidado, o ERG pode ser usada em uma variedade de maneiras de avaliar a função da retina. Aqui descrevemos como para gravar o &#39;flash ERG&#39;, o potencial gerado quando a retina é exposto a um breve flash, brilhante apresentada em um fundo Ganzfeld. O Ganzfeld dispersa a luz homogeneamente eo flash de luz atinge toda a retina aproximadamente uniformemente. Se a retina está adaptado escuro antes de gravar, e o de adaptação ao escuro é mantida como o animal é preparado para a gravação, o ERG obtido é gerado por ambos os bastonetes e cones fotorreceptores. O flash ERG adaptação ao escuro tem uma forma de onda característica, que foi analisada em duas maneiras. Em primeiro lugar, precoce e tardio componentes da forma de onda do ERG foram distinguidos, e relacionados com a sequência de neurónioactivação ai na retina. O primeiro componente é um de curta latência negativo ido potencial, a uma onda (Figura 1). Isto é seguido por um potencial positivo Ir, chamado a onda b. A fase ascendente da onda b mostra oscilações, que são considerados um componente separado (potenciais oscilatórios ou PO). A onda um é considerado ser gerado por fotorreceptores, o b-ondas por células da camada nuclear interna, e as células PO por amacrine 1. Com base na força do estímulo, as respostas a pisca muito fraca denominado o limiar de resposta escotópica são possíveis. O limiar de resposta escotópica é entendida para ser gerada a partir das células ganglionares da retina 2-4. Em segundo lugar, o flash ERG podem ser separados por adaptação à luz, ou por um protocolo de dois flashes descrito abaixo, em componentes rod- e orientada para o cone. Sob condições fotópicas, a uma onda não é detectável em ratazanas, pois a população cone é baixo, mas PO e uma onda b são5 claro. Nos primatas, cujas retinas têm populações superiores cone, tanto rod- e vias cone- gerar um detectável uma onda 6. Duas medidas úteis muitas vezes extraídos do flash ERG são as amplitudes de a- e b-ondas, medidos como na Figura 1, com as respostas de flash típicos mostrados na Figura 2. Quando a população de fotorreceptores é reduzido, por exemplo por exposição a prejudicialmente brilhante luz, todos os componentes do ERG são reduzidos. Intervenções neuroprotetores, como remota pré-condicionamento isquêmico (RIP), pode ser validado pela preservação das amplitudes do a- e b-ondas (Figura 3). Em resumo, a análise do ERG permite comparações entre saudável, luz e da retina danificado neuroprotected.

<table><tbody><tr><td>Computador</td><td></td><td></td><td></td>Powerlab do PC</tr><tr>, instrumento <td>PL</td><td>35044</td> do<td>AD do hardware do acquirion de 4 canaletas</td><td>Aquisição do amplificador animal do AE</td></tr><tr><td>dos</td><td>instrumentos</td><td>do AE do bio amplificador do AE 136</td><td>do ERG para</td></tr><tr><td>o AD, dos</td><td>instrumentos</td><td></td> do AD, da carta do laboratório de ERG, <td>software da coleção do sinal</td></tr>, <tr>soluções <td>fotométricas</td><td>de Ganzfield</td>, <td>FS-250A</td>, <td>estímulo claro</td></tr><tr><td>Sistema operacional Ganzfield</td><td>Soluções</td><td></td><td></td>fotométricas</tr><tr><td>Pesquisa Radiômetro</td><td>International light technologies</td><td>ILT-1700</td><td>calibrar série de luz</td></tr><tr><td>Lux medidor</td><td></td><td>LX-1010B</td><td>verificar luz vermelha illumanação</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fios condutores</td><td>AD Instruments</td><td></td><td>Connect positivo, negativo eletrodos de aterramento para amplificador</td></tr><tr><td>Fios condutores - jacaré</td><td>AD Instruments</td><td></td><td>aterramento ganzfield e aquisição de hardware para computador</td></tr><tr><td>Fio de platina 95%</td> <td>A& Eletrodo positivo de</td><td></td><td></td>metais</tr><tr><td>E Eletrodo bucal Ag / AgCl Pellet</td><td>SDR</td><td>E205</td><td>elétron negativo</td></tr><tr><td>26 G agulha</td><td>BD</td><td></td><td>elétron retificado</td></tr><tr><td>Bomba</td><td></td><td></td><td></td>de água</tr> Tubulação de <tr><td>banho-maria</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema de manta homeotérmica com sonda flexível</td><td>Harvard Appartus</td><td>507222F</td><td></td></tr><tr><td>Atropina 1% c/v</td><td>Bausch & Lomb</td><td></td><td>midríase tópica</td></tr><tr><td>Proxmeticaína 0,5% p/v</td><td>Bausch & </td><td>Anestésico tópico</td>Lomb <td></td></tr><tr><td>Lágrimas de visco colírio Polímero</td> de <td>carbômero</td><td>Novartis</td><td></td></tr><tr><td>Rosca</td><td></td><td></td><td>retrair pálpebra</td></tr><tr><td>Pinças</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adesivo reutilizável</td><td>Blu tac</td><td></td><td>Farol vermelho escuro. Eletrodos de afixação</td></tr><tr><td>Cama</td><td></td><td></td><td></td>absorvente</tr><tr><td>Ketamil - cetamina 100 mg/ml - 50 ml</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd</td><td></td><td>dissociativo</td></tr><tr><td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd</td><td></td><td>relaxante muscular</td></tr><tr><td>Balança</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

usando o eletrorretinograma na avaliação da função na roedor retina e os efeitos protetores do remoto limb pré-condicionamento isquêmico

Using the Electroretinogram to Assess Function in the Rodent Retina and the Protective Effects of Remote Limb Ischemic Preconditioning

O ERG é a soma de toda a atividade da retina. O ERG geralmente é registrado a partir da córnea, que atua como uma antena que coleta e soma os sinais da retina. O ERG é uma medida sensível de alterações na função retiniana que são pan-retinianas, mas é menos eficaz para detectar danos confinados a uma pequena área da retina. No presente trabalho descrevemos como registrar o ERG 'flash', que é o potencial gerado quando a retina é exposta a um breve flash de luz. Descrevemos métodos de anestesia, midríase e manejo da córnea durante o registro; como manter a retina escura adaptada; materiais e colocação do eletrodo; o alcance e a calibração da energia do estímulo; parâmetros de gravação e extração de dados. Também descrevemos um método de indução de isquemia em um membro e como usar o ERG para avaliar os efeitos dessa isquemia remota da retina na função retiniana após danos causados pela luz. Um protocolo de dois flashes é descrito que permite o isolamento do componente acionado por cone do ERG adaptado ao escuro e, portanto, a separação dos componentes de haste e cone. Por poder ser registrado com técnicas minimamente invasivas, o ERG tem sido amplamente utilizado em estudos de fisiologia, farmacologia e toxicologia da retina. Descrevemos um exemplo dessa utilidade, no qual o ERG é usado para avaliar a função da retina danificada pela luz, com e sem intervenção neuroprotetora; pré-condicionamento por isquemia remota.

O protocolo pode ser utilizado para medir a função visual da retina de roedores in vivo. A uma onda, uma medida da função de fotorreceptores, e da onda b, uma medida da função retina interna, são anotados na Figura 1. Os dominados-rod ERG sinal aumenta com o aumento do estímulo de luz, como mostrado na Figura 2A. A onda de um torna-se aparente a ~ 0,4 log Scot cd.sm -2 e a amplitude de um dos aumentos de onda até à saturação a 2,5 log Sco...

O eletrorretinograma (ERG) é um potencial elétrico gerado pela retina em resposta à luz. Este artigo descreve como usar o ERG para avaliar a função retiniana, em ratos adaptados ao escuro, e como ele pode ser usado para avaliar uma intervenção neuroprotetora, no presente caso o pré-condicionamento isquêmico remoto.

Usando o Eletrorretinograma na Avaliação da Função na Roedor Retina e os efeitos protetores do remoto Limb Pré-Condicionamento Isquêmico

The ERG is the sum of all retinal activity. The ERG is usually recorded from the cornea, which acts as an antenna that collects and sums signals from the ...

O objetivo geral deste procedimento é testar a função visual em ratos com lesão por luz normal e em ratos submetidos à precondicionamento isquêmico remoto e lesão por luz, utilizando o ERG, demonstrando assim os efeitos protetores da isquemia em membro remoto sobre a retina. Isso é realizado primeiramente escurecendo e adaptando os ratos por 12 horas. O segundo passo é registrar o ERG de adaptação escotópica basal utilizando estímulos de luz LED e um amplificador digital.Em seguida, submeta os ratos a um estresse retiniano expondo-os à luz intensa contínua. O passo final é comparar os registros de ERG dos ratos com dano induzido pela luz e dos ratos submetidos à isquemia remota de membro, e medir as respostas dos fotorreceptores observadas na onda A e as respostas da retina interna observadas na onda B. Em última análise, o ERG em escotopia é utilizado para avaliar a função visual escotópica.Portanto, este método pode fornecer informações sobre a neuroproteção baseada em isquemia remota. Também pode ser aplicado a outras formas de lesão e doenças da retina para testes farmacológicos, e para o rastreamento de animais com defeitos visuais. Para iniciar este procedimento, adapte a rata à escuridão por 12 horas, depois anestesie-a com a injeção de uma mistura de cetamina e xilazina.Uma vez que o animal esteja inconsciente, verifique a profundidade da anestesia pinçando levemente o seu pé para garantir que a resposta reflexa esteja ausente. Em seguida, aplique uma gota de atropina e uma gota de proparacaína na córnea. Corte um fio preto com 10 centímetros de comprimento.Em seguida, faça um laço com o fio e passe o laço ao redor do equador do olho, ajustando-o levemente para puxar o globo ocular ligeiramente para frente e manter a córnea livre da pálpebra. Posteriormente, aplique colírio carmer nas córneas. Posicione a rata sobre a cama absorvente em cima da plataforma aquecida, com a cabeça colocada na abertura do ganzfeld.Em seguida, insira a sonda de temperatura interna no reto para garantir que a temperatura corporal seja mantida a 37 graus Celsius e fixe a sonda de temperatura no lugar, prendendo seu cabo à cauda do rato. Depois, insira o eletrodo de referência subcutaneamente na pata traseira. Posicione o eletrodo negativo firmemente na boca para evitar que o eletrodo saia da boca.Fixe o cabo de conexão a uma superfície estável. Em seguida, posicione o eletrodo positivo sobre o centro da córnea e certifique-se de que o eletrodo toque suavemente a córnea utilizando um micromanipulador. Uma vez que os eletrodos estejam posicionados, cubra todo o conjunto, incluindo o ganzfeld e o animal, com um material opaco para preservar a adaptação à escuridão.No software de aquisição, defina dois quilohertz como taxa de amostragem, com cinco milissegundos para amostragem pré-coleta e um tempo de coleta de 100 a 1000 milissegundos. Em seguida, configure os filtros passa-banda para um a 1000 hertz e certifique-se de que a amostragem seja acionada por um período de 100 milissegundos após um flash.Agora, verifique a linha de base da gravação. Ela deve estar livre de ruídos estranhos, mas mostrar o ruído do amplificador e a oscilação respiratória. Em seguida, execute um flash de teste.Esta é uma forma de onda ERG típica em resposta ao flash de teste. Quando concluído, permita que o animal readapte-se ao escuro por 10 minutos. Em seguida, verifique novamente a linha de base para obter um sinal estável.Posteriormente, inicie a gravação. Ao final da sessão de gravação, verifique a estabilidade da temperatura corporal do animal. Remova os eletrodos e, em seguida, reaplique o polímero carmer nas córneas. Depois disso, permita que o animal se recupere sobre uma placa aquecida até que esteja totalmente móvel e ativo antes de devolvê-lo à instalação de criação.Esta figura mostra a medição da onda a e da onda b a partir de um ERG escotópico. O traçado mostrado aqui é registrado da córnea de um olho escotopizado em resposta a um flash brilhante de luz fornecido no momento indicado como T zero. A amplitude da onda a é medida da linha de base até o primeiro vale.A amplitude da onda B é medida a partir do ponto mínimo da onda A até o pico positivo seguinte. A latência é medida a partir do artefato do estímulo até o ponto de interesse no traçado, como o ponto mínimo da onda A. O sinal bruto de ERG dominado aumenta com o aumento do estímulo luminoso.Uma onda torna-se aparente em aproximadamente 0,4 logs de candelas escotópicas por segundo por metro quadrado, e o paradigma do estímulo duplo tem sido utilizado para separar o sinal misto do ERG em respostas de cones e bastonetes. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em até 30 minutos.

using-electroretinogram-to-assess-function-rodent-retina-protective

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo demonstra a preparação de um modelo de rato para estudar a saúde da retina e a integridade das vias visuais. O potencial evocado visual e a referência de eletrorretinografia e os eletrodos ativos são conectados ao rato, seguidos pelo alinhamento da plataforma com o rato na frente da tigela de Ganzfeld para iluminação retiniana uniforme e fechamento da gaiola de Faraday para evitar interferência externa.

Preparando um modelo de rato para avaliar a integridade da via visual usando uma configuração de eletrofisiologia

Fonte: Brandli, A. Pré-condicionamento isquêmico de membros remotos: uma técnica neuroprotetora em roedores. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra um protocolo não invasivo de pré-condicionamento isquêmico de membros em ratos para induzir neuroproteção sistêmica. O procedimento envolve oclusão e reperfusão arterial controladas, desencadeando vias de estresse celular que liberam fatores de proteção. Esses fatores aumentam a resistência a lesões isquêmicas e metabólicas em órgãos distantes,...

Pré-condicionamento isquêmico não invasivo de membros em modelo de rato para neuroproteção

A retina de roedores tem sido reconhecida como uma janela de acesso para o cérebro. Neste documento técnico que proporcionam um protocolo que utiliza o modelo de ratinho de retinopatia induzida por oxigénio para estudar os mecanismos que levam à insuficiência de regeneração vascular dentro do sistema nervoso central após a lesão isquémica. O sistema descrito também pode ser aproveitada para explorar estratégias para promover o crescimento de vasos sanguíneos funcionais dentro da retina e do...

Assessment of Vascular regeneração no SNC Usando o rato Retina

Pré-condicionamento isquémico remoto (RIP) é um método de tecidos condicionado contra o stress prejudicial. Nós estabelecemos um método de isquemia remoto no membro posterior, inflando um manguito de esfigmomanômetro para 5-10 min. As capacidades neuroprotectoras de PIR foi demonstrada num modelo de degeneração da retina em roedores.

Membro Remoto Pré-Condicionamento Isquêmico: A Técnica neuroprotetor em roedores

Ex vivo O ERG pode ser usado para registrar a atividade elétrica das células da retina diretamente de retinas intactas isoladas de animais ou humanos. Demonstramos aqui como os sistemas ERG in vivo comuns podem ser adaptados para gravações de ERG ex vivo, a fim de dissecar a atividade elétrica das células da retina.

Simultâneo<em&gt; Ex vivo</em&gt; Teste Funcional de Dois retinas por<em&gt; In vivo</em&gt; Sistema Eletrorretinograma

Este protocolo descreve a medição simultânea do eletrorretinograma e dos potenciais evocados visuais em ratos anestesiados.

Gravação simultânea de Eletrorretinografia e potenciais evocados visuais em ratos anestesiados

Mostramos procedimentos de implantação e de gravação cirúrgicos para medir sinais eletrofisiológicos visuais do olho (eletrorretinograma) eo cérebro (potencial evocado visual) em ratos conscientes, que é mais análogo à condição humana, onde as gravações são realizadas sem confunde anestesia.

Implantação e Gravação do Wireless Eletrorretinograma e Visual Potencial Evocado em ratos conscientes

Aqui, apresentamos um método para registrar respostas elétricas evocadas pela luz do epitélio pigmento da retina (RPE) em camundongos usando uma técnica conhecida como DC-ERGs descrita pela primeira vez por Marmorstein, Peachey, e colegas no início dos anos 2000.

Eletroretinograma acoplado direto (DC-ERG) para gravar as respostas elétricas evocadas pela luz do epitélio pigmento de retina do rato

Aqui, descrevemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum bilateral transitória usando suturas simples e um grampo. Este modelo pode ser útil para entender os mecanismos patológicos da isquemia da retina causada por anormalidades cardiovasculares.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

A modificação do equipamento de matriz de multieletrodos ou patch clamp existente torna o eletrorretinograma ex vivo mais amplamente acessível. Métodos aprimorados para registrar e manter respostas à luz ex vivo facilitam o estudo da função fotorreceptora e das células ON-bipolar na retina saudável, modelos animais de doenças oculares e retinas de doadores humanos.

Otimizando a configuração e as condições do eletrorretinograma ex vivo para estudar a função da retina em olhos pequenos e grandes

Este protocolo modela a lesão de isquemia-reperfusão retiniana em um olho de camundongo, induzindo isquemia retiniana por meio de canulação da câmara anterior e elevação da pressão intraocular, seguida de normalização da pressão intraocular para iniciar a reperfusão.

Indução de lesão de isquemia-reperfusão retiniana em um modelo de olho de camundongo

Aprenda a usar o eletrorretinograma para avaliar a função retiniana em ratos adaptados ao escuro. Este método demonstra os efeitos protetores do pré-condicionamento isquêmico remoto contra danos induzidos por luz.

Usando o Eletrorretinograma na Avaliação da Função na Roedor Retina e os efeitos protetores do remoto Limb Pré-Condicionamento Isquêmico (Vídeo) | JoVE Journal

Usando o Eletrorretinograma na Avaliação da Função na Roedor Retina e os efeitos protetores do remoto Limb Pré-Condicionamento Isquêmico

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