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DOI: 10.3791/52771-v
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Descrevemos técnicas baseadas em imagens de animais inteiros e citometria de fluxo para monitorar a expansão de células T CD8+ específicas do antígeno em resposta à imunização com nanopartículas em um modelo murino de vacinação.
O objetivo geral do experimento a seguir é sintetizar e caracterizar nanopartículas de vacinas à base de lipídios e avaliar sua capacidade de induzir a expansão de linfócitos T citotóxicos específicos do antígeno in vivo. Isso é obtido pela engenharia de patógenos que imitam vesículas multilam interbicamadas, reticuladas ou I CMVs co-carregados com antígeno e adjuvante para vacinação de camundongos virgens. Transferido adotivamente com luciferase expressando oito células T positivas para CD específico do antígeno.
Na segunda etapa, a expansão das células T positivas CD oito antígeno-específicas é avaliada por imagens in vivo de animais inteiros. As células mononucleares do sangue periférico colhidas dos animais imunizados com ICMV são então coradas com tetrâmeros marcados com fluorescência e analisadas por citometria de fluxo para quantificar a frequência das células T positivas CD oito antígeno específico endógeno dentro do compartimento sistêmico. Em última análise, a imagem bioluminescente pode ser usada para rastrear a expansão dos linfócitos T citotóxicos específicos do antígeno em resposta à vacinação com nanopartículas.
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