A "Patient-Like" Orthotopic Singênico Rato Modelo de carcinoma hepatocelular Metástase

A propagação metastática do câncer é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer. Nós fornecemos uma descrição detalhada da nossa metodologia cirurgia sobrevivência para o estabelecimento de um sistema modelo sing�ico rato "paciente-like" orthotopic para o estudo dos mecanismos de metástases em tumores de órgãos sólidos.

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um sistema de modelo de camundongo ortotópico para estudar os mecanismos de metástase no carcinoma hepatocelular. Isso é feito preparando primeiro as células de carcinoma hepatocelular de camundongo para implantação. Na segunda etapa, o abdômen de um animal singênico receptor é aberto e as células são cuidadosamente injetadas no lobo direito do fígado.

Em última análise, o sucesso e a reprodutibilidade dessa metodologia recomendam seu uso generalizado na elucidação dos mecanismos biológicos da metástase do carcinoma hepatocelular. A principal vantagem desta técnica sobre as técnicas existentes, como modelos de tumor de xenoenxerto de camundongo, é que nosso sistema de modelo de tumor genético singenético permite a investigação do papel da resposta imune na metástase tumoral. Demonstrando este procedimento comigo estará Michelle Nadu, uma estudante de graduação do nosso laboratório Para preparar as células para implantação, comece lavando uma cultura confluente de 60 a 70% de células de carcinoma hepatocelular duas vezes com cinco mililitros de PBS.

Incubar a cultura de células com dois mililitros de tripsina a 37 graus Celsius. Após cinco minutos, conte as células e dilua-as em cinco vezes 10 elevado a quinta células por mililitro de PBS. Em seguida, transfira alíquotas de 100 microlitros das células para um tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitro por camundongo e coloque as células no gelo.

Antes de iniciar o procedimento cirúrgico, confirme o nível adequado de anestesia pelo dedo do pé. Belisque, aplique pomada nos olhos de um camundongo adulto saudável de 16 a 20 gramas e faça a barba em uma área de aproximadamente uma polegada ao redor da linha média do abdômen do animal. Em seguida, amanheca um par de luvas de látex e lave a pele exposta várias vezes com um esfoliante desinfetante com sabão, seguido de um enxágue estéril de PBS por aproximadamente cinco minutos.

Quando a pele estiver preparada, descarte as luvas e coloque o equipamento de proteção individual adequado. Forneça uma fonte externa de calor para evitar hipotermia anestésica durante o procedimento e, em seguida, coloque fita cirúrgica nos membros e cauda do animal para fixar o camundongo em decúbito dorsal. Em seguida, faça uma incisão reta imediatamente inferior ao xifo esterno e use um afastador cirúrgico auto-retentor estéril para abrir o abdômen.

Quando o fígado estiver visível, aspire uma alíquota de células em uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 20 e, lenta e cuidadosamente, injete todos os 100 microlitros das células do carcinoma hepatocelular no lobo direito do fígado. Depois de remover a agulha, aplique um cotonete estéril por pelo menos um minuto para estancar qualquer sangramento. Em seguida, use uma sutura absorvível para fechar o tecido subcutâneo, seguido de fechamento da pele.

Com clipes cirúrgicos, limpe a ferida com outro esfoliante desinfetante e, por via subcutânea, administre 100 microlitros de soro fisiológico. Então, imediatamente após a cirurgia, transfira o mouse para uma gaiola limpa, sem acompanhantes e com cama de papel por pelo menos 24 horas. Esses fígados de camundongos BSY foram implantados com cinco vezes 10 para os seis um ME. Células de carcinoma hepatocelular de camundongo, como acabamos de demonstrar.

A evidência clínica clínica do desenvolvimento de carcinoma hepatocelular foi observável 63 dias depois, conforme indicado pela seta em um camundongo. Um tumor superficial foi observado na superfície do fígado com alguma fixação na parede abdominal. Os pulmões deste camundongo exibiram uma morfologia anormal, além de exibir áreas de necrose hemorrágica visível.

Em um segundo camundongo, o fígado parecia grosseiramente anormal com a anormalidade muito parecida com um tumor superficial como controle esperado. Os camundongos que não foram implantados não desenvolveram tumores no fígado ou nos pulmões. Uma vez dominado, este modelo ortotópico de camundongo singenético pode fornecer uma boa plataforma para elucidar os mecanismos biológicos de metástase e carcinoma hepatocelular.