Usando o Eletrorretinograma na Avaliação da Função na Roedor Retina e os efeitos protetores do remoto Limb Pré-Condicionamento Isquêmico

O objetivo geral deste procedimento é testar a função visual em ratos com lesão luminosa normal e isquêmica remota pré-condicionados e lesão leve usando o ERG e, assim, demonstrando os efeitos protetores da isquemia remota de membros na retina. Isso é feito primeiro escurecendo, adaptando os ratos por 12 horas. O segundo passo é registrar o ERG adaptado ao escuro da linha de base usando estímulos de luz LED e um amplificador digital.

Em seguida, sujeite os ratos a um estresse retiniano, expondo-o a uma luz contínua e brilhante. A etapa final é comparar as gravações de ERG dos ratos com danos causados pela luz e aqueles pré-condicionados com isquemia remota do membro, e medir as respostas dos fotorreceptores vistas na onda A e as respostas internas da retina vistas na onda B. Em última análise, o ERG adaptado ao escuro é usado para avaliar a função visual escotópica.

Portanto, este método pode fornecer informações sobre a neuroproteção remota baseada na isquemia. Também pode ser aplicado a outras formas de lesão da retina e testes farmacológicos de doenças, e para a triagem de animais com defeitos visuais. Para iniciar este procedimento, adapte o rato no escuro por 12 horas e, em seguida, anestesieste-o com a injeção de coquetel de cetamina xilazina.

Quando o animal estiver inconsciente, verifique a profundidade da anestesia beliscando levemente o pé para garantir que a resposta reflexa esteja ausente. Em seguida, aplique uma gota de atropina e uma gota de metano de proximidade em sua córnea. Corte em linha preta de 10 centímetros de comprimento.

Em seguida, faça um laço com o fio e deslize o laço sobre o equador do olho, tricotando levemente apertado para puxar o globo ocular ligeiramente para a frente e manter a córnea afastada da pálpebra. Em seguida, aplique colírio carmer nas córneas. Posicione o rato na cama absorvente em cima da plataforma aquecida com a cabeça colocada na abertura do ganzfeld.

Em seguida, insira a sonda de temperatura interna no reto para garantir que a temperatura corporal seja mantida em 37 graus Celsius e prenda a sonda de temperatura na posição prendendo seu cordão na cauda do rato. Em seguida, insira o eletrodo de referência por via subcutânea no membro posterior. Coloque o eletrodo negativo firmemente na boca para evitar que o eletrodo escorregue para fora da boca.

Fixe o cabo de conexão em uma superfície estável. Em seguida, posicione o eletrodo positivo sobre o centro da córnea e certifique-se de que o eletrodo toque a córnea suavemente usando um manipulador microm. Uma vez que os eletrodos estejam no lugar, cubra o orifício configurado, incluindo o ganzfeld e o animal com um material opaco para preservar a adaptação ao escuro.

No software de aquisição. Defina dois kilohertz como taxa de amostragem com cinco milissegundos para amostragem pré-coleta e um tempo de coleta de 100 a 1000 milissegundos. Em seguida, defina os filtros passa-banda para um a 1000 hertz e certifique-se de que a amostragem seja acionada por um período de 100 milissegundos após um flash.

Agora, verifique a linha de base da gravação. Deve estar livre de ruídos estranhos, mas mostrar o ruído do amplificador e a oscilação respiratória. Em seguida, execute um flash de teste.

Esta é uma forma de onda típica de ERG em resposta ao flash de teste. Quando terminar, deixe o animal se readaptar ao escuro por 10 minutos. Em seguida, verifique novamente a linha de base para obter um sinal estável.

Posteriormente, inicie a gravação Ao final da sessão de gravação, verifique a estabilidade da temperatura corporal do animal. Remova os eletrodos e reaplique o polímero cármero nas córneas. Depois, permita que o animal se recupere em uma almofada térmica até que esteja totalmente móvel e ativo antes de retornar ao alojamento do animal.

Esta figura mostra a medição de uma onda e onda B de um ERG adaptado ao escuro. O traço mostrado aqui é registrado da córnea de um olho escuro adaptado a um flash de luz brilhante dado no momento mostrado como T zero. A amplitude de uma onda é medida desde a linha de base até o primeiro vale.

A amplitude da onda B é medida a partir do vale da onda A até o pico positivo seguinte. A latência é medida a partir do artefato de estímulo até o ponto de interesse no traço, como o vale da onda A. O sinal ERG dominado bruto aumenta com o aumento do estímulo luminoso.

Uma onda torna-se aparente em aproximadamente 0,4 logs de segundos de candela escotópica por metro quadrado, e o paradigma de flash duplo tem sido usado para separar o sinal ERG misto em respostas de cone e bastonete. Uma vez dominado. Esta técnica pode ser feita em 30 minutos.