Name: Pata-Arrastando: a Novel, análise de sensibilidade do mouse cilindro de ensaio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-29T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Aprenda a analisar o comportamento de arrastar a pata em camundongos durante o teste do cilindro para avaliar lesões cerebrais focais. Este método oferece maior sensibilidade que as técnicas tradicionais de assimetria de membros.

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Agradecemos ao Sr. John Crowell e Mr. Terry Upshall pelas suas competências técnicas e assistência com a fotografia e videografia. Este trabalho foi financiado por subvenções de funcionamento para JLV dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde e da Investigação e Desenvolvimento Corporation of Newfoundland e Coração e Stroke Foundation of Canada Parceria Canadense para a concessão do curso Catalisador de recuperação. RBR foi um destinatário de uma Keith Griffiths Memorial Heart &amp; Stroke Foundation de Bolsas de Pós-Graduação.

Declaração de ética: Todos os experimentos foram aprovados pelo Memorial University of Comitê de Ética Animal Care de Newfoundland de acordo com as diretrizes do Canadian Council on Animal Care. 1. Ratos <ol><li> Use camundongos adultos. Neste estudo, foram utilizados ratinhos macho adulto FVBN (n = 10) entre 2-4 meses. Ratos de casa em um hr 12:12 inverter ciclo claro-escuro e fornecer ração padrão para roedores e água ad libitum. </li></ol> 2. Materiais necessários para o teste do cilindro <ol><li> Obter uma mesa com um top transparente para filmar o teste do cilindro. As dimensões da tabela são irrelevantes, a parte superior deve ser plexiglass ou vidro, e deve haver espaço suficiente para posicionar um espelho abaixo da tabela. Isso permite que o rato para ser gravadas em vídeo a partir de baixo. Usar um espelho abaixo da mesa de modo a reflectir a imagem através do cilindro. Como alternativa, use uma câmera de cabeça para baixo, se disponível. As dimensões da tabela utilizadas neste protocolo são 54 x 56 x 66,5 centímetros (CxLxH) com um 51 x 51 centímetros superior (LxC). </li><li> Obter um espelho. As dimensões do espelho utilizados neste protocolo são 34 x 58 centímetros (LxC). </li><li> Obter um cilindro transparente / plexiglass para o mouse para executar. As dimensões do cilindro utilizado no presente protocolo são 17,5 centímetros de altura, 8,8 centímetros ID, OD 9,5 centímetros de espessura de parede de 0,35 centímetros. Um cilindro mais alto pode ser necessária para as estirpes mais activas do rato. </li><li> Coloque o cilindro sobre a mesa e filmar o reflexo no espelho abaixo. </li><li> Um vídeo câmera e tripé são obrigatórios. Gravar vídeos em cerca de 650kb / s, que é de aproximadamente 190MB por 5 min de vídeo cilindro. Assegure-se que a câmara tem uma funcionalidade de zoom para garantir que o cilindro abrange todo o campo de vista. NOTA: O vídeo câmera utilizada neste protocolo é um Sony DCR-SR42, zoom óptico de 40x, zoom digital 2,000x, 680kpix que usa a definição padrão, NTSC de vídeo entrelaçado). </li><li> Obter software para análise - um pl mídiaayer com suporte a vídeo e modulação velocidade de reprodução. O reprodutor de mídia utilizada neste protocolo é a v2.1.2 VLC Media Player. </li><li> Obter um computador com um sistema operacional capaz de executar o media player e um monitor. </li><li> Armazenamento eletrônico para vídeos é necessário. Baixe vídeos para um disco rígido externo ou copiá-lo para DVDs para o armazenamento de longo prazo. NOTA: No 190MB por vídeo, 84 sessões irão caber em um cartão SD GB 16 e 168 sessões irão caber em um cartão SD de 32 GB. Devido à inexpensiveness relativa de meios SD e a incerteza quanto tempo em alguns ratos exigem para completar as partes traseiras 20, recomenda-se uma placa de 32 GB. No estudo atual, os vídeos foram copiadas da câmera para um disco rígido externo de 2TB e, em seguida, novamente copiados em DVDs como backup. </li></ol> 3. Configuração experimental do teste do cilindro <ol><li> Apertem espelho abaixo da tabela em um ângulo de 45 graus para a mesa. Faça isso usando dois suportes de apoio ligados às pernas de mesa para support a parte superior e na parte inferior do espelho, respectivamente. Locais de suporte são anotados em uma vista lateral da mesa (Figura 1A) e uma vista de face-a da mesa (Figura 1B). </li><li> Colocar cilindro no centro da mesa. Desenhar quatro linhas equidistantes onde o cilindro senta-se na mesa com um marcador preto (Sharpe), de modo que o cilindro pode ser levantado e devolvido para a mesma posição (Figura 2). Desenhando-los no lado inferior do tampo da mesa transparente permite que o tampo da mesa para ser limpos entre testes em animais sem dissolver o marcador de tinta. </li><li> Fixe a câmara e tripé. Aponte a câmera para o espelho para que a imagem está olhando diretamente através do barril do cilindro. Assegure-se que o total da parede interna do cilindro é visível e desobstruída por a base (Figura 3). Ver uma vista de lado-a da configuração, incluindo o ângulo relativo da configuração da câmara e do espelho, de cima (Figura 4A) e a partir danível da mesa, incluindo uma criação de ratinho (Figura 4B). </li><li> Prepare placas de sinalização para identificar cada rato antes das filmagens. Certifique-se de que os cartões tipicamente incluem um número de identificação para cada rato, o ponto de tempo do ensaio (por exemplo., 3 ​​dias após o tratamento) e a data da sessão de filmagens. Não inclua o grupo de tratamento na placa de sinalização para garantir o experimentador é cego. </li><li> Filme em condições de iluminação interior padrão como este nível de luz é necessário para ver claramente os movimentos do mouse ao redor do cilindro. NOTA: Se estiver disponível a filmar no escuro com uma câmera de luz vermelha pode ser suficiente, no entanto, uma precisaria primeiro testar se a toques da pata e arrastos são claramente visíveis para a quantificação. </li></ol> 4. Execução <ol><li> Começar a filmar. Mostrar a placa de sinalização do mouse apropriado na frente da lente da câmera. </li><li> Abaixe o mouse para dentro do cilindro de cima aberta imediatamente depois de filmar a placa de sinalização. </li><li> Começar a filmar o mouse. Minimizar o ruído durante este tempo, como os ratos podem perder o interesse em explorar se assustou. </li><li> Observe a traseira ratos para explorar o cilindro. Capturar o vídeo até que o mouse executa um mínimo de vinte partes traseiras. NOTA: A parte traseira ocorre quando ambas as patas dianteiras perdem o contato com o chão eo mouse está sobre as patas traseiras. </li><li> Limpe tabletop e cilindro com uma solução de limpeza adequada entre cada rato para desinfetar e remover odores do mouse. </li><li> O congelamento é quando os ratos parar de explorar e manter-se em silêncio sentado em todos os fours por aproximadamente 5 min. Se os ratos congelar antes de ocorrer vinte partes traseiras, pode ser necessário eliminá-los a partir do cilindro durante 10-20 minutos, antes de retomar o teste. Se os ratos não realizar vinte partes traseiras, eles são removidos do estudo. NOTA: Em nossa experiência, os ratos nunca precisou ser excluído devido a uma falha de explorar o cilindro. </li></ol> 5. Avaliação do teste do cilindro usando Pata-ArrastandoAnálise <ol><li> Reproduzir o vídeo a uma taxa de entre 0,25x e 0.67x velocidade normal dependendo da rapidez com o mouse explora o cilindro. Use um player de mídia que oferece velocidades de reprodução mais lentas. </li><li> Quantificar o número total de toques da pata. Toques pata ocorrer quando as partes traseiras de rato (Figura 5A), toca o lado do cilindro (Figura 5B), subsequentemente desmonta com ambas as patas simultaneamente (Figura 5C) e terras (Figura 5D). A pata pode ou não entre em contato com a parede do cilindro com uma mão cheia, mas algum contacto com a parede do cilindro tem de ocorrer. Avaliar toques pata pela contagem do número de vezes que o rato faz contato (não importa o quão breve) com a parede do cilindro com uma ou ambas as patas dianteiras ao estar em seus membros posteriores durante uma traseira. Note-se que o contacto com a parede do cilindro só é contado como uma &quot;pata toque&quot; ou &quot;pata-arrastar&quot; se o mouse está em uma posição traseira - em péem seus membros traseiros com ambas as patas dianteiras fora da mesa. Se o mouse permanece em uma posição de 3 pontos - ambos os membros posteriores e uma pata dianteira sobre a mesa e começa a tocar a parede com a pata livre - este não é contado como um toque da pata. Ratos podem traseira e tocar a parede do cilindro com uma única pata dianteira e isso é contado como um toque da pata. Nota: um rato pode também mover seu corpo em torno do cilindro durante uma traseira, tornando mais de dois contatos. Estes contactos são computados - um para cada pata dianteira esquerda toque e um para cada toque pata dianteira direita. </li><li> Quantificar o número de pata-drags. Comportamento arrastando-Paw é distinto de toques normais da pata. <ol><li> Se os contatos da pata parede do cilindro com uma palma aberta completo (Figura 6B), ele vai lentamente cair para longe da parede, muitas vezes com um ligeiro tremor. O movimento começa com os dígitos arrastando contra a parede do cilindro ou em uma direção medial ou para baixo, (Figura 6C) antes de cair afastado completely (Figura 6D). O rato irá então desmontar com sua pata afetada (Figura 6E) antes de aterrar em todos os fours (Figura 6F). Esta é considerada uma pata-de arrastar e deve ser contada em um registro. </li><li> Se a pata não entre em contato com a parede do cilindro com uma palma totalmente aberto, ele vai pastar parede do cilindro com seus dígitos antes de cair distante da parede do cilindro. Da mesma forma, um mouse pode arrastar sua pata contra a parede do cilindro, mas não liberá-lo completamente antes de desmontar. Estes são ambos considerados pata-arrasta, bem como toques e deve ser contado como dois em um registro. </li><li> A pata também pode arrastar ao longo da parede do cilindro, enquanto um rato explora o cilindro. Neste caso, a pata seguirá a torção do tronco do rato uma vez que explora esquerda ou para a direita da sua posição original (Figura 7A-D) antes de desmontar (Figura 7E). Isto não é considerado uma pata-de arrasto, uma vez que depende o mouse escolhendo aleatoriamentenuma direcção para explorar e não depende de qual hemisfério cortical foi danificado. </li></ol></li><li> Pata-arrasta são expressos como uma percentagem da pata-arrasta por número total de toques da pata durante uma sessão. Expresse o número de pata-drags como uma porcentagem do total de contatos pata para cada membro anterior separadamente. </li><li> Toques, resultando em uma pata-de arrastar contam como uma pata-de arrasto e um toque simultaneamente. Assim, se um rato arrasta sua pata cada tempo os seus contactos pata parede do cilindro, a percentagem arrastando-pata é expressa como 100%. </li></ol> 6. adicionais Sugestões delineamento experimental <ol><li> Para minimizar variáveis ​​externas: <ol><li> Teste a ratinhos, ao mesmo tempo em cada dia de teste. Teste os ratos durante seu ciclo vigília. Mantendo ratos num ciclo de 12 hr luz reversa facilita o desempenho. </li><li> Ratos podem estar relutantes em explorar o cilindro se destacou tanto pelo ruído ou um ambiente de romance. Testando ratos em seu animal sala de espera ou um quarto que têm been familiarizado com reduz o estresse. Isso pode ocorrer se o quarto é barulhento, se o mouse foi empurrado antes de entrar no cilindro ou devido a habituação. NOTA: O teste deve ser realizado uma vez antes da manipulação experimental para servir como uma leitura da linha de base. Após manipulação, dias de teste são a critério do experimentador, embora seja aconselhada a evitar um número excessivo de exposições ao cilindro durante um curto período de tempo. </li><li> Ratos podem tornar-se relutantes em parte traseira após 6-7 exposições ao cilindro. Para o presente estudo, os ratinhos foram testados no cilindro para um total de sete vezes, antes de isquemia e nos dias 1, 3, 7, 14, 21 e 28 pós-cirurgia. NOTA: Neste estudo foi utilizada a estirpe FVBN mouse. Nós já testado ratinhos C57BL / 6 no cilindro e comportamento-arrastando pata observados após uma lesão isquémica ET-1 (dados não mostrados). Ratinhos C57BL / 6 foram mais activos do que os ratos FVBN quando criada e frequentemente saltou para o aro do cilindroantes de subir para fora. Cilindros mais altos devem ser usados ​​se camundongos tenta fugir pulando. </li></ol></li></ol> 7. A endotelina-1 Cirurgia e Enfarte Desconto Medições <ol><li> Executar A endotelina-1 a cirurgia e as medições de volume de enfarte de acordo com protocolos anteriormente publicados 4. Para atingir o córtex motor dos membros anteriores anterior, cada rato deve receber três injecções de ET-1 com os seguintes coordenadas: (i) 0,7 ântero-posterior (AP) /1.5 medial-lateral (ml) / - 1,2 dorsal-ventral (DV), ( ii) 0,4 AP / 1,25 ml / - 1,2 DV e (iii) 0,1 AP / 1,75 ml / -1.2 DV 4. </li></ol> 8. Análise Estatística <ol><li> Uma análise de duas vias para medidas repetidas de variância (ANOVA), é recomendado para analisar a percentagem de para as patas afectadas e não afectadas em diferentes pontos de tempo-arrastando pata. </li></ol>

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<li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+excessive+GABA-mediated+tonic+inhibition+promotes+functional+recovery+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reducing excessive GABA-mediated tonic inhibition promotes functional recovery after stroke.</a> Nature. 468 (7321), 305-309 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.

Os pontos-chave para estabelecer ao quantificar o comportamento de arrastar pata no teste do cilindro são os seguintes: i) quantificar o número de pata-arrasta contra totais toques pata para cada pata antes da lesão cerebral para estabelecer uma linha de base; ii) quantificar o número de pata-drags contra totais toques pata para cada pata após a lesão isquêmica; e iii) discriminar entre uma pata-de arrastar e o movimento lateral da pata ao longo da parede do cilindro durante a rotação lateral do tronco do mouse. <p ...

O objetivo das estratégias de regeneração neural é demonstrar tanto reparação tecidual e recuperação funcional. A recuperação funcional é normalmente avaliada com testes comportamentais que medem os défices funcionais, neste caso envolvendo habilidades motoras que estão associadas com danos para as regiões específicas do cérebro. Lesão cerebral traumática ou danos isquémicos para a área do membro anterior do córtex sensorimotor pode ser demonstrada por uma série de testes comportamentais. Um desses testes, o teste do cilindro é usado extensivamente em ratos para avaliar os déficits funcionais na atividade forelimb 1. O teste tem um baixo custo de set-up exigindo apenas um cilindro, câmara e mesa com um top transparente. É fácil de administrar, uma vez que se baseia no comportamento exploratório natural de roedores, por isso, não são necessários de pré-formação e privação de alimento ou recompensas. Apesar destas inúmeras vantagens, o teste do cilindro é sub-utilizado para avaliar os déficits membros anteriores em ratos após lesões focais para o membro anterior sensorimotor córtex, o que atribuímos à análise do comportamento do mouse no teste do cilindro. Assimetria membro anterior é a medida clássica de análise para o teste do cilindro. Quando colocado no cilindro, roedores naturalmente explorar as paredes do cilindro de elevação em seus membros posteriores e tocar as paredes do cilindro com as patas forelimb para o equilíbrio postural. O número de toques da pata com a parede com cada membro anterior pode ser facilmente quantificado por filmagens roedores durante essa exploração do cilindro. Assimetria dos membros anteriores ocorre quando a pata afectada membro anterior torna menos toques com a parede do que a pata afectada e dos membros anteriores é indicativa de danos para o córtex sensorimotor contralateral. Em ratos, as injecções intra-cortical do vasoconstritor, a endotelina (ET-1), para o córtex sensorimotor membro anterior provoca uma lesão isquémica focal, que resulta em déficits comportamentais No membro contralateral. Déficits em uso forelimb contralateral são facilmente detectados como mudanças na forelimb assimetria no teste do cilindro em ratos 1-3. Em contraste com os ratos no entanto, as mudanças no membro anterior assimetria são variáveis ​​e menos consistente em ratos após comparáveis ​​ET-1 4-6 injecções. Aqui demonstramos um romance análise do comportamento dos membros anteriores no teste do cilindro - análise do comportamento arrastando-pata. Mostrámos previamente que a análise do arrastando pata é uma medida mais sensível de danos no córtex sensorimotor membro anterior em ratos do que a análise dos membros anteriores assimetria clássica e, por conseguinte, é aplicável a uma variedade de modelos de lesão focal cortical. Exame de como os contatos das patas dianteiras parede do cilindro seguinte lesão isquêmica do córtex sensório-motor forelimb revelou um novo comportamento em camundongos - pata-arrastando 4. Uma pata-de arrastar ocorre quando um mouse está sobre as patas traseiras para explorar a parede do cilindro, em seguida, arrasta sua pata afetada (contra-lesional) ao longo da parede do cilindro para a sua linha média ou abaixo a parede enquantosua pata dianteira afetado fornece suporte postural contra a parede. Pata-arrasta raramente ocorrem em ratos lesionados, portanto, a aparência de uma pata-de arrasto é um indicador positivo de prejuízo para o membro anterior córtex sensório-motor 4. Temos anteriormente quantificado comportamento arrastando-pata em ratos após ET-1 lesão isquêmica do córtex sensório-motor dos membros anteriores e demonstraram comportamento arrastando-pata sustentada em ratos até duas semanas pós-AVC 4. Aqui nós mostramos que o comportamento arrastando-pata é mantida até quatro semanas pós-AVC. Análise do comportamento de arrastar pata proporciona um novo e sensível ferramenta para avaliação do dano isquêmico focal no córtex sensório-motor dos membros anteriores em ratos. Sua barato set-up, facilidade de administração e conseguir fazer esta uma ferramenta simples, mas útil para avaliar rapidamente os déficits comportamentais forelimb em camundongos.

<table><tbody><tr>Cilindro <td></td><td></td><td>de plexi-glass</td><td>com 17,5 cm de altura, 9,5 cm de diâmetro externo, 8,8 cm de diâmetro interno, espessura da parede 0,35 cm (ou 3,5 mm)</td></tr><tr><td>mesa</td><td></td><td></td><td>de visualização 54x56x66,5 cm (largura x comprimento x altura), o topo da mesa é uma folha de plexiglass de 51x51 cm.</td></tr><tr><td>espelho</td><td></td><td></td><td>34x58 cm</td></tr><tr><td>câmera de vídeo</td> espelhada <td>Sony</td><td>DCR-SR42</td><td>Câmera de vídeo com armazenamento integrado, funcionalidade SD, zoom óptico de 40x</td></tr><tr><td>computador</td><td>Dell</td><td>Optiplex 760</td><td>Processador: Intel, 3.0 GHz, Memória 4.00GB (RAM)&nbsp;</td></tr><tr><td>monitor de computador</td><td>Samsung</td><td>S22C350H</td><td></td></tr><tr><td>Excel (Microsoft Office Professional Plus)</td><td>Microsoft</td><td>v14.0.7106.5003</td><td></td></tr><tr><td>VLC Media Player</td><td>Video LAN</td><td>v2.1.2</td><td>Media player com velocidade de reprodução, modulação e suporte a vídeo</td></tr><tr><td>Disco Rígido Externo</td><td>Western Digital</td><td>WDBAAU0020HBK-01</td><td>2 TB</td></tr></tbody></table>

pata-arrastando: a novel, análise de sensibilidade do mouse cilindro de ensaio

Paw-Dragging: a Novel, Sensitive Analysis of the Mouse Cylinder Test

O teste do cilindro é rotineiramente utilizada para prever dano isquémico focal no córtex motor dos membros anteriores em roedores. Quando colocado no cilindro, roedores explorar de criação e de tocar as paredes do cilindro com as patas forelimb para apoio postural. Após lesão isquêmica ao membro anterior do córtex sensório-motor, os ratos confiar mais pesadamente em sua pata pata dianteira afetada pelo apoio postural, resultando em menos toques com a pata afetada que é denominado forelimb assimetria. Em contraste, dano cerebral isquémico focal no cérebro do rato não resultar em défices coerentes comparáveis ​​no membro anterior assimetria. Embora déficits membro anterior de assimetria são pouco observados, os ratos que demonstram um romance pós comportamento curso denominado &quot;pata-arrastamento&quot;. Pata-arrastamento é a tendência para um mouse para arrastar sua pata afetada ao longo da parede do cilindro, em vez de empurrar diretamente fora da parede quando desmontar a partir de uma retaguarda para uma posição de quatro patas. Nós já demonstrou quecomportamento arrastando-pata é altamente sensível a pequenas lesões isquêmicas corticais para o córtex motor dos membros anteriores. Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado para análise arrastando-pata. Nós definimos que uma pata-de arrasto é e demonstrar como quantificar o comportamento de arrastar pata. O teste do cilindro é um teste simples e barato de administrar e não necessita de pré-formação ou estratégias de privação alimentar. No meio de análise arrastando-pata com o teste do cilindro, ele preenche um nicho para prever lesões isquêmicas corticais como fototrombose e endotelina-1 (ET-1) isquemia induzida - dois modelos que são sempre crescentes em popularidade e produzem lesões focais menores que a oclusão da artéria cerebral média. Finalmente, medindo o comportamento de arrastar pata no teste do cilindro vai permitir estudos de recuperação funcional após a lesão cortical usando uma ampla coorte de linhagens de camundongos transgênicos, onde a análise forelimb assimetria anterior falhou em detectar déficits consistentes.

Temos anteriormente demonstrado que o comportamento arrastando-pata aparece após uma lesão isquêmica focal para o córtex sensório-motor dos membros anteriores e é um indicador positivo de danos 4. Injecções intra-corticais de ET-1 para o córtex sensorimotor membro anterior foram usadas para induzir lesão isquémica (Figura 8A, B). Este estudo examinou se o comportamento arrastando-pata prorrogado por mais de 14 dias pós-lesão para a sua utilização potencial para avaliar a recuperação funcional...

Análise forelimb assimetria clássico do teste do cilindro é rotineiramente utilizado para avaliar os déficits comportamentais em ratos após lesão cerebral ou acidente vascular cerebral; no entanto, isso não é possível detectar défices consistentes em ratinhos. Este estudo demonstra que a quantificação comportamento pata-arrastamento é uma análise mais sensíveis de lesão cerebral em camundongos.

Pata-Arrastando: a Novel, análise de sensibilidade do mouse cilindro de ensaio

The cylinder test is routinely used to predict focal ischemic damage to the forelimb motor cortex in rodents. When placed in the cylinder, rodents explore ...

Olá, sou a Dra. Jackie Vander Loot. Olá, meu nome é Brian Room. Hoje discutiremos uma análise sensível do arrasto da pata no teste do cilindro.O teste do cilindro é um teste da função motora de quatro membros em roedores. Neste teste, camundongos exploram um cilindro de plexiglass erguendo-se e utilizando suas quatro patas para sustentação postural contra a parede do cilindro. A análise do uso das quatro patas enquanto o camundongo explora o cilindro nos permite determinar se o animal apresenta déficits motores.Specificamente, comparamos o uso de cada pata dianteira antes e após um acidente vascular cerebral. Após um acidente vascular cerebral, a pata dianteira contralateral ao hemisfério lesionado é usada com menos frequência. Essa alteração no uso da pata dianteira afetada em comparação com a pata dianteira não afetada é uma medida da assimetria dos quatro membros.Atualmente, a análise de assimetria dos quatro membros é utilizada em camundongos e ratos após lesões isquêmicas extensas, como a oclusão da artéria cerebral média, como um determinante comportamental de acidente vascular cerebral. Em contraste com lesões extensas, a assimetria dos quatro membros não é observada em camundongos com lesões isquêmicas focais pequenas. Isso pode ocorrer porque a análise de assimetria dos quatro membros no teste do cilindro é sensível a lesões grandes, mas não é útil para detectar lesões menores.Lesões isquêmicas focais pequenas, como a foto-trombose e a isquemia induzida pelo endotélio, estão se tornando mais populares na maioria dos modelos. Isso ressalta a necessidade de ensaios comportamentais funcionais para avaliar essas lesões corticais menores. No meu laboratório, Brian Room desenvolveu uma análise inovadora do teste do cilindro que chamamos de arrasto da pata.Ao examinar como as quatro patas do camundongo entram em contato com a parede do cilindro após uma lesão isquêmica endotelial, observamos um comportamento novo com a pata afetada. Em camundongos não lesionados, ao se erguer, o animal apoia firmemente as quatro patas contra a parede para sustentação durante a exploração e, em seguida, usa as patas para empurrar-se da parede. Ao voltar para a posição sobre as quatro patas, após uma lesão isquêmica endotelial, a pata afetada não oferece apoio firme, apesar de entrar em contato com a parede do cilindro.Em vez disso, após o contato, a palma se levanta e os dedos deslizam ao longo da parede do cilindro antes de soltar completamente. Esse movimento de arrastamento da pata ocorre com a pata se movendo em direção horizontal em direção à linha média do corpo ou em direção vertical em direção ao solo. Nós previamente quantificamos o comportamento de arrastamento de patas em camundongos após uma lesão isquêmica e demonstramos aumento do comportamento de arrastamento de patas pelo membro afetado até duas semanas após a isquemia.Além disso, nossos dados mostraram que o comportamento de arrastamento da pata correlaciona-se com lesão no córtex motor. Neste vídeo, mostraremos como montar o teste do cilindro e analisar o comportamento de arrastamento da pata em vídeos gravados. O teste do cilindro é fácil de montar e realizar, e possui baixo custo operacional.É necessário ter uma mesa com um centro oco, que é coberto com uma folha de plexiglás. Isso nos permite filmar o máximo possível por baixo. O cilindro de plexiglás é colocado sobre a superfície da mesa.Na parte inferior da superfície da mesa, quatro linhas pretas são desenhadas para indicar a posição do cilindro. Isso serve como um guia para que o cilindro possa ser removido e reposicionado entre os ensaios sem afetar sua localização. No quadro do vídeo também, as marcas são colocadas na parte inferior da mesa, de modo que limpar a mesa com etanol 70% não apague a tinta.Para filmar o camundongo de baixo com uma câmera e tripé, incluímos um espelho em um ângulo aproximado de 45 graus abaixo da superfície da mesa. Isso nos permite evitar as complicações de construir um aparelho separado para segurar a câmera posicionada abaixo da mesa. O espelho é mantido no lugar com braçadeiras de suporte, conforme mostrado aqui e aqui.O tamanho dos suportes e o tamanho do espelho dependerão das dimensões do espaço entre as pernas da mesa. A câmera e o tripé são posicionados a uma distância em que toda a parede do cilindro possa ser vista no campo de visão. Essa distância geralmente não ultrapassa alguns pés, mas pode variar conforme o ângulo do espelho, a altura do tripé e as capacidades de zoom da câmera.Para realizar o teste, os camundongos são colocados a partir do topo do cilindro antes da filmagem. Cartões de referência são utilizados para indicar qual camundongo está realizando o teste. Isso pode incluir o número do camundongo ou um nome em código, de modo que a pessoa que avaliará os vídeos do cilindro permaneça cega em relação ao tratamento.A data da filmagem e o número do ensaio também podem ser incluídos no cartão. Os camundongos são filmados até que tenham se erguido 20 vezes. As elevações contadas dessa maneira devem envolver ambas as patas deixando o chão; elevações em que isso não ocorre não são contadas.Se o camundongo tocar a parede com uma pata enquanto a outra permanece no chão, os vídeos do cilindro são analisados usando o player de mídia VLC. Embora qualquer player de mídia com modulação de velocidade de reprodução possa ser utilizado, os arrastos de patas podem ser contados usando contadores mecânicos ou anotando-se marcas em um papel. Nós registramos as marcas em papel e posteriormente transferimos os dados para uma planilha.Reprodução de vídeo a 0,5 vezes a velocidade normal. Recomenda-se essa velocidade para permitir uma contagem eficaz. Em alguns momentos, pode ser necessário pausar e reproduzir novamente em uma velocidade mais baixa.Observe que um camundongo também pode mover o corpo ao redor do cilindro durante uma elevação, fazendo mais de dois contatos. Esses contatos são contabilizados, um para cada toque da pata dianteira esquerda e um para cada toque da pata dianteira direita. Os arrastos das patas são contados como uma porcentagem do número total de toques das patas na parede do cilindro. Para cada pata, os toques são avaliados contando o número de vezes que o camundongo entra em contato com a parede do cilindro com uma ou ambas as patas dianteiras.Observe que um camundongo também pode mover o corpo ao redor do cilindro durante um levantamento, fazendo mais de dois contatos. Esses contatos são contabilizados, um para cada toque da pata dianteira esquerda e um para cada toque da pata dianteira direita. A quantificação do comportamento de arrasto da pata é distinta da quantificação de toques normais da pata; o arrasto da pata pode ocorrer com um movimento vertical ou horizontal da pata.O arrasto frequentemente envolve um leve tremor na pata afetada ao se afastar da parede do cilindro, sugerindo fraqueza e falta de controle motor. Variações no arrasto estereotipado da pata são frequentemente observadas na pata afetada. Um exemplo é o arrasto incompleto da pata, no qual a palma se levanta, mas os dedos arrastam-se contra o cilindro, embora ambas as patas acabem por perder contato com a parede ao mesmo tempo. Ao avaliar o comportamento de arrasto da pata, é importante não confundir o movimento exploratório lateral do camundongo ao redor do cilindro com um déficit na função motora dos quatro membros.Durante a exploração lateral, o camundongo se move lateralmente ao redor do cilindro e as quatro patas traseiras são arrastadas seguindo a direção do tronco do animal. Por exemplo, o camundongo se ergue e toca a parede com ambas as patas, reposiciona uma de suas patas e então se move lateralmente em direção à pata reposicionada. Quando isso ocorre, as patas traseiras são arrastadas ao longo da parede até serem novamente apoiadas para sustentação.A torção do tronco do camundongo é outro indicativo de comportamento exploratório lateral. Esse comportamento é nitidamente diferente do arrasto da pata, pois o arrasto da pata não envolve movimento lateral ao redor da parede do cilindro durante ou imediatamente antes do arrasto. Nossos estudos analisaram o arrasto da pata após uma lesão isquêmica focal pequena na região do córtex motor das quatro patas.Aqui demonstramos que o comportamento de arrastamento da pata com os quatro picos P afetados atinge um pico um dia após o acidente vascular cerebral e diminui até sete dias após o acidente vascular cerebral, quando se estabiliza e permanece elevado até quatro semanas após o acidente vascular cerebral, já que o déficit parece ser prolongado. Isso permitirá aos pesquisadores estudar os efeitos do acidente vascular cerebral crônico após uma lesão cortical pequena. Além disso, os tratamentos para acidente vascular cerebral podem ser estudados a curto ou longo prazo em camundongos com lesões corticais pequenas.Nossa nova análise de arraste de PO do teste celular tem potencial como ensaio comportamental para acidente vascular cerebral isquêmico focal em camundongos, como os induzidos por foto-trombose ou endofilina. Especialmente em camundongos com lesões como a oclusão da artéria cerebral média, onde a assimetria laminar ocorre na maior parte do tempo. O arraste de POD pode ser usado para determinar a extensão de lesões menores e similares.Experimentos em que o arraste de pod é elevado até 28 dias após o acidente vascular cerebral. Tem potencial para ser utilizado em diversos estudos de tratamento de acidente vascular cerebral de curto e longo prazo.

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Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

O Vermicelli e Testes Handling Capellini de destreza forepaw aproveitar a inclinação natural dos roedores para manipular alimentos usando forepaw hábil e movimentos dígito. Os animais são filmados durante o manuseio cadeias curtas de massas secas cozidas. Reprodução de vídeo em câmera lenta permite a quantificação dos ajustamentos de pata.

O Vermicelli e Testes Handling Capellini: Simple medidas quantitativas da função forepaw dexterous em ratos e camundongos

Protocolos são apresentados para duas tarefas estabelecidas coordenação motora, o bar rotarod e horizontal, acelerando também dois testes desenvolvidos em Oxford recentemente, as hastes estáticos e barras paralelas. Estes testes podem detectar deficiências motoras potencialmente de interesse em seu próprio direito, bem como possíveis variáveis ​​em testes de outras áreas do comportamento.

Medindo Coordenação Motora em Ratos

Um modelo do rato para a esclerose lateral amiotrófica (ELA) é examinado clinicamente e comportamentalmente. Como um pré-requisito para uma análise imuno acompanha a preparação da medula espinal é descrito em detalhe.

Testes clínicos e Remoção da Medula Espinhal em um modelo do rato para a Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA)

Nos distúrbios da doença de Parkinson e de movimento, em geral, os ensaios comportamentais sensíveis e fiáveis ​​são essenciais para testar novas terapêuticas potenciais. Aqui, descrevemos uma bateria gerenciável de testes sensório-motores para os ratos que são sensíveis a diferentes graus de lesão no sistema nigroestriatal e útil para estudos pré-clínicos.

Avaliação da função sensório-motora em rato modelos de doença de Parkinson

Apresentada é uma bateria concisa de testes motores neonatais em camundongos. Usando esses testes, os déficits motores neonatais podem ser demonstrados em uma variedade de distúrbios motores neonatais. Por ter um conjunto padronizado de testes, os resultados de diferentes estudos podem ser comparados, permitindo relatórios melhores e precisos entre os grupos.

Uma bateria de testes de motor em um Neonatal Rato Modelo de Paralisia Cerebral

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

A avaliação precisa da resposta de dor em um modelo animal neuropática é crítica para investigar a fisiopatologia das doenças dor e desenvolver novos analgésicos. Apresentamos um método sensível e objetivo para determinar a função sensorial do roedor hind pata por um sistema de análise de marcha automática.

Análise de marcha automatizados em ratos com lesão crônica de constrição

Descrevemos o estabelecimento de um modelo murino para a doença de Parkinson usando MPTP e avaliações comportamentais usando o cilindro e testes de campo aberto para medir a função motora. Então usamos l-dopa como um exemplo para mostrar como aplicar este modelo no estudo de drogas de PD.

Avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por MPTP a doença de Parkinson

O protocolo de baixo custo, composto por análise de pegada e teste de caixa de suspensão após estresse de contenção é útil para avaliar os distúrbios do movimento do modelo do rato.

Protocolo de baixo custo de análise da pegada e caixa de teste de suspensão para ratos aplicada o retenção crônica de estresse

O ensaio mecânico de prevenção de conflitos é usado como uma leitura não reflexiva da sensibilidade à dor em camundongos que podem ser usados para entender melhor as respostas afetivas-motivacionais em uma variedade de modelos de dor de rato.

Ensaio mecânico de prevenção de conflitos para medir o comportamento da dor em camundongos

Este artigo apresenta um protocolo para executar o conceito de Unidade de AVC de camundongo (mSU) altamente translacional e comprovado de forma independente em camundongos de AVC grande. Ele também fornece um protocolo padronizado para a execução da escala experimental focal de AVC em camundongos, que avalia os déficits focais de AVC detectados mesmo a longo prazo.

O Protocolo da Unidade de AVC de Camundongo com Pontuação Neurológica Padronizada para Estudos Translacionais de AVC de Camundongo

Aprenda a analisar o comportamento de arrastar a pata em camundongos durante o teste do cilindro para avaliar lesões cerebrais focais. Este método oferece maior sensibilidade que as técnicas tradicionais de assimetria de membros.

Pata-Arrastando: a Novel, análise de sensibilidade do mouse cilindro de ensaio

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