Morris Water Maze Teste: Otimização para Mouse e Strain Testing Ambiente

O objetivo deste procedimento é identificar déficits cognitivos em um modelo de camundongo da doença de Alzheimer por meio do uso de um protocolo de labirinto de água de Morris, adaptado para uso com a cepa de fundo 1 2 9 6 FBB. Isso é feito primeiro aclimatando os camundongos à tarefa de aliviar os déficits de desempenho induzidos pelo estresse. O segundo passo é usar a tarefa de plataforma visual na qual uma plataforma é elevada uma polegada acima da linha d'água para avaliar o funcionamento visual e motor.

Em seguida, os testes de plataforma oculta são conduzidos onde a plataforma está submersa cinco milímetros abaixo da superfície da água. A etapa final é usar testes de sonda em que a plataforma é removida para avaliar a memória de referência espacial e determinar o tipo de estratégia de pesquisa usada. Em última análise, este procedimento personalizado de MAs de água permite a avaliação do aprendizado espacial e da memória em um modelo de camundongo comumente usado da doença de Alzheimer.

Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à necessidade de otimizar os procedimentos de teste, como o número de testes de treinamento e sondas usadas com base na tensão de fundo da linha do mouse e no ambiente em que os ratos são testados. Esta parte do procedimento aclimata os camundongos para puxar a entrada e remoção. Primeiro, coloque a caixa de forma que fique elevada a uma altura confortável e encha-a com dois litros de água a uma temperatura de 21 graus Celsius e a um nível de aproximadamente um centímetro.

Depois de levar os camundongos para a sala de testes, remova um sujeito da gaiola, verifique a identificação do sujeito e, em seguida, marque a cauda com um marcador permanente não tóxico para distingui-la dos camundongos que não passaram pelo procedimento. Coloque um mouse no copo de transferência por aproximadamente cinco segundos. Em seguida, despeje suavemente o mouse para fora do béquer na piscina de pré-manuseio, coloque o mouse na piscina por 20 segundos.

Depois que o tempo tiver decorrido, coloque delicadamente uma concha na frente do mouse sem incliná-la. Permita que o mouse entre e explore a concha Se necessário, incentive o mouse a subir na concha deslizando suavemente a concha sob o mouse enquanto levanta lentamente. Tome cuidado para não assustar os ratos com a colher.

Repita esses procedimentos para cada camundongo na gaiola uma vez por dia durante 10 dias. Após cada animal, pegue o bolo fecal e a cama da piscina, usando uma rede que é o copo de transferência entre as gaiolas. Realize treinamento visível nos dias de teste um, dois e três com seis tentativas por dia e aproximadamente 10 minutos entre cada tentativa.

Primeiro, configure o software de rastreamento de desempenho do mouse e crie as folhas de execução de acordo com as instruções na parte de texto do protocolo. Depois que o software estiver configurado, configure a sala primeiro pendurando cortinas para que quaisquer dicas espaciais sejam obscurecidas. Em seguida, monte a banheira enchendo com água da torneira a 21 graus Celsius.

Use um termômetro para garantir que a temperatura da água permaneça dentro de um grau dessa temperatura. Durante o teste. Coloque a plataforma que tem uma bandeira montada que atinge a altura de 13 centímetros e tem 4,5 por 4,5 centímetros com um caractere em forma de S em negrito gravado nela no primeiro local predeterminado da banheira para que ela suba aproximadamente uma polegada acima da superfície da água.

Agora pegue o primeiro rato da gaiola. Verifique a identificação do sujeito, marque a cauda usando um marcador permanente da cor correta e coloque-a em um copo de transferência. Coloque delicadamente o mouse na banheira.

Inicie o cronômetro e certifique-se de que o software de rastreamento esteja rastreando o animal. Aguarde até dois minutos para o mouse localizar a plataforma. Assim que o mouse localizar a plataforma, aguarde 20 segundos na plataforma.

Se o animal não conseguir encontrar a plataforma no período de dois minutos, pegue o rato e coloque-o na plataforma por 20 segundos. Após 20 segundos na plataforma, remova o mouse da plataforma como feito no treinamento de aclimatação e coloque-o em uma gaiola aquecida forrada com toalhas de papel e aqueça a aproximadamente 31 graus Celsius por uma almofada de aquecimento e lâmpada de calor por 30 segundos. Em seguida, transfira o mouse para a gaiola de retenção com apenas uma almofada de aquecimento, mas sem lâmpada de calor para recuperar entre as tentativas.

Depois de limpar a banheira de detritos com uma rede, repita essas etapas para cada rato do grupo. Quando cada mouse estiver concluído, o primeiro teste, mova a plataforma para o segundo local predeterminado. Realize o treinamento de plataforma oculta do quarto ao 10º dia após pendurar as cortinas.

Como antes, coloque dicas estrategicamente nas cortinas. Certifique-se de que os tacos sejam grandes e contenham cores contrastantes para melhor visibilidade e estejam definidos para distância e altura onde sejam visíveis para os ratos de dentro da banheira. Configure o software de acordo com as instruções na parte escrita do protocolo.

Em seguida, monte a banheira enchendo-a primeiro com água de modo que a plataforma fique aproximadamente cinco milímetros abaixo da superfície da água. Coloque a plataforma no local predeterminado. A localização da plataforma permanecerá a mesma por quase ser testada em todos os dias e testes.

It.It essencial variar o local de partida para que os animais não desenvolvam uma estratégia motora não espacial e não hipocampal. Para resolver o labirinto, use tinta temperada branca não tóxica para tornar a água opaca. Faça isso para garantir que o topo da plataforma fique invisível do nível dos olhos do animal enquanto nada.

Depois de identificar e marcar os ratos antes, despeje suavemente o mouse no labirinto, de modo que o otorrinolaringologista fique voltado para a parede. Cada mouse será colocado no mesmo local inicial para um teste exclusivo. Na liberação inicial do mouse, inicie o cronômetro e fique em uma área onde o testador não seja facilmente visível para os mouses.

Assim que o animal chegar à plataforma, deixe-o permanecer na plataforma por 15 segundos para orientar sua localização espacial dentro da sala. Se o mouse não localizar a plataforma em 60 segundos, pegue o mouse com cuidado e coloque-o na plataforma. Após 15 segundos na plataforma, remova o mouse do labirinto e coloque-o de volta na gaiola aquecida.

Depois de limpar o labirinto de detritos antes, repita esses procedimentos para os ratos restantes do grupo. Assim, para testar os dias quatro a nove, realize quatro tentativas de treinamento de plataforma oculta por dia com aproximadamente 20 minutos entre cada tentativa. Realize testes de sonda antes do treinamento da plataforma no sexto, sétimo e oitavo dia, e o teste de sonda final.

No dia 10, conduza os testes de sonda de maneira semelhante ao treinamento de plataforma oculta, com a exceção de que nenhuma plataforma está no labirinto. Solte um mouse de um ponto de liberação predeterminado e permita que o mouse nade 60 segundos no labirinto Após o teste de sonda no dia 10, não há testes adicionais realizados durante os testes de sonda. Use o software de rastreamento de animais para rastrear o comprimento do caminho do animal, a porcentagem de tempo que o animal passa em cada quadrante do labirinto e o número de vezes que um animal nada sobre a área anteriormente plataformada.

Abra a guia da lista experimental e obtenha as medições na guia de análise de dados e na guia do labirinto aquático. Exporte diretamente para uma planilha do Excel. Em seguida, analise os dados de acordo com as instruções na parte escrita do protocolo.

41 camundongos TP 3 0 1 L contendo o gene P 3 0 1 LTL humano e 46 controles foram testados usando este protocolo em aproximadamente 6,5 meses de idade. Isso representa três meses de expressão de Tau P 3 0 1 L nos transgênicos. Cada grupo continha um número aproximadamente igual de comprimento do trajeto de machos e fêmeas.

O treinamento de plataforma invisível não diferiu entre os controles e os camundongos TP 3 0 1 L. Essa falta de diferença indica que o controle e o tau P 3 0 1 LM não diferem na capacidade visual ou locomotora, e que os déficits de desempenho em testes ocultos podem, portanto, ser atribuídos a deficiências de memória. No entanto, durante o treinamento da plataforma oculta, o TP 3 0 1 LM demonstrou comprimentos de caminho significativamente mais longos em todos os blocos de treinamento.

Finalmente, os controles melhoraram nos quatro ensaios de sonda. Enquanto os camundongos Tau P 3 0 1 L não controlaram, os camundongos foram mais capazes de usar uma estratégia espacial para resolver a tarefa e aprenderam melhor a localizar a plataforma para a zona-alvo. Ao adaptar este procedimento para uso com outras linhagens de mouse, é importante avaliar a taxa de aprendizado dos controles, identificar o número de tentativas de treinamento de rebatidas necessárias e determinar quando a primeira tentativa de sonda deve ser inserida.