Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em

O objetivo geral do seguinte experimento é avaliar a sensibilidade à sedação por etanol em moscas-das-frutas. Isso é realizado colocando as moscas em frascos e expondo-as ao vapor de etanol. O segundo passo consiste em determinar o número de moscas que estão sedadas em cada frasco em intervalos regulares de tempo, até que todas as moscas estejam sedadas.

Em seguida, realiza-se a interpolação do ponto temporal. Quando 50% das moscas estão sedadas em cada frasco, os resultados mostram um índice do tempo necessário para sedar moscas-das-frutas com etanol, demonstrando que este procedimento hoje será conduzido por Simran Sindu, uma estudante do meu laboratório. Para iniciar o experimento, colete moscas em frascos com alimento fresco em grupos de 11 indivíduos de um mesmo sexo por até cinco minutos de CO2, permitindo que as moscas se recuperem durante a noite em frascos com alimento, em um ambiente com condições controladas.

Prepare a solução de etanol diluindo etanol puro a 100% em água purificada até uma concentração final de 85%. Deixe a solução retornar à temperatura ambiente durante a noite antes do ensaio. Prepare um frasco de alimento limpo e vazio, que servirá como frasco de teste. Tenha um novo tampão de acetato de celulose, uma rolha de silicone e um mililitro da solução de etanol para cada frasco de moscas a ser testado. Ajuste a temperatura ambiente para 20 a 25 graus Celsius e a umidade relativa para 55 a 65%. Designe outro colaborador para atribuir um código único a cada grupo de frascos e registre o código para uso posterior. Coloque os frascos codificados com as moscas na sala de teste para aclimatação por alguns minutos. Em seguida, rotule os frascos de teste vazios para corresponder aos códigos nos frascos das moscas.

Construa um registro físico de testes inserindo os códigos em colunas, com uma coluna para cada frasco, em uma planilha. Utilizando o registro de testes como guia, organize os frascos codificados com alimentos e moscas e os frascos de teste vazios em arranjos correspondentes na sala de testes; transfira as moscas dos frascos de alimento para os frascos de teste emparelhados e rotulados, um de cada vez.

Em seguida, insira imediatamente tampões de acetato de celulose nos frascos de teste até que os tampões fiquem a dois centímetros abaixo das bordas dos frascos. Para a avaliação do tempo zero. Segure cada frasco individualmente entre o polegar e o indicador.

Bata suavemente na mesa três vezes para derrubar as moscas para o fundo do frasco. Aguarde 30 segundos e conte o número de moscas imóveis e/ou mortas. Registre o número de moscas imóveis ou mortas para cada frasco no tempo determinado.

Zero minutos no registro de teste em papel. Inicie o cronômetro no tempo zero e adicione imediatamente um mililitro de etanol ao acetato de celulose. Agite em movimento circular em intervalos de cinco segundos para o primeiro conjunto de quatro frascos, na ordem.

Eles serão testados quando o etanol tiver sido adicionado aos quatro frascos de ensaio do conjunto. Insira uma tampa de silicone em cada frasco para selá-lo aos 1, 2, 3, 4 e cinco minutos. Adicione um mililitro de etanol ao segundo, terceiro, quarto, quinto e sexto conjuntos de quatro frascos, respectivamente.

Continue inserindo rolhas de silicone após adicionar etanol a cada conjunto de quatro frascos LS aos seis minutos. Teste o primeiro conjunto de quatro frascos segurando cada frasco com o polegar e o indicador e batendo suavemente na mesa três vezes para fazer as moscas descerem para o fundo do frasco. Aguarde 30 segundos, depois conte e registre o número total de moscas que estão sedadas.

Classifique as moscas como sedadas se elas, primeiro, permanecerem em pé no fundo do frasco, mas não caminharem, ou segundo, deitarem de costas com ou sem agitar as asas. Manipule cada frasco do conjunto em intervalos de cinco segundos usando este cronograma nos tempos 7, 8, 9, 10 e 11 minutos.

Teste o segundo, terceiro, quarto, quinto e sexto conjuntos de frascos respectivamente da mesma forma que o primeiro conjunto aos 12 minutos. Teste novamente o primeiro conjunto de quatro frascos e continue testando o segundo, terceiro, quarto, quinto e sexto conjuntos de frascos aos 13, 14, 15, 16 e 17 minutos, respectivamente. Continue testando as moscas até que todas estejam sedadas.

Insira o número total de moscas em cada frasco no teste com anotação em papel. Registre as moscas imóveis ou mortas no sensor no tempo zero a partir do número total de moscas. Os dados brutos do ensaio de sedação com etanol foram convertidos para a porcentagem de moscas ativas em função do tempo.

A sensibilidade à sedação por etanol a partir dos dados primários foi quantificada como tempo de sedação 50 ou ST 50. O tempo necessário para que 50% das moscas ficassem sedadas ou a área sob a curva ou a UC. O ensaio detecta os efeitos do RNAi contra calnexina 14 D no sistema nervoso, o que reduziu a sensibilidade ao etanol em relação aos controles, mutação de scab e rouser, sensibilidade aumentada à sedação por etanol e mutação de happy hour. Sensibilidade reduzida à sedação por etanol em comparação com os controles uma vez dominada.

Essa técnica pode ser realizada em uma hora e meia se realizada corretamente.