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Imaginologia todo animal e técnicas de citometria de fluxo para CD8 + respostas de células T Anál...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Imaginologia todo animal e técnicas de citometria de fluxo para CD8 + respostas de células T Análise do antigénio específico da Nanoparticle após vacinação

Full Text
13,787 Views
11:07 min
April 29, 2015

DOI: 10.3791/52771-v

Lukasz J. Ochyl1,2, James J Moon1,2,3

1Department of Pharmaceutical Sciences,University of Michigan, 2Biointerfaces Institute,University of Michigan, 3Department of Biomedical Engineering,University of Michigan

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Descrevemos técnicas baseadas em imagens de animais inteiros e citometria de fluxo para monitorar a expansão de células T CD8+ específicas do antígeno em resposta à imunização com nanopartículas em um modelo murino de vacinação.

O objetivo geral do experimento a seguir é sintetizar e caracterizar nanopartículas de vacinas à base de lipídios e avaliar sua capacidade de induzir a expansão de linfócitos T citotóxicos específicos do antígeno in vivo. Isso é obtido pela engenharia de patógenos que imitam vesículas multilam interbicamadas, reticuladas ou I CMVs co-carregados com antígeno e adjuvante para vacinação de camundongos virgens. Transferido adotivamente com luciferase expressando oito células T positivas para CD específico do antígeno.

Na segunda etapa, a expansão das células T positivas CD oito antígeno-específicas é avaliada por imagens in vivo de animais inteiros. As células mononucleares do sangue periférico colhidas dos animais imunizados com ICMV são então coradas com tetrâmeros marcados com fluorescência e analisadas por citometria de fluxo para quantificar a frequência das células T positivas CD oito antígeno específico endógeno dentro do compartimento sistêmico. Em última análise, a imagem bioluminescente pode ser usada para rastrear a expansão dos linfócitos T citotóxicos específicos do antígeno em resposta à vacinação com nanopartículas.

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Imunologia Edição 98 nanopartículas vacina biomaterial antígeno subunidade adjuvante citotóxico CD8 + linfócitos T imagem animal inteiro coloração tetrâmero e linfonodo

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