DOI: 10.3791/52722-v
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Este protocolo detalha um método para isolar vesículas extracelulares (SVE), pequenas partículas membranoso liberados a partir de células, a partir de tão pouco como 10 amostras de soro ul. Esta abordagem evita a necessidade de ultracentrifugação, exige apenas alguns minutos de tempo de ensaio, e permite o isolamento de VE a partir de amostras de volumes limitados.
O objetivo geral deste procedimento é isolar vesículas extracelulares usando uma plataforma baseada em papel. Isso é feito primeiro laminando com duas folhas de poliestireno com celulose circular, recortes de papel alinhados em uma série de furos passantes registrados. O segundo passo é conjugar quimicamente moléculas que ligariam vesículas extracelulares à zona de teste de papel.
Em seguida, a amostra biológica pode ser pipetada diretamente na zona de teste de papel e as vesículas extracelulares são isoladas após a etapa de enxágue. A etapa final é caracterizar as vesículas extracelulares capturadas usando microscopia eletrônica, Eliza ou análise transcriptômica. Em última análise, subconjuntos de vesículas extracelulares de amostras de soro tão pequenas quanto 10 microlitros podem ser purificados e concentrados.
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