Um protocolo para alojar ratos em um ambiente enriquecido

O objetivo deste procedimento é fornecer detalhes necessários para alojar e manter animais em enriquecimento ambiental, o que produz efeitos metabólicos e anticancerígenos robustos em camundongos. Isso é feito primeiro configurando o ambiente de habitação enriquecido em uma grande caixa com objetos como rodas, fontes de corrida, gaiolas, tubos, toras e gaiolas. O segundo passo é apresentar os animais ao novo ambiente.

Em seguida, o ambiente enriquecido é mantido alterando a localização e o tipo de objetos na lixeira e fornecendo alimentos frescos e água regularmente. A etapa final é limpar os objetos que foram substituídos no ambiente para que estejam prontos para serem trocados no futuro. Em última análise, após a eutanásia e análise de tecidos animais.

Esta técnica de enriquecimento ambiental mostra diminuição da adiposidade, aumento da resistência ao gasto energético contra a obesidade induzida pela dieta e uma mudança fenotípica de gordura branca para marrom ativando o eixo do adipócito neural do síngio hipotalâmico. Este método descreve detalhes sobre a configuração de um ambiente enriquecido para roedores de laboratório que aumenta a resistência ao câncer e doenças metabólicas. Primeiro, borrife e limpe o interior de uma grande caixa de enriquecimento com desinfetantes de esporicicidina.

Seguindo as instruções do fabricante, limpe a lixeira com 30% de etanol ou papel embebido em água da torneira, toalha e secador com uma toalha de papel para se livrar de qualquer cheiro do desinfetante anterior. Use iglus de tubos de plástico com rodas do tipo SOR e outros vários brinquedos de plástico semelhantes a brinquedos no ambiente enriquecido. Lave esses brinquedos como antes, use rodas de metal que foram lavadas como antes.

Se a tinta da roda começar a desbotar de modo que a roda fique barulhenta quando os animais correrem sobre ela, aplique uma pequena quantidade de vaselina onde a roda e o eixo se conectam. Use toras de madeira no ambiente enriquecido. Limpe as toras removendo qualquer roupa de cama ou outros detritos manualmente.

Em seguida, esterilize as toras autoclavando-as em um ciclo seco ou ciclo têxtil, que atinge uma temperatura de 121 graus Celsius por 15 minutos. Use gaiolas de alimentação limpas entre dimensões de 29 centímetros por 18 centímetros por 12,5 centímetros e 30,5 centímetros por 19 centímetros por 14 centímetros para segurar. Uma grade de alimentação e bebida faz um buraco de pelo menos cinco centímetros de diâmetro na parte inferior frontal da gaiola para os ratos entrarem e saírem.

Para começar. Para uma cama de animal de laboratório de espiga de milho de um quarto de polegada na caixa de enriquecimento limpa a grande a uma profundidade de dois a 2,5 centímetros. Em seguida, coloque duas ou três das toras de clave aórtica anteriores em um canto da caixa para sequestrar uma área de cerca de 1.225 centímetros quadrados.

Em seguida, na área isolada pelas toras, coloque três colas com rodas SOR por cima. Certifique-se de que as rodas tenham espaço para girar livremente. Agora junte o tubo de plástico de modo que vários braços se ramifiquem da peça de conexão central.

Coloque este tubo no meio da lixeira em dois cantos da lixeira. Coloque uma gaiola de alimentação cheia da mesma cama que a caixa. O orifício na frente de cada gaiola de alimentação deve estar voltado para o centro da caixa.

Coloque um fio de comida e água contendo ração de rato em cima de cada gaiola de alimentação. Adicione a garrafa de água. Coloque uma roda de 11,5 centímetros, uma roda de 20,5 centímetros e uma roda de 28 centímetros na lixeira.

Em seguida, coloque mais quatro a cinco gaiolas de plástico, como brinquedos ou túneis, em toda a caixa de enriquecimento. Cubra a lixeira com papel de filtro microisolador e use clipes de fichário para prender o papel de filtro na lixeira. Ao colocar animais no silo de enriquecimento de uma gaiola normal, coloque o cesto no contentor de lado, de modo a que os animais possam deslocar-se livremente do caixote normal para o silo de enriquecimento.

Não permita que os materiais de nidificação sejam transferidos para a caixa de enriquecimento. 10 a 20 animais com a mesma idade, sexo e linhagem genética podem ser alojados no ambiente enriquecido ao mesmo tempo. Certifique-se de que os animais sejam observados diariamente quanto a sinais de doença ou angústia.

Se necessário, manuseie os animais com cuidado para inspecionar melhor sua condição duas vezes por semana. Verifique os níveis de comida e água, garantindo que a comida e a água durem pelos próximos dois dias. Além disso, endireite as rodas de corrida e os brinquedos de enriquecimento para que fiquem espalhados e possam ser facilmente usados.

Substitua todos os itens de enriquecimento que estejam sujos uma vez por semana, de preferência quando os ratos forem removidos do ambiente. Para fins experimentais, remova as gaiolas de alimentação e as grades e substitua por gaiolas limpas e prateleiras cheias de alimentos frescos. Substitua as garrafas de água por garrafas de água limpa.

Reorganize crucialmente os itens de enriquecimento para que os principais aspectos da configuração sejam preservados, mas os itens de enriquecimento sejam colocados de forma diferente. Manchar. Verifique o resto da caixa de enriquecimento grande e limpe, se necessário. Retirando o lixo sujo e espalhando roupas de cama novas e limpas uma vez a cada duas semanas.

Ao realizar a criação semanal, lave os brinquedos à mão ou enviando-os através da lavagem da gaiola. Todos os meses, limpe a maior parte do lixo removendo brinquedos de enriquecimento e gaiolas de alimentação e retirando o lixo. Substitua por cama fresca, garantindo que haja dois centímetros de cama em todas as áreas da gaiola uma vez a cada três meses ou conforme exigido pelo protocolo do seu animal, remova todas as roupas de cama e brinquedos e desinfete a caixa de enriquecimento lavando como antes do controle da casa Agrupe os animais no mesmo ciclo claro escuro de 12 horas.

Como os camundongos no ambiente enriquecido em gaiolas micro isoladas, fornecem a mesma cama de espiga de milho na gaiola de controle e no ambiente enriquecido e adicionam um ninho de quatro centímetros por quatro centímetros iluminado com um ninho de fabricante maister alojado de três a cinco camundongos do mesmo sexo em uma gaiola de camundongo regular. Não forneça nenhum tubo de brinquedo ou gaiola na gaiola. Inclua uma grade na gaiola para guardar comida e uma garrafa de água se a gaiola não estiver conectada a um sistema de rega automático.

Monitore a saúde dos animais diariamente, garantindo que eles tenham bastante comida e água. Substitua ou limpe as gaiolas, fios de alimentação, comida e água. Uma vez por semana, limpe as gaiolas e as grades como antes.

Camundongos machos com três semanas de idade foram alojados em um ambiente enriquecido ou gaiolas de controle por cinco semanas antes da inoculação subcutânea do tumor com 10 a cinco células por animal. Os resultados mostram pesos do tumor de melanoma B 16 como 17 dias após a inoculação. Cada grupo foi composto por 10 animais.

O asterisco representa um valor de P inferior a 0,05 calculado pelo teste T dos alunos aqui. Camundongos com três semanas de idade foram submetidos ao enriquecimento ambiental por seis dias. Seis dias em ambiente enriquecido, diminuição retroperitoneal, tecido adiposo branco, peso da almofada de gordura.

Este gráfico mostra que seis dias em um ambiente enriquecido, diminuição do tecido adiposo marrom, tecido adiposo branco epidérmico e tecido adiposo branco retroperitoneal, pesos do coxim de gordura em relação ao peso corporal. Os próximos dois gráficos compartilham resultados de camundongos alojados em um ambiente enriquecido por quatro semanas, como visto aqui, quatro semanas em enriquecimento ambiental, diminuição do peso da almofada de gordura em todos os tipos de gordura, exceto no tecido adiposo marrom. Quatro semanas de enriquecimento ambiental, diminuição do peso da almofada de gordura em relação ao peso corporal para todos os tipos de gordura, exceto tecido adiposo marrom.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como configurar e manter um ambiente enriquecido que induza efeitos anticâncer e antiobesidade e camundongos.