Name: Pintainho Coração Invasion Ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da Actividade de compostos potencialmente anti-invasivos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Aprenda o ensaio de invasão cardíaca em embrião de galinha para estudar a invasão de células tumorais em tecido vivo tridimensional. Este método permite testar compostos potencialmente anti-invasivos in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos a Marleen De Meulemeester por demonstrar a técnica de ensaio no vídeo-filme. B. I. R. é pesquisador de pós-doutorado da Fundação de Pesquisa – Flandres (FWO – Vlaanderen). L.M.M. recebeu uma bolsa Emmanuel van der Schueren da Liga Flamenga contra o Câncer (Vlaamse Liga tegen Kanker).

<ol><li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Van Roy, F. M., de Baetselier, P. Molecular mechanisms of cancer invasion. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMareel%2C+MM+%22Encyclopedia+of+Cancer%22">Encyclopedia of Cancer</a>. JR, B. ertino 2, Academic Press. San Diego. 1072-1083 (1997).</li>
<li>Mareel, M., Kint, J., Meyvisch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+study+of+the+invasion+of+malignant+C3H+mouse+fibroblasts+into+embryonic+chick+heart+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch.+B.+Cell+Pathol.+Incl.+Mol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methods of study of the invasion of malignant C3H mouse fibroblasts into embryonic chick heart in vitro.</a> Virchows Arch. B. Cell Pathol. Incl. Mol. Pathol. 30 (1), 95-111 (1979).</li>
<li>Albini, A., Noonan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%E2%80%98chemoinvasion%E2%80%99+assay%2C+25+years+and+still+going+strong%3A+the+use+of+reconstituted+basement+membranes+to+study+cell+invasion+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The ‘chemoinvasion’ assay, 25 years and still going strong: the use of reconstituted basement membranes to study cell invasion and angiogenesis.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22 (5), 677-689 (2010).</li>
<li>De Wever, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+and+spheroid+collagen+type+I+invasion+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Single cell and spheroid collagen type I invasion assay.</a> Methods Mol. Biol. 1070, 12-35 (2014).</li>
<li>Wolff, E., Schneider, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((La+transplantation+prolong%C3%A9e+d%E2%80%99un+sarcome+de+souris+sur+des+organes+embryonnaires+de+poulet+cultiv%C3%A9s+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22C.R.+Seances+Soc.+Biol.+Fil%22%5BJournal%5D)">La transplantation prolongée d’un sarcome de souris sur des organes embryonnaires de poulet cultivés in vitro.</a> C.R. Seances Soc. Biol. Fil. 151 (7), 1291-1292 (1957).</li>
<li>Easty, G. C., Easty, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+organ+culture+system+for+the+examination+of+tumor+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An organ culture system for the examination of tumor invasion.</a> Nature. 199, 1104-1105 (1963).</li>
<li>Schleich, A. B., Frick, M., Mayer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+invasive+growth+in+vitro.+Human+decidua+graviditatis+confronted+with+established+human+cell+lines+and+primary+human+explants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Patterns of invasive growth in vitro. Human decidua graviditatis confronted with established human cell lines and primary human explants.</a> J. Natl. Cancer Inst. 56 (2), 221-237 (1976).</li>
<li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+In+ovo+CAM-assay+as+a+Xenograftodel+for+Sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The In ovo CAM-assay as a Xenograftodel for Sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Bracke, M. E., Van Larebeke, N. A., Vyncke, B. M., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+modulates+both+invasion+and+plasma+membrane+ruffling+of+MCF-7+human+mammary+carcinoma+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid modulates both invasion and plasma membrane ruffling of MCF-7 human mammary carcinoma cells in vitro.</a> Br. J. Cancer. 63 (6), 867-872 (1991).</li>
<li>Vermeulen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+the+noninvasive+to+the+invasive+phenotype+and+loss+of+alpha-catenin+in+human+colon+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Transition from the noninvasive to the invasive phenotype and loss of alpha-catenin in human colon cancer cells.</a> Cancer Res. 55 (20), 4722-4728 (1995).</li>
<li>Parmar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-invasive+activity+of+3%2C7-dimethoxyflavone+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharma.+Sci%22%5BJournal%5D)">Anti-invasive activity of 3,7-dimethoxyflavone in vitro.</a> J. Pharma. Sci. 83 (9), 1217-1221 (1994).</li>
<li>Parmar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-invasive+activity+of+alkaloids+and+polyphenolics+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anti-invasive activity of alkaloids and polyphenolics in vitro.</a> Bioorg. Med. Chem. 5 (8), 1609-1619 (1997).</li>
<li>Gaillard, P. J. Organ culture technique using embryologic watch glasses. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGaillard%2C+PJ+%22Methods+in+Medical+Research%22">Methods in Medical Research</a>. MB, V. isser 2, Year Book Publishers. Chicago. 241-24 (1951).</li>
<li>Romeis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Das+mikrotom%5BTitle%5D)+AND+%22Mikroskopische+Technik.+15+Verb.+Aufl.+Kapitel%22%5BJournal%5D)">Das mikrotom.</a> Mikroskopische Technik. 15 Verb. Aufl. Kapitel. 7, München: Leibniz. 114-120 (1948).</li>
<li>Van Marck, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-cadherin+promotes+cell-cell+adhesion+and+counteracts+invasion+in+human+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">P-cadherin promotes cell-cell adhesion and counteracts invasion in human melanoma.</a> Cancer Res. 65 (19), 8774-8783 (2005).</li>
<li>Attia, M. A., Weiss, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+spontaneous+mammary+carcinomas+in+mice.+V.+Acquired+tumor+resistance+and+enhancement+in+strain+A+mice+infected+with+mammary+tumor+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Immunology of spontaneous mammary carcinomas in mice. V. Acquired tumor resistance and enhancement in strain A mice infected with mammary tumor virus.</a> Cancer Res. 26 (8), 1787-1800 (1966).</li>
<li>Katritzky, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QSAR+modeling+of+anti-invasive+activity+of+organic+compounds+using+structural+descriptors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">QSAR modeling of anti-invasive activity of organic compounds using structural descriptors.</a> Bioorg. Med. Chem. 14 (20), 6933-6939 (2006).</li>
<li>McKinnell, R. G., Bruyneel, E. A., Mareel, M. M., Seppanen, E. D., Mekala, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+in+vitro+by+explants+of+Lucke+renal+carcinoma+cocultered+with+normal+tissue+is+temperature+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Invasion in vitro by explants of Lucke renal carcinoma cocultered with normal tissue is temperature dependent.</a> Clin. Exp. Metastasis. 4 (4), 237-243 (1986).</li>
<li>Wanson, J. C., de Ridder, L., Mosselmans, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+hyperplastic+nodule+cells+from+diethylnitrosamine+treated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Invasion of hyperplastic nodule cells from diethylnitrosamine treated cells.</a> Cancer Res. 41 (12 Pt 1), 5162-5175 (1981).</li>
<li>Mareel, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature+on+invasion+of+MO4+mouse+fibrosarcoma+cells+in+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature on invasion of MO4 mouse fibrosarcoma cells in organ culture.</a> Clin. Exp. Metastasis. 2 (2), 107-125 (1984).</li>
<li>Laerum, O. D., Steinsvag, S., Bjerkvig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+tissue+culture+of+the+central+nervous+system%3A+recent+developments+and+current+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Cell and tissue culture of the central nervous system: recent developments and current applications.</a> Acta Neurol. Scand. 72 (6), 529-549 (1985).</li>
<li>Schroyens, W., Mareel, M. M., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+invasiveness+of+human+bladder+cancer+from+cell+lines+and+biopsy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vitro invasiveness of human bladder cancer from cell lines and biopsy specimens.</a> Clin. Exp. Metastasis. 1 (2), 153-162 (1983).</li>
<li>Mareel, M. M., De Bruyne, G. K., Vandesande, F., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+study+of+embryonic+chick+heart+invaded+by+malignant+cells+in+three+dimensional+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invasion+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical study of embryonic chick heart invaded by malignant cells in three dimensional culture.</a> Invasion Metastasis. 1 (3), 195-204 (1981).</li>
<li>Bjerkvig, R., Laerum, O. D., Mella, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioma+cell+interactions+with+fetal+rat+brain+aggregates+in+vitro+and+with+brain+tissue+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Glioma cell interactions with fetal rat brain aggregates in vitro and with brain tissue in vivo.</a> Cancer Res. 46 (8), 4071-4079 (1986).</li>
<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confrontation+of+an+invasive+%28MO4%29+and+a+non-invasive+%28MDCK%29+cell+line+with+embryonic+chick+heart+fragments+in+serum-free+culture+media%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Confrontation of an invasive (MO4) and a non-invasive (MDCK) cell line with embryonic chick heart fragments in serum-free culture media.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. 22 (9), 508-514 (1986).</li>
<li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Storme, G. A. Mechanisms of tumor spread: a brief overview. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMareel%2C+MM+%22Cancer+Campaign.+9%3A+The+Cancer+Patient%22">Cancer Campaign. 9: The Cancer Patient</a>. Grundmann, E. , Gustav Fisher Verlag. Stuttgart and New York. 59-64 (1985).</li>
<li>De Neve, W. J., Storme, G. A., De Bruyne, G. K., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+analysis+system+for+the+quantification+of+invasion+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metast%22%5BJournal%5D)">An image analysis system for the quantification of invasion in vitro.</a> Clin. Exp. Metast. 3 (2), 87-101 (1985).</li>
<li>Smolle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+melanoma+cell+invasion+in+three-dimensional+confrontation+cultures+in+vitro+using+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of melanoma cell invasion in three-dimensional confrontation cultures in vitro using automated image analysis.</a> J. Invest. Dermatol. 94 (1), 114-119 (1990).</li>
<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((flavonoid+effect+on+tumor+invasion+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Technol%22%5BJournal%5D)">flavonoid effect on tumor invasion and metastasis.</a> Food Technol. 48 (11), 121-124 (1994).</li>
<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+tangeretin+on+tamoxifen%E2%80%99s+therapeutic+benefit+in+mammary+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">The influence of tangeretin on tamoxifen’s therapeutic benefit in mammary cancer.</a> J. Natl. Cancer Inst. 91 (4), 354-359 (1999).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Durante a preparação de PHF, os fragmentos não pode ficar em suspensão, mas aderir à parede do vaso; isso pode ser superado através do aumento do volume do meio de cultura. Se o número de PHF é muito baixo e o seu tamanho é muito grande, diminuir o volume do meio de cultura. A falha das células de teste para agregar pode ser devido a flutuações na temperatura ou a infecção microbiana. Alternativamente, uma incapacidade de agregado pode ser uma característica intrínseca das células. Durante a fixação dos agregados para P...

Invasão é a marca de tumores malignos. Esta actividade não só conduz à destruição dos tecidos circundantes, mas também está implicada na formação de metástases. Uma vez que doentes com cancro morrem de invasão e metástase, e tratamentos anti-invasivos eficientes são ainda escassos, ensaios de laboratório que simulam a invasão de células tumorais têm sido desenvolvidos. O objectivo do ensaio de coração de galinha é oferecer um método de cultura de órgão relevante para estudar a invasão do tumor em três dimensões. O ensaio consegue distinguir entre as células invasivas e não invasivas, e permite estudar os efeitos dos compostos de teste na invasão tumoral. A lógica por trás da utilização do ensaio é o próprio conceito de que os tumores são ecossistemas em que as células neoplásicas interagem de forma contínua com o seu estroma (células hospedeiras e de matriz extracelular), e que por elas invasão interacções moleculares é uma sintonia fina. Assim, no ensaio de células de tumor são confrontados com livifragmentos ng embrionárias coração pintainho 2, que servem não só como substrato para a invasão de células tumorais, mas também como uma fonte de diferentes tipos de células do estroma e de elementos de matriz. O coração de galinha contém os miócitos, os fibroblastos e as células endoteliais, e a matriz extracelular é composta de laminina, fibronectina e diferentes tipos de colagénio. Desta forma, a técnica de cultura de órgãos tridimensional abrange muitas interacções celulares e moleculares envolvidas na invasão de tumores de doentes. A principal vantagem do ensaio de coração de galinha é a implementação de efeitos estromais. Este aspecto é mais completa do que em outros ensaios de invasão in vitro que se baseiam na invasão de células tumorais em géis não vivos compostos de membrana basal 3 ou 4 moléculas de matriz intersticial. O conceito de confronto entre as células tumorais eo tecido hospedeiro vivo normal, como encontrados em experiências de cultura de órgãos foi apresentado por váriosautores incluindo Wolff e Schneider em França 5, Easty e Easty no Reino Unido 6 e 7 Schleich na Alemanha. Duas vantagens técnicas do ensaio de invasão coração pintainho em relação aos métodos citados é que o volume dos fragmentos podem ser facilmente padronizados, e que eles permanecem contráctil, o que permite a monitorização da integridade funcional durante a cultura de órgãos. Além disso, são preferidos os embriões de aves, porque eles podem ser facilmente dissecado a partir do conteúdo do ovo esterilizada. O ensaio tem semelhança conceptual para o ensaio de membrana pintainho chorioallantois 8, oferecendo um complexo do estroma circundante para as células tumorais. O ensaio tem sido aplicado com sucesso para distinguir entre variantes de células invasivas e não invasivas dos mesmos tumores humanos, tais como na MCF-7 (mamária) 9 e HCT-8 (do cólon) 10 famílias de linhas celulares. A técnica é útil para testar compostos potencialmente anti-invasivas bem <sup&gt; 11,12. Como explicado mais adiante, que pode ser usado para o estabelecimento de relações de moléculas orgânicas pequenas estrutura-actividade. O ensaio, no entanto, não levam em conta a contribuição de células imunológicas a invasão câncer. Deve ser salientado que a técnica não pode ser considerada como um sistema de análise de alto rendimento, por causa do elevado número de manipulações, o número limitado de passos do ensaio (máximo de 30 culturas) e o tempo de rotação (cerca de 1 mês).

<table><tbody><tr><td>Solução salina de Ringer</td><td>Braun</td><td>CEO123</td><td></td></tr><tr><td>Bacto-ágar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Tris-(hidroximetil)-aminometano Analar</td><td>VWR</td><td>103157P</td><td></td></tr><tr><td>BSA : albumina de soro bovino, fractor de Cohn V.</td><td>Sigma</td><td>A4503-500G</td><td></td></tr><tr><td>MEM-Rega 3</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td></td><td></td>19993013</tr><tr><td>Agitadores giratórios</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>G10 e G33</td><td></td></tr><tr><td>Frascos Erlenmeyer 50 ml</td><td>Novolab</td><td>92717</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de vidro</td><td>Novolab</td><td>68516</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de iridectomia</td><td>Rumex</td><td>11-0625</td><td></td></tr><tr><td>Macroscópio com grade ocular calibrada</td><td>Wild</td><td>157702</td><td></td></tr><tr><td>Produtos</td><td>médicos internacionais</td> de cera de parafina <td>8599956</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma</td><td>230251-25g</td><td></td></tr> Resina de lamínula <tr><td>Sigma</td><td>HHS32-1L</td><td></td>de<td>hematoxilina de Harris</td></tr><tr><td>(Tissue-Tek)</td><td>Sakura</td><td>4494</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de fusão de parafina</td><td>GFL</td><td>1052</td><td></td></tr><tr><td>Micrótomo para seccionamento de parafina</td><td>Reichert</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stppers para frascos Erlemeyer com entrada e saída de gás</td><td>Novolab</td><td>2602421 e 260243</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobenzidina</td><td>Sigma</td><td>D8001</td><td></td></tr><tr><td>Mesa de balanço REAX</td><td>Heidolph</td><td>54131</td><td></td></tr><tr><td>Placas de tecido de 24 poços</td><td>VWR</td><td>NUNC142475</td><td></td></tr><tr><td>Colher de enucleação oftalmológica</td><td>Rumex</td><td>16-060</td><td></td></tr><tr><td>Pinça afiada</td><td>Rumex</td><td>4-111T</td><td></td></tr><tr><td>Pinça romba</td><td>Nickel-Electro LTD</td><td>7112</td><td></td></tr><tr><td>Frascos Erlenmeyer 5 ml</td><td></td><td>Novolab 211901</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio lavadas e desengorduradas</td><td>Produtos médicos internacionais</td><td>8613908</td><td></td></tr></tbody></table>

pintainho coração invasion ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da actividade de compostos potencialmente anti-invasivos

Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

O objectivo do ensaio de coração de galinha é oferecer um método de cultura de órgão relevante para estudar a invasão do tumor em três dimensões. O ensaio consegue distinguir entre as células invasivas e não invasivas, e permite estudo dos efeitos dos compostos de teste na invasão tumoral. As células cancerosas - quer como agregados ou células individuais - são confrontados com fragmentos de coração de galinha embrionário. Após cultura de órgãos em suspensão durante alguns dias ou semanas que confrontam as culturas são fixadas e incluídas em parafina para análise histológica. A interacção tridimensional entre as células cancerosas e o tecido normal é então reconstruído a partir de cortes seriados corados com hematoxilina-eosina ou após coloração imuno-histoquímica para epitopos no tecido cardíaco ou as células cancerosas que confrontam. O ensaio é consistente com o conceito recente que a invasão do câncer é o resultado de interações moleculares entre as células cancerosas e seus elementos hospedeiros do estroma vizinho (miofibroblastos, endothElial células, componentes da matriz extracelular, etc.). Aqui, neste ambiente estromal é oferecido para as células cancerosas como um fragmento de tecido vivo. Aspectos de apoio para a relevância do ensaio são múltiplas. Invasão no ensaio está de acordo com os critérios de invasão do câncer: ocupação progressiva e substituição no tempo e no espaço do tecido hospedeiro, e capacidade de invasão e não-invasivo in vivo das células que confrontam geralmente se correlaciona com o resultado do ensaio. Além disso, o padrão de invasão de células in vivo, tal como definido por patologistas, reflecte-se nas imagens histológicas no ensaio. A análise quantitativa relação estrutura-actividade (QSAR) dos resultados obtidos com vários compostos orgânicos congéneres potencialmente anti-invasivos permitiu o estudo das relações estrutura-actividade de flavonóides e calconas, e conhecidas drogas anti-metastáticos utilizados na clínica (por exemplo, inibidores de microtúbulos ) inibir a invasão no ensaio bem. However, o ensaio não leva em conta as contribuições imunológicas a invasão câncer.

Os cortes histológicos tal como apresentado na Figura 5 mostra o resultado final de um número de ensaios bem sucedidos. A histologia de som das culturas indica as células viáveis ​​e permite interpretar a interacção entre as células de tumor e tecido normal. Além disso, qualquer reacção imunitária do tecido normal pode ser observado, o que confirma a idade correcta dos embriões de galinha utilizados, por exemplo, antes de o sistema de rejeição imunitária é desenvolvida. Não há bactérias visíveis, o que indica a...

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar a invasão das células tumorais em fragmentos de tecido normal vivendo em três dimensões. Esta técnica de cultura de órgãos é aplicada principalmente para testar drogas potencialmente anti-invasivos in vitro.

Pintainho Coração Invasion Ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da Actividade de compostos potencialmente anti-invasivos

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

O objetivo geral deste procedimento é oferecer um método de cultura de órgãos relevante para o estudo da invasão tumoral em três dimensões. Isso é realizado primeiramente preparando fragmentos de tecido normal obtidos de corações de embriões de galinha. Na segunda etapa, agregados de células tumorais são preparados em suspensão.Os agregados de células tumorais são então confrontados individualmente com fragmentos de tecido normal sobre uma base de ágar semi-sólida para incubação em cultura de suspensão. Na etapa final, as culturas confrontantes são fixadas para inclusão em parafina e seccionamento histológico. Por fim, a invasão das células tumorais nos fragmentos de tecido pode ser visualizada por meio de análise microscópica seriada dos cortes teciduais.A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como ensaios de invasão com géis, é que, com esta técnica, as células tumorais são confrontadas com fragmentos de tecido vivo tridimensionais. As implicações desta técnica estendem-se à terapia do câncer, pois existe uma necessidade não atendida de fármacos anti-invasivos. Geralmente, indivíduos novos neste método enfrentam dificuldades, e o motivo é que eles desconsideram a importância de utilizar as dimensões específicas do fragmento de tecido e dos agregados de células tumorais.Embora este método possa fornecer informações sobre a invasão cancerígena, ele também pode ser aplicado a outros sistemas. Por exemplo, estudar a invasão de tecidos periféricos por células inflamatórias ou a integração de células-tronco em tecido cardíaco. Na cultura supreme, os fragmentos de coração de pintinho começam com a incubação de um ovo fertilizado a 37 graus Celsius por nove dias.No nono dia, desinfete a casca com etanol 70%. Em seguida, em uma cabine de cultura de tecidos, use pin&ccedil;as rombas para abrir a casca. Depois, posicione uma colher de enuclea&ccedil;&atilde;o ao redor do pesco&ccedil;o do embri&atilde;o e puxe o embri&atilde;o para fora da casca.Coloque o embrião em uma placa de Petri de vidro de cinco centímetros contendo cinco mililitros de solução salina de Ringer. Em seguida, segure uma pinça fina em cada mão. Abra o corte a pele torácica ventral, remova o esterno e use tesoura de iridectomia para dissecar o coração e desconectar seus principais vasos sanguíneos.Transfira o coração para um novo recipiente de vidro de cinco centímetros de diâmetro contendo cinco mililitros de meio de cultura, suplementado com 5% de soro bovino fetal, sob um microscópio com uma grade ocular calibrada. Usando tesoura de microdissecção, resseque o terço cranial superior do coração para remover as aurículas e os vasos associados.Em seguida, utilize pinças finas para dissecar o pericárdio dos ventrículos. A seguir, faça uma secção hemi sagital nos ventrículos e remova o sangue. Então, transfira os ventrículos para outro recipiente de Petri de cinco centímetros contendo cinco mililitros de meio de cultura fresco e soro bovino fetal, e corte o tecido em pedaços com diâmetro de 0,4 milímetro.Quando todos os ventrículos tiverem sido cortados, gire suavemente o recipiente para direcionar todos os fragmentos para o centro do recipiente. Em seguida, use uma agulha de aço inoxidável para mover todas as Cora Eliana para a periferia da placa de Petri. Agora, use uma pipeta de vidro Pasteur para transferir os fragmentos cardíacos para um frasco Erlenmeyer de 50 mililitros coberto com uma fina película de cultura.Gasifique o frasco com 5% de dióxido de carbono e incube os fragmentos em um agitador rotatório a 37 graus Celsius com 70 rotações por minuto durante 24 horas. No dia seguinte, transfira os fragmentos para uma placa de Petri e use uma agulha para descartar o Corporal Eliana, os fragmentos escuros necróticos e quaisquer conglomerados de tecido. Incube os fragmentos em um frasco erlenmeyer de 50 mililitros contendo seis mililitros de meio de cultura no agitador rotatório por mais 60 horas; dois dias e meio depois, use o microscópio e agulhas para selecionar os fragmentos esteroidais que exibem uma camada fina e homogênea de células fibroblásticas e um diâmetro de 0,4 milímetros.Em seguida, transfira os fragmentos cardíacos pré-cultivados para outra placa de Petri contendo meio de cultura fresco. Três dias antes do início do cultivo confrontante, suspenda 100.000 células de teste por mililitro em seis mililitros do meio de cultura apropriado em um frasco erlenmeyer de 50 mililitros. Em seguida, incube o frasco em agitador rotatório a 37 graus Celsius e 70 rotações por minuto, com a porcentagem apropriada de dióxido de carbono.Após 72 horas, visualize os agregados ao microscópio e selecione os agregados de células esteroides com diâmetro de 0,2 milímetros. Em seguida, transfira oito fragmentos de coração pré-cultivados de 0,4 milímetros, suspensos em uma quantidade mínima de meio de cultura, para uma placa de vidro embriológica contendo meio de ágar semi-sólido.Mova os fragmentos para dentro de um círculo e use um pequeno pedaço de papel de filtro para aspirar o meio em excesso. Coloque 10 dos agregados de células esteroides de 0,2 milímetros dentro do círculo. Após remover o meio em excesso, mova um agregado em direção a cada um dos fragmentos cardíacos pré-cultivados até que entrem em contato uns com os outros.Agora, feche a tampa do vidro de relógio com parafina e incube a cocultura a 37 graus Celsius por quatro a 24 horas, dependendo das propriedades adesivas das células-teste aos fragmentos cardíacos pré-cultivados. Ao final da incubação, imerja um par confrontante em meio de cultura pré-aquecido a 37 graus Celsius e use uma pipeta de Pasteur para transferir cada par para frascos individuais de Erlenmeyer de cinco mililitros contendo 1,5 mililitro de meio de cultura cada. Em seguida, incube os frascos no agitador rotatório a 37 graus Celsius e 120 rotações por minuto, com a porcentagem apropriada de dióxido de carbono fluindo através do sistema. Dois frascos Erlenmeyer suplementares de cinco mililitros preenchidos com dois mililitros de solução salina de Ringer para análise histológica dos confrontos.Após o período de incubação, transfira as culturas para solução salina de Ringer por alguns segundos para remover as proteínas séricas. Em seguida, transfira as pêras para placas de Petri individuais de três centímetros contendo três mililitros de solução Bowen Holland. Após duas horas, lave as culturas três vezes com três mililitros de água desmineralizada antes de incubá-las em água da torneira por duas horas para remover o máximo possível da solução fixadora.Por fim, transfira os pares para três mililitros de etanol 70% cada, por até vários dias. Nessas imagens de culturas bem-sucedidas, nenhuma reação imune pelo tecido normal pode ser observada, nem no tecido tumoral nem no cardíaco, confirmando que os embriões de galinha foram utilizados antes do desenvolvimento do sistema de rejeição imunológica. Além disso, não há bactérias visíveis, indicando ausência de contaminação acentuada durante o período de cultura.Além disso, a periferia arredondada das seções confirma que os cultivos existiram em suspensão, sem sinais de aderência temporária à parede do frasco erla mire. Muitos compostos foram testados com este ensaio de invasão em coração de embrião de galinha. Para aqueles que eram estruturalmente relacionados, foi estabelecida uma relação quantitativa entre estrutura e atividade com base nos resultados do ensaio, sendo os dados demonstrativos de uma correlação clara entre as atividades anti-invasivas previstas e experimentais.De fato, essa matriz de confusão pode ser usada para resumir as fraquezas e as forças do ensaio, fornecendo uma expressão aproximada da precisão e da reprodutibilidade do experimento. Ao tentar este novo procedimento, é extremamente importante seguir rigorosamente as dimensões prescritas dos fragmentos de tecido seguindo este procedimento. Outros métodos, como confrontação com células não cancerosas, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como: células inflamatórias invadem?Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como discriminar entre células tumorais invasivas e não invasivas. Não se esqueça de que o trabalho com fixadores pode ser extremamente perigoso e precauções, como ventilação de ar, devem ser tomadas ao realizar este procedimento.

chick-heart-invasion-assay-for-testing-invasiveness-cancer-cells

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra como medir a invasão celular por meio de inserções de cultura celular utilizando uma metodologia baseada em fluorescência.

Um In vitro FluoroBlok Assay invasão tumoral

A técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir Invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas

Fluxo de fluido intersticial é elevada em tumores sólidos e pode modular a invasão de células tumorais. Descrevemos aqui uma técnica para aplicar o fluxo de fluido intersticial para as células embebidas numa matriz e, em seguida medir os seus efeitos sobre a invasão celular. Esta técnica pode ser facilmente adaptado para estudar outros sistemas.

Um modelo tridimensional de Cultura Celular para avaliar os efeitos de fluxo de fluido intersticial na invasão da célula tumoral

Este vídeo descreve um ensaio de invasão usando uma matriz de três câmaras baseada em impedância elétrica. Esta técnica mede o potencial invasivo das células cancerígenas sob a influência de fatores solúveis secretados pelas células estromais residentes em microambientes tumorais.

Ensaio de impedância baseado em matriz de três câmaras: uma técnica de análise em tempo real para avaliar o potencial invasivo de células cancerígenas medindo a impedância elétrica

Comumente usado, são descritos métodos altamente acessíveis para analisar a migração celular e invasão in vitro. O primeiro método é o ensaio de encerramento de feridas de células que mede a mobilidade celular. O segundo método é o ensaio de migração e invasão transwell que avalia o quimiotáctica e capacidade invasiva de células.

Na migração celular in vitro e invasão Ensaios

Este artigo em vídeo descreve um método in vitro modificado para examinar o papel dos hormônios, citocinas e/ou fatores de crescimento na condução da invasão de células cancerígenas.

A modificação<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Ensaio para determinar o possível papel dos hormônios, citocinas e / ou fatores de crescimento na Cancer Mediating Invasion celular

Este método avalia a invasão de células cancerígenas de esferóides em uma matriz 3D circundante.  Os esferoides são gerados através do método de cultura de gota suspensa e, em seguida, incorporados em uma matriz composta de materiais de membrana basal e colágeno tipo I.  A invasão dos esferóides é posteriormente monitorada.

A Cancer Cell Spheroid Ensaio para avaliar a invasão em um ambiente 3D

Este protocolo descreve um ensaio de invasão vertical invertida que poderia ser usado para quantificar os recursos de migração e invasão de células em uma configuração tridimensional, preservando o microambiente celular. Este ensaio é adequado para células raras e/ou sensíveis.

Se movendo para cima: Um simples e flexível em Vitro invasão tridimensional protocolo do ensaio

O ensaio de invasão celular in vitro é utilizado para medir o potencial de metástase oncológica, quantificando o potencial celular para invasão e migração usando inserções de cultura celular contendo matriz proteica. As células são desafiadas a migrar através da matriz proteica e uma membrana porosa, em direção a um quimioatractivo, e depois quantificada por microscopia de luz.

O uso de células tumorais do rato mamário em um ensaio de invasão in vitro como medida de comportamento de células oncogênicas

Este é um método eficaz para testar supressores ou condutores de metástase de câncer. As células, transduzidas com uma biblioteca de expressão, são injetadas na vasculatura da membrana corioallantóica do frango para formar colônias metastáticas. Colônias que têm diminuído ou aumentado a invasividade são extirpadas, expandidas, reinjetadas para confirmar seu fenótipo e, finalmente, analisadas usando alto sequenciamento de rendimento.

Descoberta de reguladores metastáticos usando um modelo de membrana corioallantóica intravital rápida e quantitativa

Descrevemos uma abordagem para detectar e capturar subpopulações celulares invasivas em tempo real. O projeto experimental utiliza a Análise Celular em Tempo Real monitorando mudanças na impedância elétrica das células. Podem ser capturados câncer invasivo, células endoteliais ou estromais em tecidos complexos, e o impacto das co-culturas pode ser avaliado.

Detecção e Captura em Tempo Real de Subpopulações celulares invasoras de co-culturas

Aprenda o ensaio de invasão cardíaca em embrião de galinha para estudar a invasão de células tumorais em tecido vivo tridimensional. Este método permite testar compostos potencialmente anti-invasivos in vitro.

Pintainho Coração Invasion Ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da Actividade de compostos potencialmente anti-invasivos (Vídeo) | JoVE Journal

Pintainho Coração Invasion Ensaio para testar a invasão das células neoplásicas e da Actividade de compostos potencialmente anti-invasivos

Explorar mais vídeos